腸道腺病毒的檢測和臨床意義

關(guān)于腸道腺病毒的檢測和臨床意義12一、定義及血清型第2頁,共36頁，2024年2月25日，星期天3

腸道感染病毒主要包括腸道病毒和急性胃腸炎病毒

腸道病毒

(小RNA病毒科)

輪狀病毒腸道腺病毒呼腸病毒科杯狀病毒星狀病毒第3頁,共36頁，2024年2月25日，星期天4腺病毒起源20世紀(jì)50年代初期，一位科學(xué)家對手術(shù)切除的人扁桃體增殖腺小塊進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時意外發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)的腺樣組織內(nèi)潛伏著一種未知的病毒，這種病毒可引起培養(yǎng)的單層細(xì)胞發(fā)生病變。由于這種病毒被首先發(fā)現(xiàn)于腺樣組織中，1956年國際病毒命名委員會將這類病毒命名為腺病毒，1962年正式命名為腺病毒科第4頁,共36頁，2024年2月25日，星期天5腺病毒血清型目前，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有100多種類型的腺病毒可以感染人、哺乳動物和禽類，其中能感染人類的腺病毒（人腺病毒）就有50多型，把人腺病毒的41個血清型分為A-F6個組：A-E組：各型病毒均能在人的組織細(xì)胞(如腎細(xì)胞)常規(guī)培養(yǎng)中增殖，稱為普通腺病毒；F組（40和41型）：是從糞便中發(fā)現(xiàn)，用常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)不能增殖的腺病毒，僅在選擇性細(xì)胞上生長，稱為腸道腺病毒。

第5頁,共36頁，2024年2月25日，星期天6流行性腺病毒胃腸炎廣泛分布于世界各地，在小兒，發(fā)病情況僅次于輪狀病毒性腸炎。最小發(fā)病年齡為1月，絕大多數(shù)發(fā)生于3歲以下的嬰幼兒。Ad-40主要感染1歲左右嬰兒，Ad-41則感染稍大的幼兒，全年均可發(fā)病，但腺病毒性胃腸炎一般呈散發(fā)性。第6頁,共36頁，2024年2月25日，星期天7腸道腺病毒通過消化道傳播，主要原因是因為樹突狀細(xì)胞缺乏腺病毒受體，不能感染附近淋巴結(jié)。流行性第7頁,共36頁，2024年2月25日，星期天8腺病毒胃腸炎的潛伏期約10天，主要表現(xiàn)為腹瀉，量少或多，呈水樣便或稀便，少數(shù)可排出粘液，病程4-8天，常伴嘔吐。部分患者有呼吸道癥狀，少數(shù)患者發(fā)熱，病程多自限，排毒時間約1周。某些患者失水較嚴(yán)重，個別重度失水者可死亡。流行性第8頁,共36頁，2024年2月25日，星期天9各型腺病毒所致腹瀉持續(xù)時間不等，以腸腺病毒胃腸炎腹瀉時間最長，大多患者有嘔吐，持續(xù)1-2天，少數(shù)有發(fā)熱。非腸型腺病毒腹瀉患者發(fā)熱較多。約20％腺病毒腸炎患者有呼吸道癥狀。流行性第9頁,共36頁，2024年2月25日，星期天10二、生物學(xué)性狀第10頁,共36頁，2024年2月25日，星期天11

雙鏈DNA病毒，二十面體立體對稱，無包膜。引起嬰兒病毒性腹瀉。

腺病毒電鏡圖腺病毒模式圖第11頁,共36頁，2024年2月25日，星期天12培養(yǎng)特性：人類腺病毒無敏感動物，也不能在雞胚中生長。但能在來源于人的多種細(xì)胞培養(yǎng)中增殖，引起明顯CPE：細(xì)胞腫脹變圓、集聚成葡萄串狀，并可在感染的細(xì)胞核內(nèi)形成嗜堿性包涵體。

生物學(xué)性狀第12頁,共36頁，2024年2月25日，星期天13抵抗力

腺病毒外膜無類脂質(zhì)包膜，故能耐乙醚和氯仿等脂溶劑；并能耐受蛋白酶及膽汁的作用。但不耐熱在室溫中可存活10d以上，56℃30min滅活。生物學(xué)性狀第13頁,共36頁，2024年2月25日，星期天14腺病毒的復(fù)制----嚴(yán)格按照日程表復(fù)制的病毒突出小結(jié)和六鄰體都必須插入細(xì)胞表面的受體分子，病毒才能被細(xì)胞攝入，被內(nèi)體包裹。在內(nèi)體的酸性環(huán)境中降解，進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，將DNA釋放到細(xì)胞核內(nèi)。腺病毒利用自身的DNA聚合酶進(jìn)行復(fù)制，先對一條親代鏈進(jìn)行互補(bǔ)復(fù)制，取代第二條親代鏈，然后DNA聚合酶再對第二條親代鏈進(jìn)行復(fù)制，因此，病毒DNA的兩條鏈都是連續(xù)的。第14頁,共36頁，2024年2月25日，星期天15三、致病性與免疫性第15頁,共36頁，2024年2月25日，星期天16對宿主防御的逃逸因為腺病毒復(fù)制緩慢，感染細(xì)胞容易受到宿主防御系統(tǒng)的攻擊，因此腺病毒有1/4的基因組用來對付宿主的防御系統(tǒng)。通過釋放兩種E1B蛋白來抑制細(xì)胞的凋亡，使受感染的細(xì)胞能支持到病毒完成復(fù)制。致病性和免疫性第16頁,共36頁，2024年2月25日，星期天17感染后期病毒復(fù)制組裝完成時，腺病毒產(chǎn)生病毒死亡蛋白給細(xì)胞致命一擊徹底釋放病毒。腺病毒制造VARNA來免遭干擾素的破壞，通過結(jié)合PKR，使之失活，使病毒蛋白質(zhì)合成。第17頁,共36頁，2024年2月25日，星期天18阻止MHC-I類分子在病毒感染細(xì)胞上表達(dá)以阻止CTL的攻擊。腺病毒合成RID蛋白結(jié)合病毒感染細(xì)胞的死亡受體以逃避天然殺傷細(xì)胞的攻擊。病毒利用自身的聚合酶進(jìn)行基因組復(fù)制，增加了抗原漂移的機(jī)會。第18頁,共36頁，2024年2月25日，星期天19腺病毒對呼吸道、胃腸道、尿道和膀胱、眼、肝臟等均可感染，人腺病毒約1/3的已知血清型通常與人類疾病相關(guān)，但一種血清型可引起不同的臨床疾患；相反，不同血清型也可引起同一種疾患。第19頁,共36頁，2024年2月25日，星期天20呼吸道感染呼吸道感染的典型癥狀是咳嗽、鼻塞和咽炎，同時伴有發(fā)熱、寒戰(zhàn)、頭痛和肌肉痛等，包括以下4種不同的綜合征：1．急性發(fā)熱性咽喉炎由C組病毒引起，出現(xiàn)咳嗽，鼻塞、發(fā)熱和咽喉部潰瘍等癥狀，這些表現(xiàn)難以與其他病毒引起的輕型呼吸道感染鑒別2．咽結(jié)膜熱多由B組腺病毒3和7型所致，愈后尚好，一般無后遺癥。3．急性呼吸道疾病多由腺病毒4、7型引起，也可見于3型4、肺炎腺病毒肺炎約占兒童期肺炎的10%，多由腺病毒3、7型引起；在青年人腺病毒肺炎的病死率為8%～10%第20頁,共36頁，2024年2月25日，星期天21眼部感染

腺病毒致輕型眼部感染是呼吸道感染和咽喉炎的并發(fā)癥。濾泡性結(jié)膜炎可由許多型腺病毒引起，類似于衣原體性結(jié)膜炎，而且為自限性。由腺病毒8、19和37型引起的角結(jié)膜炎為重型感染，具高傳染性，以急性結(jié)膜炎開始，擴(kuò)至耳前淋巴結(jié)，隨后發(fā)生角膜炎。胃腸炎許多腺病毒在腸道細(xì)胞中復(fù)制，隨糞便排出，但大多血清型與胃腸道疾病無關(guān)。而40型和41型腺病毒可引起嬰幼兒與年少（4歲以下）兒童的胃腸炎，致腹痛、腹瀉。C組腺病毒能引起某些嬰幼兒腸套疊。

第21頁,共36頁，2024年2月25日，星期天22其它疾病腺病毒11、12型能引起兒童急性出血性膀胱炎，尿中出現(xiàn)病毒。37型可引起女性宮頸炎和男性尿道炎，常由性傳播感染。在免疫功能低下者可引起偶發(fā)或嚴(yán)重的病毒感染，尤其在器官移植病人中發(fā)生嚴(yán)重呼吸道感染和病毒性肝炎，多由1、5和7型腺病毒引起。艾滋病患者可感染多種血清型腺病毒，并能出現(xiàn)抗原性介于中間的雜合型毒株，而且常為致死性腺病毒感染。主要原因是腺病毒的E1A蛋白可反式激活HIV的轉(zhuǎn)錄，加速HIV的復(fù)制。臨床發(fā)現(xiàn)37%的艾滋病患者病毒性腹瀉是由腺病毒所致。

第22頁,共36頁，2024年2月25日，星期天23免疫性腺病毒感染后，產(chǎn)生特異性抗體，對同型病毒的感染有保護(hù)作用，免疫力持久。

致病性和免疫性第23頁,共36頁，2024年2月25日，星期天24

四、腸道腺病毒診斷第24頁,共36頁，2024年2月25日，星期天25傳統(tǒng)方法病原分離培養(yǎng)后,應(yīng)用亞屬特異的免疫熒光測定法、放射免疫測定、ELISA、DNA雜交等進(jìn)行腺病毒亞屬的鑒定。再應(yīng)用型特異性血清進(jìn)行中和試驗。缺點：不僅費時費力,結(jié)果也不夠理想第25頁,共36頁，2024年2月25日，星期天26

病毒分離：標(biāo)本（患者咽喉、眼分泌物、糞便等）敏感細(xì)胞CPE分離株為抗原，用抗病毒診斷血清作CF試驗，確定是否為腺病毒；用已知腺病毒型特異性免疫血清做NT試驗可定型。亦可用直接或間接免疫熒光方法，檢測臨床診斷疑為腺病毒肺炎的嬰幼兒鼻咽部脫落細(xì)胞中的腺病毒抗原。微生物學(xué)檢查法第26頁,共36頁，2024年2月25日，星期天27血清學(xué)診斷

采取患者早期和恢復(fù)期雙份血清做CF試驗、HI試驗及NT試驗?；謴?fù)期血清抗體滴度比早期增長4倍以上有診斷意義。其中CF試驗最為常用。微生物學(xué)檢查法第27頁,共36頁，2024年2月25日，星期天28ELISA方法

檢測ADV抗原、抗體操作簡單、快速、特異性強(qiáng)，有助于臨床對疾病的早期明確診斷，結(jié)果判定用簡單的分光光度計，客觀準(zhǔn)確，3～4h即可出結(jié)果，可大批檢測，陽性率遠(yuǎn)優(yōu)于病毒分離，亦優(yōu)于血清學(xué)技術(shù)，適用于流行病學(xué)調(diào)查。IgM產(chǎn)生早于IgG，有利于早期診斷，IgG產(chǎn)生稍晚，雖不能早期診斷，但相當(dāng)一部分在7一14天內(nèi)檢測單份血IgG陽性再結(jié)合臨床也可診斷。第28頁,共36頁，2024年2月25日，星期天29胸部X線及CT影像表現(xiàn)

肺內(nèi)表現(xiàn)以多肺葉受累的肺實變?yōu)橹饕卣?，其中團(tuán)簇狀影尤為突出，此類團(tuán)簇狀影有較明顯的特征性，常密度較高、邊緣模糊、強(qiáng)化均勻。肺外表現(xiàn)以胸膜增厚和少量胸腔積液為主，少數(shù)患者出現(xiàn)縱隔氣腫或氣胸。小氣道改變多見。第29頁,共36頁，2024年2月25日，星期天30分子生物學(xué)Alland和Saitoh-Inagawa在六鄰體基因的β-管狀物形成P1區(qū)設(shè)計了一對引物，應(yīng)用PCR結(jié)合RFLP,即將腺病毒的特定序列用PCR擴(kuò)增后,其產(chǎn)物再用限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切圖譜分析優(yōu)點：法分辨率高、重復(fù)性好、簡單快速第30頁,共36頁，2024年2月25日，星期天31浙江蕭山醫(yī)院目前檢測方法腺病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）陽性率3.7%（12/322）平均年齡：8月齡，最大15月齡，最小4月齡。北京萬泰PCR-熒光探針（EV71、腸道病毒通用引物、柯薩奇病毒）陽性率12.5%（1/8）湖南圣湘第31頁,共36頁，2024年2月25日，星期天32五、防治原則第32頁,共36頁，2024年2月25日，星期天33腺病毒感染主要在冬春季流行，通過呼吸道和接觸傳播，其預(yù)防措施和預(yù)防其他呼吸道傳染病相似，主要是勤洗手，勤消毒，避免接觸患者及其呼吸道飛沫；平常多飲水，多吃蔬菜和水果，注意鍛煉身體；室內(nèi)多通風(fēng)，保持清潔；冬春流行季節(jié)盡量少去人員密集的公共場所，外出時戴口罩，以防感染。防治原則

預(yù)防第33頁,共36頁，2024年2月25日，星期天34正在使用和試用的疫苗有甲醛滅活疫苗和減毒活疫苗。但因腺病毒對新生地鼠有致癌作用，人們對于疫苗的作用難免有疑慮。最近有人研制腺病毒衣殼亞單位疫苗，可解決疫苗的安全性問題。目前尚無特效治療方法防治原則

疫苗第34頁,共36頁，2024年2月25日，星期天35腺病毒腸炎病情不重，一般不治自愈。主要