皮膚真菌檢查技術(shù)

關(guān)于皮膚真菌檢查技術(shù)真菌（Fungus）具有典型細胞結(jié)構(gòu)（細胞核、細胞器、細胞壁）細胞壁含幾丁質(zhì)和（或）纖維素無根、莖、葉，不含葉綠素以腐生或寄生方式攝取養(yǎng)料能進行有性生殖和（或）無性繁殖第一部分病原性真菌概述第2頁,共59頁，2024年2月25日，星期天對人類致病的真菌分為：

淺部真菌：侵犯皮膚、毛發(fā)、指甲，為慢性，對治療有頑固性，但影響身體較小，

深部真菌：可侵犯全身內(nèi)臟，嚴重的可引起死亡。此外有些真菌寄生于糧食、飼料、食品中，能產(chǎn)生毒素引起中毒性真菌病。

第3頁,共59頁，2024年2月25日，星期天一、生物學性狀

（一）形態(tài)結(jié)構(gòu)真菌細胞結(jié)構(gòu)比細菌復雜細胞壁為幾丁質(zhì)(Chitin)（多聚N－乙酰葡萄糖組成），并含葡聚糖，甘露聚糖及蛋白質(zhì)，某些酵母菌還含類脂體。細胞內(nèi)有較為典型的核結(jié)構(gòu)和細胞器。

第4頁,共59頁，2024年2月25日，星期天真菌形態(tài)分單細胞和多細胞兩類單細胞真菌主要為酵母和類酵母菌（如隱球菌、念珠菌），呈圓形或橢圓形。以出芽方式繁殖。多細胞真菌由菌絲和孢子組成菌絲分枝交織成團，形成菌絲體（Mycelium），并長有各種孢子，這類真菌即一般稱為霉菌（Mold）。由于生活環(huán)境（如營養(yǎng)、溫度、氧氣等）的改變，有些真菌的孢子與菌絲兩種形態(tài)可以互變，這類真菌稱為二相性真菌（dimorphicfungus），如球孢子菌、組織胞漿菌及芽生菌。

第5頁,共59頁，2024年2月25日，星期天真菌孢子和細菌芽胞的區(qū)別真菌孢子細菌芽胞抵抗力不強，60-70短時間殺死強，煮沸短時間不死數(shù)目一條菌絲可產(chǎn)生多個孢子一個細菌體只形成一個芽孢作用為繁殖方式之一不是繁殖方式形成位置可在細胞內(nèi)外形成只在細菌細胞內(nèi)形成形狀形態(tài)、色澤多樣圓形或橢圓形第6頁,共59頁，2024年2月25日，星期天真菌的形態(tài)構(gòu)成菌絲營養(yǎng)菌絲氣生菌絲→生殖菌絲孢子有性孢子由同一菌體或不同菌體上的二個細胞融合形成

絕大多數(shù)屬于非致病性真菌所具有

無性孢子分生孢子分生孢子梗的頂端或側(cè)面大分生孢子小孢子菌屬、表皮癬菌屬小分生孢子毛癬菌屬葉狀孢子菌絲細胞直接形成芽生孢子

隱球菌、念珠菌

關(guān)節(jié)孢子

厚膜孢子

新型隱球菌子囊孢子菌絲末端形成膨大的囊狀結(jié)構(gòu)即孢子囊，內(nèi)含很多孢子

根霉菌

第7頁,共59頁，2024年2月25日，星期天真菌菌絲形態(tài)第8頁,共59頁，2024年2月25日，星期天真菌孢子形態(tài)第9頁,共59頁，2024年2月25日，星期天第10頁,共59頁，2024年2月25日，星期天第11頁,共59頁，2024年2月25日，星期天（二）培養(yǎng)特性大多數(shù)真菌營養(yǎng)要求不高，常用沙保氏培養(yǎng)基（SDA）培養(yǎng)。淺部病原性真菌的最適溫度為22～28℃，生長緩慢，大多于1～4周出現(xiàn)典型菌落。深部病原性真菌培養(yǎng)在37℃中生長最好，生長較快，經(jīng)3-4天即長出菌落。第12頁,共59頁，2024年2月25日，星期天真菌菌落類型類型定義特征顏色舉例酵母型菌落為單細胞真菌的菌落，形態(tài)與一般細菌菌落相似，以出芽形式繁殖光滑、濕潤，一般為乳白色新型隱珠菌類酵母型菌落外觀似酵母菌落，但可見伸入培養(yǎng)基中的假菌絲，由伸長的芽生孢子形成光滑、濕潤，一般為乳白色白色念珠菌絲狀菌落為多細胞真菌的菌落，由許多管狀、分枝菌絲體組成絨毛狀、絮狀、粉末狀、顆粒狀、石膏狀?？僧a(chǎn)生各種色素。毛癬菌第13頁,共59頁，2024年2月25日，星期天第14頁,共59頁，2024年2月25日，星期天（三）變異性真菌易發(fā)生變異，在人工培養(yǎng)基中多次傳代或孵育過久，可出現(xiàn)形態(tài)結(jié)構(gòu)、菌落性狀、色素及毒力等改變。第15頁,共59頁，2024年2月25日，星期天（四）抵抗力真菌對干燥、陽光、紫外線及一般化學消毒劑有一定的耐受力，但充分暴露于陽光，紫外線及干燥情況下大多數(shù)真菌可被殺死，且對2.5%碘酒，10%福爾馬林都敏感，一般可用福爾馬林薰蒸被真菌感染的房間。對熱敏感，一般60℃1小時可殺死真菌菌絲和孢子。第16頁,共59頁，2024年2月25日，星期天二、致病性與免疫性

（一）致病性真菌引起的疾病大致包括真菌性感染：主要是外源性感染淺部真菌侵犯皮膚、指甲及須發(fā)等組織，頑強繁殖，發(fā)生機械刺激損害，同時產(chǎn)生酶及酸等代謝產(chǎn)物，引起炎癥反應和細胞病變。深部真菌侵犯皮下，內(nèi)臟及腦膜等處，引起慢性肉芽腫及壞死。2．條件致病性真菌感染：主要是內(nèi)源性感染（如白色念珠菌），亦有外源性感染（如曲霉菌）。第17頁,共59頁，2024年2月25日，星期天3．過敏性真菌?。河烧婢赃^敏原（如孢子抗原）引起過敏癥，如哮喘，變態(tài)反應性肺泡炎和癬菌疹等。4．真菌毒素中毒癥：

侵犯害肝、腎、腦、中樞神經(jīng)系統(tǒng)及造血組織。如黃曲霉毒素、某些鐮刀菌素和黑葡萄穗素。第18頁,共59頁，2024年2月25日，星期天（二）免疫性1．非特異性免疫：人類對真菌感染有天然免疫力。皮膚分泌短鏈脂肪酸和乳酸、血液中轉(zhuǎn)鐵蛋白、中性粒細胞和單核巨噬細胞的吞噬作用，以及正常菌群的拮抗作用。2．特異性免疫：真菌感染中細胞免疫是機體排菌殺菌及復原的關(guān)鍵，T細胞分泌的淋巴因子、以T細胞為主導的遲發(fā)型變態(tài)反應引起免疫病理損傷能局限和消滅真菌，以終止感染。第19頁,共59頁，2024年2月25日，星期天三、微生物學診斷

（一）

直接檢查1．不染色標本的直接鏡檢：直接采取標本制片、顯微鏡下直接觀察，若發(fā)現(xiàn)真菌菌絲或孢子存在時，即可初步判定為真菌感染。

1）標本制備：

2）檢查方法：

3）封固液：第20頁,共59頁，2024年2月25日，星期天①KOH溶液：本液適于檢查致密的難以透明的材料（如毛發(fā)、指甲、鱗屑等）。②墨汁：主要用于檢查有莢膜的真菌（如新型隱球菌等）。③水合氯醛－石炭酸－乳酸封固液：此液透明力較強，只限于不透明的標本。④生理鹽水：為觀察真菌的出芽現(xiàn)象可用生理鹽水代替氫氧化鉀溶液。

第21頁,共59頁，2024年2月25日，星期天第22頁,共59頁，2024年2月25日，星期天第23頁,共59頁，2024年2月25日，星期天2．染色標本檢查：1）革蘭氏染色：各種真菌均為革蘭氏陽性，為深藍色。常用于酵母菌、白色念珠菌、孢子絲菌、諾卡菌及組織胞漿菌等。

2）乳酸酚棉藍染色3）糖原染色：菌體均染成紅色。用于標本直接涂片及組織病理切片染色。4）嗜銀染色（GMS）：染成黑色。

第24頁,共59頁，2024年2月25日，星期天5）粘蛋白卡紅染色法（MCS）：主要用于新型隱球菌莢膜的染色。隱球菌莢膜和細胞壁呈紅色，細胞核呈黑色。6）熒光染色：主要使用吖啶橙和氫氧化鉀來染直接涂片、培養(yǎng)涂片及組織切片。第25頁,共59頁，2024年2月25日，星期天第26頁,共59頁，2024年2月25日，星期天（二）培養(yǎng)檢查本法可確定菌種，輔助直接檢查的不足；通常用沙保氏培養(yǎng)基（SDA）（22～28℃）；深部真菌可用血瓊脂或腦心葡萄糖血瓊脂37℃培養(yǎng)；第27頁,共59頁，2024年2月25日，星期天（三）免疫學試驗用于檢測深部感染真菌的抗體，作為輔助診斷組織胞漿菌、念珠菌、曲霉菌。檢測深部感染真菌的抗原，用于早期、快速、特異的診斷。

乳膠凝集法檢測新型隱球菌病患者的莢膜多糖抗原

ELISA法檢測白色念珠菌感染者的甘露聚糖抗原免疫熒光法檢測孢子絲菌病患者的可溶性抗原

第28頁,共59頁，2024年2月25日，星期天四、防治原則真菌感染尚無特異預防，主要注意公共衛(wèi)生和個人衛(wèi)生；碘化物治療孢子絲菌病、毛霉菌病有一定療效；制霉素、灰黃霉素、克霉唑（三苯甲霉唑）等外用或內(nèi)服對癬癥和白色念珠菌病等有較好療效；近年報道5-氟胞嘧啶（5-FC）治療單細胞真菌感染療效顯著；二性霉素B可用于深部全身真菌感染。第29頁,共59頁，2024年2月25日，星期天第二部分淺部真菌

淺部真菌主要為皮膚絲狀菌（Dermatophytes），侵犯皮膚、毛發(fā)、指甲等角化組織引起癬癥，又稱癬菌(Ringworm)，分為三屬，共37個種。第30頁,共59頁，2024年2月25日，星期天(一)、生物學特征皮膚癬菌的特征

屬名種數(shù)

侵犯部位形態(tài)特征皮膚指甲毛發(fā)大分生孢子小分生孢子菌絲毛癬菌屬

21+++細長、棒形、壁薄，少見或無梨形、棒形，較多見螺旋狀、鹿角狀、結(jié)節(jié)狀、球拍狀、破梳狀，單純細菌絲小孢子癬菌屬

15+-+紡錘形，壁較厚，較多見棒形，卵圓形，較少見球拍狀及破梳狀菌絲表皮癬菌屬

1++－梨形、壁較薄，多見無單純菌絲第31頁,共59頁，2024年2月25日，星期天（二）檢驗方法：1．直接鏡檢：直接采取病變部位的標本，用顯微鏡檢查有無菌絲及孢子的存在，本法迅速簡便，是臨床真菌檢查最常用的方法第32頁,共59頁，2024年2月25日，星期天2．分離培養(yǎng)：取毛發(fā)、皮屑、甲屑等標本，用70％乙醇消毒，接種沙保氏瓊脂斜面培養(yǎng)基，25℃培養(yǎng)7～14天，根據(jù)菌落形態(tài)及顏色、并挑取菌落鏡檢菌絲及孢子的特征進行鑒定。第33頁,共59頁，2024年2月25日，星期天毛癬菌屬第34頁,共59頁，2024年2月25日，星期天小孢子菌屬第35頁,共59頁，2024年2月25日，星期天表皮癬菌屬第36頁,共59頁，2024年2月25日，星期天3．熒光檢查：本法主要用于頭癬檢查。病發(fā)在濾過紫外燈照射下可發(fā)出不同色澤的熒光，如黃癬菌病發(fā)呈暗綠色熒光，白癬小孢子菌屬的病發(fā)呈亮綠色熒光等。第37頁,共59頁，2024年2月25日，星期天第三部分深部感染真菌深部真菌是侵犯皮下組織和內(nèi)臟，引起全身性感染的真菌。多數(shù)能引起慢性肉芽腫樣炎癥、潰瘍及壞死等病變第38頁,共59頁，2024年2月25日，星期天深部感染真菌分兩大類：

1.致病性真菌：

此類真菌在正常人體內(nèi)部不存在，一旦侵入機體，即可致病，如組織胞漿菌、球孢子菌、芽生菌等，屬外源性，我國少見；

2.條件致病性真菌：

是人體正常菌群的成員，當機體抵抗力下降時才致病，如新型隱球菌、白色念珠菌、曲霉菌和毛霉菌等。第39頁,共59頁，2024年2月25日，星期天一、白色念珠菌白色念珠菌（canidiaAlbicans）又稱白色假絲酵母菌，廣泛存在于自然界，也存在于正常人口腔，上呼吸道，腸道及陰道，一般在正常機體中數(shù)量少，不引起疾病。為條件致病性真菌。第40頁,共59頁，2024年2月25日，星期天（一）生物學特性卵圓形，大小2μm×4μm，革蘭氏染色陽性。有假菌絲。第41頁,共59頁，2024年2月25日，星期天培養(yǎng)特性：典型類酵母型菌落，表面光滑，呈灰白色或奶油色，有酵母氣味。涂片鏡檢，可看到表層為卵圓形芽生細胞，底層有較多假菌絲。

第42頁,共59頁，2024年2月25日，星期天（二）致病性和免疫性白色念珠菌可侵犯人體許多部位，可引起：1.皮膚念珠菌?。汉冒l(fā)于皮膚皺褶處；2.粘膜念珠菌?。葫Z口瘡、口角炎、陰道炎最多見。3.內(nèi)臟及中樞神經(jīng)念珠菌?。悍窝?、腸胃炎、心內(nèi)膜炎、腦膜炎、腦炎等。機體可產(chǎn)生一定免疫力。

第43頁,共59頁，2024年2月25日，星期天（三）檢驗方法及鑒定1．直接鏡檢：革蘭氏染色鏡檢2．培養(yǎng)特點：典型的酵母菌落。第44頁,共59頁，2024年2月25日，星期天3．鑒定試驗1）芽管試驗：取少許待檢的白色念珠菌接種于0.5ml人或兔血清中，混勻，直37℃水浴2-3h后，取出一接種環(huán)菌液，涂片、鏡檢。有芽管產(chǎn)生者為白色念珠菌，其他念珠菌不產(chǎn)生芽管。第45頁,共59頁，2024年2月25日，星期天2）TZC試驗：將白色念珠菌接種于含0.005％氯化三本四氮唑的沙保培養(yǎng)基中，經(jīng)22～25℃，24～48h培養(yǎng)，白色念珠菌不變色或僅淡紅色，其他念珠菌或酵母菌呈紅色或深紅色。3）糖發(fā)酵和糖同化試驗：

根據(jù)這兩種試驗可將常見的幾種念珠菌進行鑒別。

第46頁,共59頁，2024年2月25日，星期天4）動物實驗：本菌對兔有致病力。給兔耳靜脈注射本菌，經(jīng)4～5天死亡。解剖可見腎、肝腫脹、充血，并有小膿腫，涂片及培養(yǎng)均可見本菌及其假菌絲存在。

5）厚膜孢子形成試驗：本試驗亦是鑒定白色念珠菌的重要方法之一，在玉米粉聚山梨酯－80瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)本菌，鏡檢觀察到厚膜孢子及假菌絲。

第47頁,共59頁，2024年2月25日，星期天第48頁,共59頁，2024年2月25日，星期天第49頁,共59頁，2024年2月25日，星期天4．血清學診斷

用于診斷全身性念珠菌病。以念珠菌為抗原測定機體抗念珠菌抗體

第50頁,共59頁，2024年2月25日，星期天二、新型隱球菌新型隱球菌又名溶組織酵母菌，是土壤，鴿類，牛乳、水果等的腐生菌，也可存在人口腔中?？汕址溉撕蛣游铮话銥橥庠葱愿腥?，但也可能為內(nèi)源性感染，對人類而言，它通常是條件致病菌。

第51頁,共59頁，2024年2月25日，星期天（一）生物學特性較大球形，直徑可達5～20um，有肥厚的莢膜，折光性強，一般染料不易著色，難以發(fā)現(xiàn)，稱隱球菌，用墨汁陰性顯影法鏡檢，可見到透明莢膜包裹著菌細胞，菌細胞常有出芽，但不生成假菌絲。

第52頁,共59頁，2024年2月