豇豆抗煤霉病鑒定技術(shù)規(guī)程

豇豆抗煤霉病鑒定技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了江西省豇豆對(duì)煤霉病抗性鑒定的試驗(yàn)設(shè)計(jì)、接種方法、病情調(diào)查、抗性評(píng)價(jià)和接種后材料的處理等技術(shù)要求。本文件適用于江西省豇豆對(duì)煤霉病的抗性鑒定。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。NY/T496肥料合理使用準(zhǔn)則通則NY/T2118蔬菜育苗基質(zhì)NY/T5079無公害食品豇豆生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。豇豆煤霉病cowpeasootyblotch指由半知菌亞門尾霉屬菜豆尾孢(CercosporacruentaSacc.)侵染豇豆引起的一種真菌病害。接種體inoculums用于接種以引起病害的病原物或病原物的一部分。人工接種artificialinoculation在適宜條件下，通過人工操作將接種體置于植物體的適當(dāng)部位并使之發(fā)病的過程。病情級(jí)別diseaseratingscale人為定量植物個(gè)體或群體發(fā)病程度的數(shù)值化描述。病情指數(shù)diseaseindex是全面考慮發(fā)病率和嚴(yán)重度兩者的綜合指標(biāo)。病情指數(shù)按公式（1）計(jì)算：病情指數(shù)（ID）=Σ（各病級(jí)的株數(shù)×病級(jí)數(shù)）×100/調(diào)查總株數(shù)×最高病級(jí)數(shù)············（1）抗性評(píng)價(jià)evaluationofresistancelevels根據(jù)采用的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)判別植物對(duì)特定病害反應(yīng)程度和抵抗水平的描述。耗材與儀器耗材本鑒定技術(shù)規(guī)程中使用耗材包括：豇豆殼、瓊脂粉、葡萄糖、培養(yǎng)皿、燒杯、紗布、漏斗、三角瓶、營養(yǎng)缽等。儀器本鑒定技術(shù)規(guī)程中使用儀器包括：空調(diào)、顯微鏡、移液器、血球計(jì)數(shù)板、恒溫培養(yǎng)箱、冰箱等。試驗(yàn)設(shè)計(jì)育苗每份材料選取健康飽滿種子，用30℃左右的溫水浸泡1～2小時(shí)，在25℃～28℃下催苗，待露白后播于營養(yǎng)缽中，每缽播種2粒，每份材料播種20粒，種子上覆蓋1.5cm厚營養(yǎng)土，肥水管理按NY/T496和NY/T2118進(jìn)行，幼苗出土前保持氣溫30℃～35℃，出土后控制氣溫25℃～30℃，當(dāng)植株長至1.5m高時(shí)進(jìn)行抗病性接種鑒定。鑒定對(duì)照材料選用當(dāng)?shù)貧v年易感煤霉病的豇豆品種作為對(duì)照感病材料，具體育苗管理參照5.1。接種方法病原菌的分離從江西露地栽培豇豆病株中采集典型病葉，迅速帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分離純化，通過回接試驗(yàn)確定為豇豆煤霉病菌，并經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定為菜豆尾孢(CercosporacruentaSacc.)，轉(zhuǎn)接至斜面上，置于培養(yǎng)箱中10℃保存?zhèn)溆?。接種體制備將保存的豇豆煤霉病菌轉(zhuǎn)出活化，置于豇豆殼汁培養(yǎng)基上28℃～30℃培養(yǎng)，7d后刮下菌絲塊，在搗碎機(jī)上搗碎，雙層紗布過濾，加入適量葡萄糖及無菌水制得孢子液，利用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，并調(diào)整其濃度至3×104個(gè)/mL，3h內(nèi)完成接種試驗(yàn)。豇豆殼汁培養(yǎng)基的制備方法：稱取60g豇豆殼用蒸餾水沖洗干凈，適量去離子水中浸泡24h，搗碎機(jī)搗碎，55～60℃水浴1-2h，經(jīng)2層紗布過濾，上清液補(bǔ)水至1L，加入瓊脂粉15g，121℃高壓蒸汽滅菌20min。人工接種當(dāng)植株長至1.5m高左右時(shí)去掉頂部葉片進(jìn)行接種。采用噴霧接種法接種，以豇豆葉面有水滴而又不會(huì)掉落為佳。把接種好的植株置于（28±2）℃、相對(duì)濕度100%的空調(diào)房內(nèi)黑暗培養(yǎng)48h，然后每天光照14h，強(qiáng)度為35klx，保持空氣濕度在80%以上，其他按照NY/T5079栽培管理進(jìn)行。病情調(diào)查調(diào)查時(shí)間接種后15d進(jìn)行病情調(diào)查。病情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)記載病情，分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)的劃分詳見表1。表1豇豆煤霉病病情級(jí)別分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)病情級(jí)別癥狀描述0級(jí)葉片無病癥1級(jí)葉面積發(fā)病率≤5%3級(jí)5%<葉面積發(fā)病率≤25%5級(jí)25%<葉面積發(fā)病率≤50%7級(jí)50%<葉面積發(fā)病率≤75%9級(jí)75%<葉面積發(fā)病率病情記載按照表1所述植株的病情級(jí)別及其對(duì)應(yīng)的癥狀描述，調(diào)查所有供試材料的發(fā)病情況，記載每份材料的病情級(jí)別，按公式（1）計(jì)算病情指數(shù)。豇豆抗煤霉病鑒定結(jié)果記載表格見表2。表2豇豆抗煤霉病鑒定結(jié)果記載表編號(hào)品種名稱來源重復(fù)病情級(jí)別病情指數(shù)平均相對(duì)抗性指數(shù)抗病評(píng)價(jià)013579ⅠⅡⅢ注1：播種日期注2：接種日期注3：調(diào)查日期抗性評(píng)價(jià)鑒定有效性判別當(dāng)鑒定試驗(yàn)中感病對(duì)照品種達(dá)到其相應(yīng)感病程度（相對(duì)抗性指數(shù)≤0.5）時(shí)，該批次抗豇豆煤霉病鑒定視為有效?？剐栽u(píng)價(jià)一次鑒定結(jié)果不可作為最終鑒定結(jié)果，應(yīng)根據(jù)3次或以上抗性鑒定結(jié)果對(duì)鑒定材料進(jìn)行抗病性評(píng)價(jià)，抗性級(jí)別以試驗(yàn)次數(shù)重復(fù)的相對(duì)抗性指數(shù)平均值作為其抗病性水平?？剐栽u(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)相對(duì)病情指數(shù)=IDm×100/IDCK相對(duì)抗性指數(shù)（RRI）=1-IDm/IDCK其中，m為供試種質(zhì)資源。依據(jù)相對(duì)抗性指數(shù)來評(píng)價(jià)豇豆對(duì)煤霉病的抗性，共分為6個(gè)級(jí)別（見表3）。表3豇豆對(duì)煤霉病的抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)相對(duì)抗性指數(shù)（RRI）抗性評(píng)價(jià)英文縮寫<0