土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（S-NAG）試劑盒說明書

第第頁土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（S-NAG）試劑盒說明書土壤N乙酰βD葡萄糖苷酶（SolidNacetylβDglucosidase,SNAG）試劑盒說明書微量法100管/48樣注意：正式測定前務(wù)必取23個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：SNAG是溶酶體中的一種酸性水解酶，由土壤微生物分泌。SNAG活性變化與機(jī)體某些病理狀態(tài)密切相關(guān)。測定原理：SNAG分解βN乙酰氨基葡萄糖苷生成對(duì)硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計(jì)算NAG活性。自備用品：可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。試劑組成和配制：試劑一：甲苯5mL×1瓶，4℃保存；（自備）試劑二：粉劑×1瓶，20℃保存；臨用前加入10mL蒸餾水，充分溶解備用，用不完的試劑仍20℃保存；試劑三：液體20mL×1瓶，4℃保存；試劑四：液體15mL×1瓶，4℃保存；樣品處理：新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干，過30~50目篩。測定步驟：1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至400nm，蒸餾水調(diào)零。2、加樣表試劑名稱測定管對(duì)照管風(fēng)干土樣（g）0.020.02試劑一（μL）1010室溫振蕩混勻15min90℃振蕩混勻15min試劑二（μL）130蒸餾水130試劑三（μL）160160混勻，37℃振蕩反應(yīng)1h后，90℃水浴5min（蓋緊，防止水分散失），流水冷卻。10000g25℃離心10min，取上清液（在EP管或96孔板中加入下列試劑）上清液（μL）7070試劑四（μL）130130充分混勻，室溫靜置2min后，400nm處測定吸光值A(chǔ)，計(jì)算ΔA=A測定管A對(duì)照管。每個(gè)測定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。SNAG活力計(jì)算：a.用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y=0.00645x0.0054；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/L），y為吸光值。單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1μmol對(duì)硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。SNAG活力（μmol/d/g土樣）＝(ΔA+0.0054)÷0.00645×V反總÷W÷T=55.81×(ΔA+0.0054)T：反應(yīng)時(shí)間，1h=1/24d；V反總：反應(yīng)體系總體積：3×104L；W：樣本質(zhì)量，0.02g。b.用96孔板測定的計(jì)算公式如下標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y=0.0043x0.0054；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/L），y為吸光值。單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1μmol對(duì)硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。SNAG活力（μmol/d/g土樣）＝(ΔA+0.0054)÷0.0043×V反總÷W÷T=83.72×(