牛乳中氯霉素的檢測

關(guān)于牛乳中氯霉素的檢測氯霉素（CAP）氯霉素是一種廣譜抗生素，它能夠?qū)θ祟愒斐芍旅难杭膊?。如抑制人體骨髓造血功能而引起再生障礙性貧血癥和粒狀白細胞缺乏癥等疾病。因此當(dāng)沒有其他替代品可用的時候，才會被應(yīng)用作為治療嚴(yán)重感染。第2頁,共18頁，2024年2月25日，星期天氯霉素（CAP）通常情況下，氯霉素僅僅作為外用制劑使用，比如氯霉素滴眼液。第3頁,共18頁，2024年2月25日，星期天氯霉素曾經(jīng)作為獸藥使用氯霉素在動物中的應(yīng)用是很有吸引力的，因為動物對它有良好的耐受性，而且氯霉素在組織和體液中有良好的分布，半衰期長，而且價格便宜。第4頁,共18頁，2024年2月25日，星期天禁令

美國規(guī)定在動物性食品中不得檢出氯霉素。

歐盟已明文規(guī)定氯霉素不再作為獸藥使用。

香港衛(wèi)生署也提出輸港生牛奶中不能有抗生素殘留不含有抗生素殘留的牛奶已成為國際市場原料奶收購標(biāo)準(zhǔn)。第5頁,共18頁，2024年2月25日，星期天國家標(biāo)準(zhǔn)2001年9月我國農(nóng)業(yè)部發(fā)布了《無公害食品生鮮牛奶》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，這個標(biāo)準(zhǔn)對生鮮牛乳的衛(wèi)生指標(biāo)明確不得檢出抗生素。2002年起國家禁止將氯霉素用于所有食品動物。第6頁,共18頁，2024年2月25日，星期天牛奶中殘留氯霉素的檢測方法競爭酶聯(lián)免疫法(ELISA)氣相色譜&質(zhì)譜聯(lián)用(GS-MS)高效液相色譜&質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC-MS)高效液相色譜&熒光檢測法(HPLC-FL)其中，美國FDA推薦使用的確證方法是氣-質(zhì)聯(lián)用(GS-MS)和液-質(zhì)聯(lián)用(HPLC-MS)第7頁,共18頁，2024年2月25日，星期天競爭酶聯(lián)免疫法(ELISA)利用抗體抗原反應(yīng)。微孔板包有氯霉素抗體，加入氯霉素標(biāo)記物、標(biāo)準(zhǔn)和樣品溶液。游離氯霉素與氯霉素酶標(biāo)記物競爭氯霉素抗體。沒有連接的酶標(biāo)記物在洗滌步驟中被洗去。將酶基質(zhì)（過氧化尿素）和發(fā)色劑（四甲基聯(lián)苯胺）加入到孔中并孵育；結(jié)合的酶標(biāo)記物將無色的發(fā)色劑轉(zhuǎn)化成藍色的產(chǎn)物。加入反應(yīng)停止液后使顏色由藍變?yōu)辄S，在450nm處測量，吸光度與樣品的氯霉素濃度成反比。第8頁,共18頁，2024年2月25日，星期天ELISA檢測CAP的特點優(yōu)點：最低檢測可達到0.02ug/kg左右，方法靈敏度較高,特異性強,試樣預(yù)處理簡單,分析時間短,也不需要復(fù)雜的儀器設(shè)備,使用方便。缺點：由于抗體的批次不同,測定結(jié)果可能出現(xiàn)微小差異。第9頁,共18頁，2024年2月25日，星期天液相色譜法（LC）根據(jù)檢測器的不同，分為三種方法高效液相色譜-二極管陣列法(HPLC-PDA)高效液相色譜-熒光法(HPLC-FLU)高效液相色譜-紫外法(HPLC-UV)第10頁,共18頁，2024年2月25日，星期天液相LC原理系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相)內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。第11頁,共18頁，2024年2月25日，星期天LC檢測CAP的特點優(yōu)點：CAP都有很強的紫外吸收,可以直接用HPLC/UVD測定,用C18柱,樣品制備不需要衍生化過程,操作簡單。缺點：UVD選擇性較差,具有紫外吸收的雜質(zhì)都會產(chǎn)生干擾,故此方法的檢測限不夠理想。措施：采用FIU檢測器，其檢測限可達0.1Ug/L。第12頁,共18頁，2024年2月25日，星期天氣相GC原理氣相色譜系統(tǒng)由惰性固體上涂著液體的固定相和不斷通過管柱的氣體的流動相組成。利用固定相對樣品中各組分吸附或溶解能力不同，即各組分在固定相和流動相分配系數(shù)的差別，從而達到分離的目的。第13頁,共18頁，2024年2月25日，星期天GC檢測CAP的特點采用樣品提取后衍生化,再用氮吹干、定容的方法進行氣相色譜檢測。優(yōu)點：高分離效能、高選擇性、高靈敏度、快速、應(yīng)用廣。缺點：氯霉素分子中含有硝基、羥基,分子極性大,需繁瑣的衍生化步驟。第14頁,共18頁，2024年2月25日，星期天氣-質(zhì)聯(lián)用GC-MS和液-質(zhì)聯(lián)用LC-MSGC/MS法和LC/MS法集高效分離和結(jié)構(gòu)鑒定于一體,成為復(fù)雜混合物中痕量組分定性和定量的有力工具。GC/MS技術(shù)能夠非常準(zhǔn)確地確證食品中殘留的氯霉素,但樣品處理過程中必須進行衍生化反應(yīng),使該方法的應(yīng)用受到了限制。近年來LC/MS儀器的普及率逐年提高,LC/MS有逐漸取代GC/MS,成為確證氯霉素殘留分析方法的趨勢。第15頁,共18頁，2024年2月25日，星期天展望我國是產(chǎn)奶大國，但奶品質(zhì)量問題不斷，奶牛養(yǎng)殖過程中濫用CAP,成為一個嚴(yán)重的安全問題。由于我國尚未有成本較低、療效較好的能夠完全替代氯霉素的藥物產(chǎn)品,氯霉素依然會在部分地區(qū)被非法使用。第16頁,共18頁，2024年2月25日，星期天解決方案加快新藥開發(fā),提高養(yǎng)殖戶的食品安全意識,合理用藥。政府加強對食品中氯霉素殘留的檢測與