免疫課件檢測技術(shù)防治

第二十二章

免疫學(xué)檢測技術(shù)1第一節(jié)體外抗原抗體反應(yīng)（血清學(xué)反應(yīng)）2

高度特異性：

抗原抗體反應(yīng)的特點：

3表面化學(xué)基團之間的可逆結(jié)合：

結(jié)合：非共價鍵

氫鍵,靜電引力，范德華力,疏水鍵

解離：抗體親和力

受溫度、酸堿度和離子強度的影響

4親和力（affinity)和親合力(avidity)5AbexcessAgexcessEquivalence–Latticeformation適宜的抗原抗體濃度和比例6

抗原抗體反應(yīng)的兩個階段

抗原抗體特異性結(jié)合階段可見反應(yīng)階段

7抗原抗體反應(yīng)的影響因素：電解質(zhì)溫度:37℃酸堿度:pH6–8之間8

第二節(jié)

檢測抗原和抗體的體外實驗

9檢測抗原或抗體的方法：凝集反應(yīng)：顆粒性抗原與相應(yīng)抗體在電解質(zhì)存在的

條件下結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見的凝集團塊直接凝集反應(yīng)：顆粒性抗原+相應(yīng)抗體

間接凝集反應(yīng)：可溶性抗原+顆粒載體+相應(yīng)抗體1011直接凝集反應(yīng)血型檢測卡YYY+

間接凝集反應(yīng)12沉淀反應(yīng)：可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)肉眼可見的沉淀物。速率散射比濁法/免疫比濁法：可檢測樣品中多種分子，

并進行精確定量單向瓊脂擴散：可用于檢測血清中Ig或其他可溶性抗原的定量測定雙向瓊脂擴散：抗原抗體的定性分析13AgConcentrationDiameter2AgAgAgAgAbingel單向瓊脂擴散14雙向瓊脂擴散15免疫標記技術(shù)

將抗原抗體反應(yīng)與標記技術(shù)結(jié)合，提高了抗原抗體反應(yīng)的靈敏度，可定性、定量、定位。16酶免疫測定法（enzymeimmunoassay,EIA)

酶標記抗體進行的抗原抗體反應(yīng)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)：將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使抗原抗體反應(yīng)在固相表面進行。它將抗原抗體反應(yīng)的特異性與酶的高效催化作用相結(jié)合，通過酶作用于底物后顯色來判定結(jié)果。

直接法間接法雙抗體夾心法1718雙抗體夾心法（sandwichELISA)19免疫熒光法：熒光素與抗體連接熒光抗體直接免疫熒光：熒光素標記的抗體直接作標本染色

間接免疫熒光：一抗與標本中的抗原結(jié)合，再用熒光素標記的二抗染色。既可檢測抗原，也可檢測抗體。20AgYFluorochromeLabeledAbTissueSection直接免疫熒光21AgYYFluorochromeLabeledAnti-IgTissueSectionUnlabeledAb間接免疫熒光2223Fixedhumanplasmacells,treatedwithfluoresceinatedanti-IgM(green)antibodyandrhodaminatedanti-human-IgG(red)antibody,showingextensiveintracytoplasmicstaining.免疫熒光：漿細胞內(nèi)免疫球蛋白的胞內(nèi)染色

放射免疫測定法：用放射性核素標記抗原或抗體進行的免疫測定

化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)：將化學(xué)發(fā)光分析和免疫反應(yīng)相結(jié)合免疫膠體金技術(shù)：用膠體金顆粒標記抗體或抗原，以測未知抗原或抗體的方法。24免疫印跡技術(shù)（immunoblotting)Westernblotting25第三節(jié)免疫細胞功能的檢測26免疫細胞的分離與類型鑒定外周血單個核細胞的分離：密度梯度離心27流式細胞術(shù)（FACS）28磁珠分離法29免疫細胞功能測定：T細胞功能測定B細胞功能測定吞噬細胞功能測定30T細胞功能測定T細胞增殖試驗細胞毒試驗細胞因子檢測遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH)的檢測抗原特異性T細胞頻數(shù)的檢測31淋巴細胞轉(zhuǎn)化T細胞增殖試驗形態(tài)計數(shù)法3H-TdR摻入法MTT法32細胞毒試驗33細胞因子檢測生物活性檢測法：根據(jù)細胞因子的特性免疫學(xué)檢測法：ELISA方法胞內(nèi)細胞因子測定酶聯(lián)免疫斑點實驗（ELISPOT）

34ELISPOTAssay3536遲發(fā)型超敏反應(yīng)的檢測DTH(Delayed-TypeHypersensitivity)37抗原特異T細胞頻數(shù)檢測--Tetramer(四聚體)Biotin38B細胞功能測定B細胞增殖試驗抗體形成細胞測定:溶血空斑試驗，ELISPOT實驗39ELISPOTASSAY4041吞噬細胞功能測定硝基藍四氮唑試驗（NBT)水溶性淡黃色染料超氧陰離子非溶解性暗藍色甲臢（NBT陽性細胞）第二十三章

疫苗及預(yù)防接種42

免疫預(yù)防

特異性免疫的獲得：自然免疫和人工免疫人工免疫：

人工主動免疫人工被動免疫43

種類：抗毒素，免疫球蛋白，細胞因子與單克隆抗體人工主動免疫:用疫苗接種機體使之產(chǎn)生特異性免

疫,從而預(yù)防感染的措施。人工被動免疫:給人體注射含特異性抗體的免疫血清或細胞因子等制劑,以治療或緊急預(yù)防感染。44EdwardJenner1749-18231796-Localmilkmaid,SarahNelmes,diagnosedwithcowpox.Jennerscratchedmaterialfrompocksontothearmof8-year-oldJamesPhipps.Showedmildsymptoms&recovered.Sixweekslater,JennerinoculatedJameswithsmallpox–hedevelopednosymptomsofdisease!疫苗的起源45EdwardJennerinoculatingJamesPhippswithcowpox（1796）4647天花的流行情況：48Theprinciplebehindthesmallpoxvaccine49安全：滅活疫苗應(yīng)徹底滅活，避免無關(guān)蛋白和毒素污染；活疫苗無回復(fù)突變，無致癌性。有效:

疫苗具有很強的免疫原性，在大多數(shù)人引起保護性免疫。保護性免疫的類型免疫記憶

實用：接種程序簡化，價格低廉……疫苗的基本要求:50疫苗種類：

現(xiàn)代疫苗種類：

51減毒活疫苗：脊髓灰質(zhì)炎、麻疹、風(fēng)疹、腮腺炎疫苗

滅活疫苗（死疫苗）：狂犬病、傷寒、流感疫苗亞單位疫苗：有效免疫原成分制成的疫苗，如乙型肝炎病毒表面抗原制成的乙型肝炎疫苗類毒素疫苗：細菌的外毒素經(jīng)0.3%-0.4%甲醛處理

白喉類毒素、破傷風(fēng)類毒素疫苗結(jié)合疫苗：細菌夾膜多糖+白喉類毒素（腦膜炎球菌、肺炎球菌疫苗已獲準使用）聯(lián)合疫苗：白百破三聯(lián)疫苗重組載體疫苗：減毒的病毒或細菌載體疫苗52脊髓灰質(zhì)炎麻疹風(fēng)疹腮腺炎減毒活疫苗54死疫苗非常有效基本有效基本有效爭議疫苗的現(xiàn)狀：常規(guī)使用的疫苗的成功率：

脊髓灰質(zhì)炎、麻疹、風(fēng)疹、腮腺炎疫苗

BCG

百日咳疫苗（70%-80%）55

年齡疫苗種類基礎(chǔ)接種

出生卡介苗乙型肝炎疫苗

1個月乙型肝炎第二針

2個月小兒麻痹疫苗初服

3個月小兒麻痹疫苗復(fù)服，百白破第一針

4個月小兒麻痹疫苗復(fù)服，百白破第二針

5個月百白破第三針

6個月乙型肝炎第三針流腦多糖疫苗第一針（到6月齡后12月接種

8個月麻疹疫苗初種

1歲乙腦疫苗免疫2針，間隔7-10天（到1歲后5月份接種）加強接種

1歲半百白破加強1針，麻疹疫苗復(fù)種，小兒麻痹疫苗加服，流腦多糖疫苗第二針。

2歲乙腦疫苗加強1針（到2歲后5月份接種）

3歲乙腦疫苗加強1針(到3歲后5月份接種)

4歲小兒麻痹疫苗加強1次

5歲百白破加強1針,麻疹疫苗復(fù)種,乙腦疫苗加強1針,卡介苗復(fù)種我國計劃免疫程序56許多疾病無有效疫苗：

病毒：HIV，皰疹病毒細菌：葡萄球菌，A組鏈球菌真菌：假絲酵母原生動物：瘧疾，利什曼病

蠕蟲感染：血吸蟲病57新疫苗的研制合成肽疫苗：生產(chǎn)方便，安全，多價疫苗DNA疫苗：用編碼有效免疫原的基因與細菌質(zhì)粒構(gòu)

建重組體直接免疫機體。主要問題：抗DNA抗體，癌變治療性疫苗：治療性乙肝疫苗---臨床試驗階段