氣相色譜柱使用過程中的注意事項(xiàng) 色譜柱如何操作

第第頁氣相色譜柱使用過程中的注意事項(xiàng)色譜柱如何操作a.氣相色譜柱在領(lǐng)取安裝及使用過程中應(yīng)避開碰撞、猛烈震動(dòng)、小角度彎曲致使斷裂。b.安裝氣相色譜柱時(shí)，從隔墊中拔出柱子（見3.5.2h）并穿過石墨密封墊后，為防止污染，要用柱切割器除去柱兩端各2—4厘米，并保持切口平整。再依照不同的色譜儀要求伸進(jìn)進(jìn)樣口、檢測器合適的長度，擰緊螺絲。注意螺絲不要擰太緊，防止擠碎石墨密封墊，堵塞進(jìn)樣口。c.安裝柱子時(shí)注意不要把柱子的任何部位和柱溫箱接觸，以免造成柱子損傷。d.切勿在沒有通載氣的情況下使用柱子，防止固定液流失、氧化。e.切勿在使用中實(shí)際溫度超過柱子的最高使用溫度，一般要低于柱子的最高使用溫度20℃以下。f.避開無機(jī)或礦物酸堿進(jìn)入色譜柱，積累在色譜柱前端，破壞固定相，造成固定液流失，影響分別效果。包括：鹽酸、硫酸、硝酸、磷酸、氫氧化鈉、氫氧化鉀等。g.切勿任意用溶劑沖洗色譜柱，事先必需確認(rèn)色譜柱是健合、交聯(lián)的固定相才可以沖洗，否則會(huì)嚴(yán)重?fù)p壞這一色譜柱。例如：SE系列色譜柱就是非健合、交聯(lián)的固定相，SE—30、SE—54等。h.色譜柱一經(jīng)使用，就具有方向性，切勿在安裝柱子時(shí)把其進(jìn)樣口端與檢測器端接反。i.從儀器上取下的氣相色譜柱應(yīng)放入其相對(duì)應(yīng)的盒子中，把隔墊插在柱子兩端，要避開碎屑進(jìn)入柱子，并放到原來的儲(chǔ)存柜中。j.項(xiàng)目結(jié)束后，對(duì)色譜柱應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)睦匣幚?，再歸存色譜柱。柱子可以分為：加壓，常壓，減壓。

壓力可以加添淋洗劑的流動(dòng)速度，削減產(chǎn)品收集的時(shí)間，但是會(huì)減低柱子的塔板數(shù)。所以其他條件相同的時(shí)候，常壓柱是效率最高的，但是時(shí)間也最長，比如天然化合物的分別，一個(gè)柱子幾個(gè)月也是有的。

減壓柱能夠削減硅膠的使用量，感覺能夠節(jié)省一半甚至更多，但是由于大量的空氣通過硅膠會(huì)使溶劑揮發(fā)（有時(shí)在柱子外面有水汽凝結(jié)），以及有些比較易分解的東西可能得不到，而且還必需同時(shí)使用水泵抽氣（很大的噪音，而且時(shí)間長）。以前曾經(jīng)大量的過減壓柱，對(duì)它有比較深厚的感情，但是自從嘗試了加壓后，就幾乎再也沒動(dòng)過減壓的念頭了。

加壓柱是一種比較好的方法，與常壓柱仿佛，只不過外加壓力使淋洗劑走的快些。壓力的供應(yīng)可以是壓縮空氣，雙連球或者小氣泵（給魚缸供氣的就行）。特別是在簡單分解的樣品的分別中適用。壓力不可過大，不然溶劑走的太快就會(huì)減低分別效果。個(gè)人覺得加壓柱在一般的有機(jī)化合物的分別中是比較適用的。

關(guān)于柱子的尺寸，應(yīng)當(dāng)是粗長的可以。柱子長了，相應(yīng)的塔板數(shù)就高。柱子粗了，上樣后樣品的原點(diǎn)就?。ǚ从吃谥由暇褪菢悠穼颖容^?。@樣相對(duì)的減小了分別的難度。試想假如柱子十厘米，而樣品就有二厘米，那么分別的難度可想而知，或許要用很低極性的溶劑漸漸沖了。而假如樣品層只有0.5厘米，那么各組分就比較簡單得到完全分別了。當(dāng)然接受粗大的柱子要犧牲比較多的硅膠和溶劑了，不過這些成本相對(duì)于產(chǎn)品來說或許就不算什么了（有些不環(huán)保的說，不過溶劑回收重蒸后也就減小了部分揮霍）?，F(xiàn)在見到的柱子徑高比一般在1：5～10，書中寫硅膠量是樣品量的30～40倍，實(shí)在的選擇要實(shí)在分析。假如所需組分和雜質(zhì)分的比較開（是指在所需組分rf在0.2～0.4，雜質(zhì)相差0.1以上），就可以少用硅膠，用小柱子（例如200毫克的樣品，用2cm×20cm的柱子）；假如相差不到0.1，就要加大柱子，我覺得可以加添柱子的直徑，比如用3cm的，也可以減小淋洗劑的極性等等。

關(guān)于無水無氧柱，適用于對(duì)氧，水敏感，易分解的產(chǎn)品?？梢詽裰?，也可以干柱。不過在樣品之前至少要用溶劑把柱子飽和一次，由于溶劑和硅膠飽和時(shí)放出的熱量有可能是產(chǎn)品分解，終歸要分別的是敏感的東東，當(dāng)心不為過。也是由于分別的東西比較敏感，所以接收瓶確定要用可密封的，遵奉并服從schlenk操作。至于是加壓、常壓、減壓，隨需而定。由于是schlenk操作，所以點(diǎn)板是個(gè)問題，假如樣品是顯色的，恭喜了，不用點(diǎn)板，直接看柱子上的色帶就行了。假如樣品無色，只好準(zhǔn)備幾十個(gè)schlenk瓶，一瓶一瓶的點(diǎn)，不過幾次之后就知道樣品在哪，也就可以省些了。像我以前過一根無水無氧柱，需要六個(gè)schlenk，現(xiàn)在只一個(gè)就能把所要的全收集到。無水無氧柱中用的比較多的是用氧化鋁作固定相。由于硅膠中有大量的羥基暴露在外，很簡單是樣品分解，特別是金屬有機(jī)化合物和含磷化合物。而氧化鋁可以做成堿性、中性和酸性的，選擇余地比較大，但是比硅膠要貴些。聽說有個(gè)方法，就是用石英做柱子，然后用HF254做固定相，這樣在柱子外面用紫外燈一照就知道產(chǎn)品在哪里了，沒有驗(yàn)證過。

關(guān)于濕法、干法上樣。濕法省事，一般用淋洗劑溶解樣品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶劑越少越好，不然溶劑就成了淋洗劑了。很多樣品在上柱前是粘乎乎的，一般沒關(guān)系?？墒怯械纳蠘雍笤诠枘z上又會(huì)析出，這一般都是比較大量的樣會(huì)顯現(xiàn)，是由于硅膠對(duì)樣品的吸附飽和，而樣品本身又是比較好的固體才會(huì)發(fā)生，這就應(yīng)當(dāng)先重結(jié)晶，得到大部分的產(chǎn)品后再柱分，假如不能重結(jié)晶那就不管它了，直接過就是了，樣品隨著淋洗劑流動(dòng)會(huì)溶解的。有些樣品溶解性差，能溶解的溶劑又不能上柱（比如DMF,DMSO等，會(huì)隨著溶劑一起走，顯色是一個(gè)很長的脫尾），這時(shí)就必需用干法上柱了。

樣品和硅膠的量有一種說法是，我覺得是越少越好，但是要保證在旋干后，不能看到明顯的固體顆粒（那說明有的樣品沒有吸附在硅膠上）。溶劑的選擇。當(dāng)然是較為便宜，最安全，最環(huán)保的了。所以大多選用石油醚，乙酸乙酯。文獻(xiàn)中有寫用正己烷的，太貴了，除非特別需要不要用不然銀子嘩嘩的，流的比淋洗劑還快，不過由于極性很小，有時(shí)還是非它不可。乙醚也可以用，但是就是簡單睡覺，注意保持清醒別讓溶劑流干了，那樣柱子也就不爽了。二氯甲烷也有用的，但是要知道，它和硅膠的吸附是一個(gè)放熱過程，所以夏天的時(shí)候常常會(huì)在柱子里產(chǎn)生氣泡，天氣冷的時(shí)候會(huì)好一些。甲醇，據(jù)說能溶解部分的硅膠，所以產(chǎn)品假如想過元素分析的話要留神，應(yīng)當(dāng)經(jīng)過后繼處理，比如說重結(jié)晶等。其他的溶劑用的相對(duì)較少，要依個(gè)人的不同需要選擇了。由于某些原因，用到的淋洗劑多是大包裝的（便宜嘛），我們這里是用10升或25升的塑料桶裝的，就要注意這些工業(yè)品的純度是較低的。常常能夠從送來的大桶底部看到有色的雜質(zhì)，其他的雜質(zhì)就可想而知了，所以在比較嚴(yán)格的柱分時(shí)就要對(duì)溶劑重蒸。當(dāng)然過原材料時(shí)就可以免去這一步了，反正下面還有提純的方法。另外溶劑在過柱子后可以也回收使用，一方面環(huán)保，另一方面也能節(jié)省部分經(jīng)費(fèi)，缺點(diǎn)是要消耗確定的人工。這里要注意的是，一般在過柱同時(shí)進(jìn)行的是減壓旋蒸，石油醚和乙酸乙酯的比例由于揮發(fā)度的不同會(huì)導(dǎo)致極性的變化，一般會(huì)使得極性變大，在梯度淋洗時(shí)比較合適，正好極性越來越大了。在過完柱子后，溶劑最后回收要接受常壓，由于在減壓旋蒸時(shí)會(huì)有部分低沸點(diǎn)的雜質(zhì)一起出來，常壓時(shí)就會(huì)削減這種現(xiàn)象，假如雜質(zhì)和你下面要過的樣品有反應(yīng)那就慘了。

關(guān)于操作問題。

1裝柱。柱子下面的活塞確定不要涂潤滑劑，會(huì)被淋洗劑帶到產(chǎn)品中的，可以接受四氟節(jié)門的。干法和濕法裝柱覺得沒什么區(qū)分，只要能把柱子裝實(shí)就行。裝完的柱子應(yīng)當(dāng)要適度的緊密（太密了淋洗劑走的太慢），確定要均勻（不然樣品就會(huì)從一側(cè)斜著下來）。書中寫的都是不能見到氣泡，我覺得在大多數(shù)情況下有些小氣泡沒太大的影響，一加壓氣泡就全下來了。當(dāng)然假如你裝的柱子總是有氣泡就說明需要多練習(xí)了。但是柱子更忌諱的是開裂，甭管豎的還是橫的，都會(huì)影響分別效果，甚至作廢！

2加樣。用少量的溶劑溶樣品加樣，加完后將下面的活塞打開，待溶劑層下降至石英砂面時(shí)，再加少量的低極性溶劑，然后再打開活塞，如此兩三次，一般石英砂就基本是白色的了。加入淋洗劑，一開始不要加壓，等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離（2～4cm就夠了），再加壓，這樣避開了溶劑（如二氯甲烷等）夾帶樣品快速下行。

3淋洗劑的選擇。感覺上要使所需點(diǎn)在rf0.2～0.3左右的比較好。不要認(rèn)為在板上爬高了分的比較開，過柱子就用那種極性，假如rf在0.6，即使相差0.2也不簡單在柱子上分開，由于柱子是一個(gè)多次爬板的狀態(tài)，可以通過公式的比較：0.6/0.8一次的分別度，確定不如（0.2/0.3）的三次方或四次方大。

4樣品的收集。用硅膠作固定相過柱子的原理是一個(gè)吸附與解吸的平衡。所以假如樣品與硅膠的吸附比較強(qiáng)的話，就不簡單流出。這樣就會(huì)發(fā)生，后面的點(diǎn)先出，而前面的點(diǎn)后出。這時(shí)可以接受氧化鋁作固定相。另外，收集的試管大小要以樣品量而定，特別是小量樣品，假如用大試管，可能一根就收到了三個(gè)樣品，wuwu。假如都用小試管那工作量又太大。

5最后的處理。柱分后的產(chǎn)品，由于使用了大量的溶劑，其中的雜質(zhì)也會(huì)累積到產(chǎn)品中，所以假如想送分析，可以用少量的溶劑洗滌一下，由于大部分的雜質(zhì)是溶在溶劑里的，一洗基本就沒了，必要時(shí)進(jìn)行重結(jié)晶。色譜柱的安裝：

（1）拆開柱包裝盒，確認(rèn)色譜柱的類型、尺寸、出廠日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑。

（2）擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用。

（3）按柱管上標(biāo)示的流動(dòng)相流向，將色譜柱的入口端通過連接管與進(jìn)樣閥出口相連接（如條件允許，建議在柱前使用保護(hù)柱）；柱的出口與檢測器連接。連接管是外徑為1.57mm、內(nèi)徑為0.1—0.3mm的不銹鋼管。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環(huán)。在接管時(shí)確定要設(shè)法降低柱外死體積。連接管通過空心螺釘、壓環(huán)后盡量用力插到底，然后順時(shí)針擰緊空心螺釘，直到擰不動(dòng)為止，再用扳手連續(xù)順時(shí)針擰1／4—1／2圈，切記不要用力過大。如色譜柱通過流動(dòng)相加壓后有漏液現(xiàn)象，請(qǐng)用扳手連續(xù)順時(shí)針擰1／4圈，直至不漏液為止。

色譜柱的儲(chǔ)存:

1．防止緩沖溶液和水溶液流動(dòng)相產(chǎn)生微生物，做到流動(dòng)相用多少配多少，或在水流動(dòng)相中加200ppm的疊氮鈉以抑制細(xì)菌