骨髓檢查專題知識講座

骨髓檢查專題知識講座骨髓檢查專題知識講座第1頁學(xué)習(xí)關(guān)鍵點1.概念粒/紅比值、非紅系百分比、骨髓稀釋、細(xì)胞化學(xué)染色、造血干細(xì)胞、造血祖細(xì)胞2.骨髓檢驗適應(yīng)證、骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗、正常骨髓象特征以及骨髓增生程度分級和標(biāo)準(zhǔn)3.血細(xì)胞免疫標(biāo)識技術(shù)及分子生物學(xué)技術(shù)在血液系統(tǒng)疾病中臨床應(yīng)用4.血細(xì)胞染色體常規(guī)顯帶技術(shù)種類及其在血液系統(tǒng)疾病中臨床應(yīng)用5.常見細(xì)胞化學(xué)染色及其臨床意義骨髓檢查專題知識講座第2頁一、骨髓常規(guī)檢驗（一）臨床應(yīng)用（二）骨髓穿刺術(shù)（三）骨髓片檢驗（四）大致正常骨髓象骨髓檢查專題知識講座第3頁（一）臨床應(yīng)用1.診療或幫助診療血液系統(tǒng)疾病

能夠確診疾病包含各種白血病、再生障礙性貧血、巨幼細(xì)胞性貧血、尼曼-匹克病、戈謝病、多發(fā)性骨髓瘤、骨髓轉(zhuǎn)移癌等；幫助診療包含缺鐵性貧血、溶血性貧血、特發(fā)性血小板降低性紫癜、惡性淋巴瘤骨髓浸潤、骨髓增生異常綜合征等，并可提升一些疾病診療率如瘧疾、黑熱病等；2.血液系統(tǒng)疾病療效觀察及病情判斷，經(jīng)過復(fù)查可作出骨髓完全緩解、個別緩解、改進、復(fù)發(fā)等意見。骨髓檢查專題知識講座第4頁

適應(yīng)證1.血象檢驗中有不明原因某種血細(xì)胞過多或過少，或出現(xiàn)幼稚細(xì)胞。2.不明原因肝、脾或淋巴結(jié)腫大3.不明原因發(fā)燒、紫癜、骨痛、惡病質(zhì)4.疑有其它惡性腫瘤有骨髓內(nèi)轉(zhuǎn)移5.腎功效異常、血沉顯著增加或有異常蛋白血癥和異常蛋白尿癥6.血液系統(tǒng)疾病定時復(fù)查、化療后療效觀察7.其它：骨髓活檢、細(xì)胞表面抗原測定、造血干/祖細(xì)胞培養(yǎng)、血細(xì)胞染色體核型分析以及微生物培養(yǎng)、寄生蟲學(xué)檢驗（如瘧疾、黑熱?。┑裙撬铏z查專題知識講座第5頁

禁忌證1.因為凝血因子嚴(yán)重缺點引發(fā)出血性疾?。貉巡?.妊娠晚期婦女不宜做骨穿，若高度懷疑惡性病者可行骨髓穿刺，同時應(yīng)終止妊娠。3.穿刺部位有炎癥或畸形應(yīng)避開骨髓檢查專題知識講座第6頁（二）標(biāo)本采集、制片、染色1.骨髓穿刺部位選擇：①骨髓腔中紅骨髓豐富；②穿刺部位淺表、易定位；③應(yīng)避開主要臟器。常見穿刺部位：髂骨、胸骨、脊突、脛骨粗隆首選穿刺部位：髂后或髂前上棘骨髓檢查專題知識講座第7頁2.骨髓制片注意事項骨髓易凝（不宜抗凝），取材后應(yīng)馬上涂片，并盡快送檢，確保細(xì)胞在新鮮狀態(tài)下染色。取玻片上骨髓小粒豐富骨髓液來制片推片時角度應(yīng)小一些，速度應(yīng)慢一些，防止血膜過厚。推片時應(yīng)注意保留片尾和邊緣，以防大致積細(xì)胞丟失。涂片后應(yīng)馬上扇干，以防細(xì)胞皺縮變形。初診病人骨髓推片以10張為好，且全部送檢同時應(yīng)送檢血片（不少于3張）和簡單病歷一份。對于非技術(shù)原因而多部位穿刺均抽不出骨髓者即為干抽，常見于骨髓纖維化癥，骨髓極度增生或增生極度減低，腫瘤骨髓浸潤等，可進行骨髓組織病理檢驗。骨髓檢查專題知識講座第8頁ABCD

A涂片制備良好，尾部有骨髓小粒B涂片制備良好，尾部無骨髓小粒C涂片制備不佳，推片時用力不均勻且無尾部D涂片制備差，有些骨髓液未涂開骨髓檢查專題知識講座第9頁3.骨髓取材情況判斷（1）骨髓穿刺取材滿意指征抽吸骨髓時病人有特殊酸痛感；可見較多骨髓小粒和脂肪滴（與血片區(qū)分）；鏡檢可見大量有核細(xì)胞，同時可發(fā)覺骨髓特有細(xì)胞：巨核C、漿C、組織C等鏡檢粒細(xì)胞桿狀核多于分葉核。骨髓檢查專題知識講座第10頁3.骨髓取材情況判斷（2）骨髓稀釋完全稀釋：是指抽出“骨髓液”實際上與外周血一樣，骨髓成份少或無。肉眼觀察，其“骨髓液”較稀、無黃色小粒；推片尾部無骨髓小粒。個別稀釋：指抽吸骨髓液時混進較多血竇血。特征包含：①骨髓小粒無或少見；②有核細(xì)胞降低，且分布不勻，顯著呈條狀分布；③骨髓特有細(xì)胞少；④中性分葉核粒細(xì)胞和成熟淋巴細(xì)胞百分比增加。骨髓檢查專題知識講座第11頁4.染色方法（1）Wright染色：（2）Wight-Giemsa染色：①染液配制：Ⅰ液是將瑞特染粉1g、姬姆薩染粉0.3g加入到500ml甲醇瓶中配制而成，Ⅱ液為Wright染色中磷酸鹽緩沖液；②染色步驟同瑞特染色。（3）國際標(biāo)準(zhǔn)化委員會推薦羅曼諾夫斯基染色：①染液配制：Ⅰ液由美藍(lán)9.0mg、天青B17.0mg及伊紅13.0mg溶解于20ml1:1甘油甲醇中配制而成，Ⅱ液：0.00132Msorensen磷酸鹽緩沖液（pH6.4～6.8）②染色步驟：涂片固定后，上述Ⅰ液用100mlⅡ液稀釋后，染色10min后沖洗，待檢。骨髓檢查專題知識講座第12頁瑞氏染色結(jié)果分析骨髓檢查專題知識講座第13頁（三）骨髓檢驗1.低倍鏡檢驗了解骨髓取材、涂片及染色情況，選擇適當(dāng)部位用于有核細(xì)胞分類計數(shù)判斷骨髓有核細(xì)胞增生程度：選擇細(xì)胞分布適中部位進行，以骨髓中有核細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞之比判斷觀察巨核細(xì)胞分布情況，重點在尾部和邊緣，并計數(shù)全片巨核細(xì)胞數(shù)量注意觀察骨髓片邊緣及尾部是否存在體積特大或成堆出現(xiàn)特殊病理細(xì)胞。骨髓檢查專題知識講座第14頁骨髓有核細(xì)胞增生程度五級判斷標(biāo)準(zhǔn)增生程度有核細(xì)胞/成熟紅有核細(xì)胞/HP常見病例增生極度活躍1:1﹥100各種白血病增生顯著活躍1:1050-100白血病及增生貧血增生活躍1:2020-50正常骨髓，貧血增生低下1:505-10再障增生極度低下1:200﹤5再障*10～20個是空檔，檢驗者應(yīng)依據(jù)詳細(xì)情況（如年紀(jì)）等進行判斷。骨髓檢查專題知識講座第15頁骨髓有核細(xì)胞增生程度骨髓檢查專題知識講座第16頁2.油鏡檢驗（1）觀察各細(xì)胞系增生情況，細(xì)胞發(fā)育情況，細(xì)胞大小、形態(tài)有沒有異常，有沒有異常結(jié)構(gòu)等（2）骨髓有核細(xì)胞分類計數(shù)計數(shù)部位：應(yīng)選擇厚薄適當(dāng)且均勻、細(xì)胞結(jié)構(gòu)清楚、染色好、背景潔凈部位進行計數(shù)，普通在體尾交界處計數(shù)秩序：呈“之”字形由尾部向頭部推進，以免出現(xiàn)有些視野重復(fù)計數(shù)現(xiàn)象計數(shù)細(xì)胞：除巨核細(xì)胞、破碎細(xì)胞、分裂象以外其它有核細(xì)胞計數(shù)數(shù)目：最少計數(shù)200個有核細(xì)胞；增生顯著活躍以上者最好計數(shù)500個；對于增生極度減低者可計數(shù)100個骨髓檢查專題知識講座第17頁粒細(xì)胞系形態(tài)觀察細(xì)胞大小、形態(tài)，包含有沒有偽足、內(nèi)外漿等；核形態(tài)有沒有改變，如早期階段核形不規(guī)則，成熟階段核分頁過多或不分頁；胞漿有沒有異常，包含著色異常，顆粒過多或過少，甚至無顆粒，是否有中毒顆粒、黃沙樣顆粒、吞噬物、空泡、包涵體等；核漿發(fā)育是否正常，包含胞漿顏色改變，顆粒出現(xiàn)階段。骨髓檢查專題知識講座第18頁紅細(xì)胞系形態(tài)觀察細(xì)胞大小、形態(tài)改變，如巨幼改變，缺鐵改變，幼紅細(xì)胞結(jié)構(gòu)異常（點彩、豪周小體、卡波環(huán)等）。核形改變：固縮、碎裂、畸形核漿發(fā)育不平衡：核染色質(zhì)結(jié)構(gòu)與胞漿顏色改變不平行，包含核老漿幼、漿老核幼成熟紅細(xì)胞形態(tài)、大小、受色有沒有異常，有沒有異常結(jié)構(gòu)骨髓檢查專題知識講座第19頁巨核細(xì)胞系形態(tài)觀察細(xì)胞數(shù)量（分布）、大小（小巨核、巨幼變）和形態(tài)（胞核分葉過多）改變。注意血小板數(shù)量、大小、形態(tài)、分布及顆粒改變。骨髓檢查專題知識講座第20頁3.結(jié)果計算

（1）計算各系統(tǒng)細(xì)胞總百分比及各階段細(xì)胞百分比某階段細(xì)胞百分比=所計該階段細(xì)胞個數(shù)/所計骨髓有核細(xì)胞總數(shù)×100（2）計算粒/紅比值（G/E），即各階段粒細(xì)胞百分率總和與各階段有核紅細(xì)胞百分率總和之比。（3）計算各階段巨核細(xì)胞百分比或各階段巨核細(xì)胞個數(shù)。骨髓檢查專題知識講座第21頁4.填寫骨髓細(xì)胞學(xué)檢驗匯報單

（1）填寫患者姓名、性別、年紀(jì)、科室、病區(qū)、床號、住院號、骨髓涂片號、骨髓穿刺部位、骨髓穿刺時間、臨床診療等。（2）填寫骨髓片取材、制備和染色情況。（3）填寫骨髓匯報單中各階段細(xì)胞百分比、粒紅比值、計數(shù)有核細(xì)胞總數(shù)等。（4）填寫文字描述內(nèi)容（見后）（5）存取經(jīng)典彩圖（6）填寫診療意見及提議：依據(jù)骨髓片、血片及細(xì)胞化學(xué)染色所見，結(jié)合臨床及疾病性質(zhì)提出診療意見。骨髓檢查專題知識講座第22頁骨髓匯報文字描述內(nèi)容骨髓特征描寫1、對骨髓取材、涂片、染色情況評價2、骨髓有核細(xì)胞增生程度和粒紅比值3、詳細(xì)敘述粒系和紅系增生情況和成熟情況,細(xì)胞形態(tài)有沒有異常，包含成熟紅細(xì)胞；4、簡單描述淋、單、漿各系基礎(chǔ)情況5、涂片中巨核細(xì)胞和血小板分布和形態(tài)情況；6、有沒有特殊病理細(xì)胞和寄生蟲骨髓檢查專題知識講座第23頁骨髓匯報文字描述內(nèi)容血片特征描寫1、白細(xì)胞分布情況以及分類結(jié)果評價，有沒有幼稚細(xì)胞、異常結(jié)構(gòu)及形態(tài)改變；2、成熟紅細(xì)胞大小、形態(tài)、結(jié)構(gòu)、受色有否異常，有沒有有核紅；3、血小板形態(tài)和分布情況；4、有沒有特殊病理細(xì)胞和血液寄生蟲。骨髓檢查專題知識講座第24頁骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗診療意見性質(zhì)1.必定性診療：骨髓呈特異性改變，臨床表現(xiàn)又經(jīng)典者，如確診為白血病、巨幼細(xì)胞性貧血、再生障礙性貧血、多發(fā)性骨髓瘤、骨髓轉(zhuǎn)移癌、戈謝病、尼曼-匹克病、瘧疾等2.提醒性診療：骨髓有較特異性改變，但特異性不強，如提醒缺鐵性貧血、急性白血病亞型等，同時可提議做對應(yīng)檢驗3.符合性診療：骨髓呈非特異性改變，但結(jié)合臨床及其它檢驗可解釋臨床者。如符合溶血性貧血、特發(fā)性血小板降低性紫癜、原發(fā)性血小板增多癥、脾功效亢進等，同時可提議做深入檢驗4.可疑性診療：骨髓象有改變或出現(xiàn)少許異常細(xì)胞，臨床表現(xiàn)不經(jīng)典，可能為某種疾病早期、前期或不經(jīng)典病例，如疑為難治性貧血等，要結(jié)合臨床，做深入檢驗，并動態(tài)觀察其改變骨髓檢查專題知識講座第25頁骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗診療意見性質(zhì)5.排除性診療：臨床懷疑為某種血液病，但骨髓象不支持或骨髓象大致正常，可考慮排除此病，但應(yīng)注意也可能是疾病早期，骨髓還未有顯著反應(yīng)6.形態(tài)學(xué)描寫：骨髓象有些改變，但提不出上述性質(zhì)診療意見，可簡述涂片形態(tài)學(xué)檢驗主要特點，同時盡可能提出一些提議7.其它：假如取材不佳，可提出骨髓稀釋、骨髓個別稀釋易見如基礎(chǔ)正?？勺龀龌A(chǔ)正常骨髓象對于已確診病人，治療后復(fù)查骨髓時，應(yīng)與以前骨髓片進行比較，得出疾病個別緩解、完全緩解、改進、退步、復(fù)發(fā)等意見骨髓檢查專題知識講座第26頁細(xì)胞分類注意事項（1）細(xì)胞形態(tài)受涂片、染色影響較大，分類時應(yīng)觀察全片情況，綜合分析。（2）細(xì)胞形態(tài)改變多樣，觀察細(xì)胞時不能憑著一、二個非特征性特點就輕易地做出必定或否定判斷（3）介于兩階段之間細(xì)胞應(yīng)劃為下一階段（4）遇有難以確定細(xì)胞，個別可列入分類不明細(xì)胞，若有一定數(shù)量，則應(yīng)借助細(xì)胞化學(xué)染色進行判斷。（5）急性白血病時，各系統(tǒng)原始細(xì)胞雖各有特征，但有時極為相同，極難判別，這時應(yīng)注意觀察伴隨出現(xiàn)幼稚細(xì)胞、成熟細(xì)胞，并與其比較，推測原始細(xì)胞歸屬。骨髓檢查專題知識講座第27頁（三）成人大致正常骨髓象特點1.骨髓有核細(xì)胞增生活躍，粒紅比值（2~4）:12.粒細(xì)胞系統(tǒng)占40%～60%，其中原始粒細(xì)胞＜2%，早幼粒細(xì)胞＜5%，中性中幼粒細(xì)胞約8%，中性晚幼粒細(xì)胞約10%，中性桿狀核粒細(xì)胞約20%，中性分葉核粒細(xì)胞約12%，嗜酸性粒細(xì)胞＜5%，嗜堿性粒細(xì)胞＜1%3.紅細(xì)胞系統(tǒng)占20～25%，以中、晚幼紅細(xì)胞為主（各占10%），原始紅細(xì)胞＜1%，早幼紅細(xì)胞＜5%骨髓檢查專題知識講座第28頁（三）成人大致正常骨髓象特點4.淋巴細(xì)胞系統(tǒng)占20～25%，單核細(xì)胞系統(tǒng)＜4%，漿細(xì)胞系統(tǒng)＜2%，淋單漿均為成熟階段細(xì)胞，原始階段罕見，幼稚階段偶見5.巨核細(xì)胞系統(tǒng)在1.5cm×3cm血膜上，可見巨核細(xì)胞7～35個，其中原巨不見或偶見，幼巨占0%～5%，顆粒巨占10%～27%，產(chǎn)板巨占44%～60%，裸核型巨核細(xì)胞占8%～30%。血小板較易見，成堆存在6.其它細(xì)胞如組織細(xì)胞、成骨細(xì)胞、吞噬細(xì)胞等偶見，分裂象細(xì)胞少見，不見寄生蟲和異常細(xì)胞。7.細(xì)胞形態(tài)：紅細(xì)胞、血小板及各種有核細(xì)胞形態(tài)基礎(chǔ)正常骨髓檢查專題知識講座第29頁正常骨髓象必須具備四個條件1.有核細(xì)胞增生活躍

2.各系各階段細(xì)胞所占百分比大致正常

3.各系各階段細(xì)胞形態(tài)無顯著異常

4.無特殊病理細(xì)胞和寄生蟲骨髓檢查專題知識講座第30頁小兒骨髓象特征（1）有核細(xì)胞較成人豐富，粒紅比值有所降低，尤其是新生兒紅系活躍，粒紅比可達(dá)1:1。（2）嬰兒期幼紅細(xì)胞體積較大，有類似巨幼樣特征。（3）淋巴細(xì)胞百分比偏高，伴隨年紀(jì)增加，逐步靠近成人水平

骨髓檢查專題知識講座第31頁二、細(xì)胞化學(xué)染色概念：細(xì)胞化學(xué)染色是一個以形態(tài)為基礎(chǔ)，利用化學(xué)或生物化學(xué)技術(shù)對血細(xì)胞內(nèi)各種化學(xué)成份作定位、定性和定量分析方法。染色要求：（1）在原位顯示細(xì)胞成份和結(jié)構(gòu)；（2）盡可能保持細(xì)胞生前成份、結(jié)構(gòu)及酶活性不變。骨髓檢查專題知識講座第32頁細(xì)胞化學(xué)染色基礎(chǔ)過程1.固定固定作用就是保持使細(xì)胞結(jié)構(gòu)及化學(xué)成份不變。常見有甲醛蒸汽固定法和液體（甲醛、乙醇、甲醇、丙酮等）固定法。2.顯示經(jīng)過不一樣化學(xué)反應(yīng)，使被檢測化學(xué)物質(zhì)最終形成穩(wěn)定有色沉淀。如偶氮偶聯(lián)法、普魯士藍(lán)反應(yīng)、雪夫反應(yīng)。3.復(fù)染目標(biāo)在于顯示各種細(xì)胞特征而便于觀察。復(fù)染液顏色應(yīng)與有色沉淀顏色有顯著對比度，既能顯示細(xì)胞結(jié)構(gòu)又能清楚地看出細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果。骨髓檢查專題知識講座第33頁（一）骨髓鐵染色1.原理：細(xì)胞外含鐵血黃素和幼紅細(xì)胞內(nèi)鐵蛋白聚合物與酸性亞鐵氰化鉀發(fā)生普魯士藍(lán)反應(yīng)，形成藍(lán)色亞鐵氰化鐵沉淀，并定位于含鐵部位。4Fe3++3K4[Fe(CN)6]Fe[Fe(CN)6]3+12K+骨髓檢查專題知識講座第34頁2.血細(xì)胞染色反應(yīng)骨髓中貯存鐵分為細(xì)胞內(nèi)鐵和細(xì)胞外鐵。細(xì)胞內(nèi)鐵是指存在于中、晚幼紅細(xì)胞及紅細(xì)胞胞質(zhì)中可染鐵，分別稱為鐵粒幼紅細(xì)胞、鐵粒紅細(xì)胞。鐵粒幼細(xì)胞：經(jīng)鐵染色后胞漿內(nèi)含有細(xì)小藍(lán)色鐵顆粒幼紅細(xì)胞鐵粒紅細(xì)胞：經(jīng)鐵染色后胞漿內(nèi)含有細(xì)小藍(lán)色鐵顆粒成熟紅細(xì)胞環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞：經(jīng)鐵染色后幼紅細(xì)胞內(nèi)鐵顆粒6顆以上。且圍繞核周排列達(dá)1/2以上者骨髓檢查專題知識講座第35頁2.血細(xì)胞染色反應(yīng)依據(jù)細(xì)胞內(nèi)鐵顆粒多少可將鐵粒幼細(xì)胞分為四型Ⅰ型：胞漿內(nèi)有1~2個鐵顆粒Ⅱ型：胞漿內(nèi)有3~5個鐵顆粒Ⅲ型：胞漿內(nèi)有6~10個鐵顆粒Ⅳ型：胞漿內(nèi)鐵顆粒>10個A有核紅細(xì)胞胞質(zhì)中無鐵顆粒，B，為Ⅰ型鐵粒幼紅細(xì)胞C為Ⅱ型鐵粒幼紅細(xì)胞，D為Ⅲ型鐵粒幼紅細(xì)胞，E為Ⅳ型鐵粒幼紅細(xì)胞，F(xiàn)環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞，G鐵粒紅細(xì)胞DEFGABCD骨髓檢查專題知識講座第36頁2.血細(xì)胞染色反應(yīng)細(xì)胞外鐵指存在于骨髓小粒和巨噬細(xì)胞中可染鐵。陽性結(jié)果呈彌散性、顆粒狀、小珠狀或塊狀藍(lán)色。依據(jù)骨髓小粒中鐵存在方式及量將細(xì)胞外鐵分為（-）（+）（++）（+++）（++++）骨髓檢查專題知識講座第37頁3.鐵染色參考范圍細(xì)胞外鐵：主要反應(yīng)骨髓鐵貯存情況正常：+～++約2/3人為（++），約1/3人為（+）細(xì)胞內(nèi)鐵：主要反應(yīng)紅細(xì)胞內(nèi)可利用鐵量。正常：鐵粒幼達(dá)12～44%，以Ⅰ型為主，少數(shù)為Ⅱ型。

骨髓檢查專題知識講座第38頁4.鐵染色臨床意義

鐵染色臨床主要應(yīng)用于缺鐵性貧血和鐵粒幼細(xì)胞貧血等診療和判別診療及指導(dǎo)鐵劑治療。（1）缺鐵性貧血細(xì)胞外鐵陰性，細(xì)胞內(nèi)鐵陽性率顯著下降或為零。經(jīng)鐵劑治療有效后，其細(xì)胞內(nèi)鐵、外鐵增多。（2）鐵粒幼細(xì)胞貧血鐵粒幼紅細(xì)胞增多，其中環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞增多，占15%以上，細(xì)胞外鐵也顯著增多。（3）骨髓增生異常綜合征伴環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞增多難治性貧血，其環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞占15%以上，細(xì)胞外鐵也常增加。（4）其它非缺鐵性貧血溶血性貧血、巨幼細(xì)胞性貧血、再生障礙性貧血、屢次輸血后和白血病等，細(xì)胞外鐵和內(nèi)鐵正?；蛟黾印＃?）感染、肝硬化、慢性腎炎、尿毒癥、血色病等，細(xì)胞外鐵顯著增加而鐵粒幼紅細(xì)胞可降低。骨髓檢查專題知識講座第39頁（二）中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色（NAP）

中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶是成熟粒細(xì)胞特異性顆粒（中性顆粒）中釋放一個酶，其活性與粒細(xì)胞成熟程度和功效相關(guān)，正常人只有成熟中性粒細(xì)胞（包含桿狀核）可見陽性。

1.原理（偶氮偶聯(lián)法）中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶在PH9.2—9.8緩沖液中能水解磷酸萘酚鈉，釋放出萘酚與重氮鹽偶聯(lián)，形成不溶性偶氮染料而沉積于中性粒細(xì)胞胞漿中。骨髓檢查專題知識講座第40頁2.NAP染色結(jié)果NAP存在于中性成熟粒細(xì)胞中，陽性結(jié)果為胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)有色顆粒狀或彌散狀沉淀。計數(shù)100個成熟中性粒細(xì)胞，依據(jù)細(xì)胞胞漿顏色深淺及顆粒分布情況判定為：（-）、（+）、（++）、（+++）、（++++），分別計0、1、2、3、4分。100個細(xì)胞中陽性細(xì)胞總數(shù)即為陽性率，100個細(xì)胞中陽性細(xì)胞分?jǐn)?shù)總和即為積分。3.參考范圍

NAP積分值為14～113分

骨髓檢查專題知識講座第41頁

（-）（+）（++）（+++）（++++）

嗜酸性粒細(xì)胞單核細(xì)胞淋巴細(xì)胞ABCD骨髓檢查專題知識講座第42頁3.NAP臨床意義

有些生理性原因可使酶活性發(fā)生改變，如應(yīng)激狀態(tài)、經(jīng)前期、妊娠期、新生兒等可使NAP活性增加。臨床常應(yīng)用于以下疾病判別：

NAP↑NAP↓急性淋巴細(xì)胞白血病急性髓細(xì)胞白血?。！?、紅）類白血病反應(yīng)慢性粒細(xì)胞白血?。弊兤谠龈撸┰僬螾NH反應(yīng)性組織細(xì)胞增生癥惡組真性RBC增多癥繼發(fā)性RBC增多癥細(xì)菌性感染病毒性感染阻塞性黃疸肝細(xì)胞性黃疸骨髓檢查專題知識講座第43頁（三）過氧化物酶（POX）染色復(fù)方聯(lián)苯胺法原理：細(xì)胞中髓過氧化物酶能分解過氧化氫，釋放新生態(tài)氧，新生態(tài)氧能將四甲基聯(lián)苯胺氧化成聯(lián)苯胺藍(lán)，聯(lián)苯胺藍(lán)自動脫氧呈棕色四甲基苯醌二胺。若加入亞硝基鐵氰化鈉，則與聯(lián)苯胺藍(lán)形成穩(wěn)定藍(lán)色顆粒，并定位于過氧化物酶所在部位。二氨基聯(lián)苯胺法原理：血細(xì)胞內(nèi)POX，在H2O2存在情況下，氧化二氨基聯(lián)苯胺，形成金黃色不溶性沉淀，定位于POX酶所在活性部位。骨髓檢查專題知識講座第44頁過氧化物酶染色操作1、取1毫升0.1%TMB溶液，加10微升亞硝基鐵氰化鈉飽和溶液混勻；2、于新鮮干燥血片（骨髓片）上滴加0.5mlTMB混合溶液，1min后再加稀過氧化氫溶液0.7ml，混勻，染色6min。3、傾去染液，待干，再以瑞氏染液復(fù)染15~20min,水洗，干后鏡檢。骨髓檢查專題知識講座第45頁過氧化物酶染色結(jié)果復(fù)方聯(lián)苯胺法細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)藍(lán)色或藍(lán)黑色顆粒即為陽性，依據(jù)藍(lán)色顆粒粗細(xì)、深淺及分布情況可劃分為以下三種情況：強陽性：顆粒粗而深染，充滿胞漿陽性：顆粒較粗，彌散分布弱陽性：顆粒細(xì)小，稀疏分布陰性弱陽性陽性強陽性骨髓檢查專題知識講座第46頁

二氨基聯(lián)苯胺法

細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)金黃色顆粒即為陽性過氧化物酶染色結(jié)果骨髓檢查專題知識講座第47頁過氧化物酶染色臨床意義

髓過氧化物酶主要存在于原始階段以下粒細(xì)胞和單核細(xì)胞胞漿內(nèi)，其含量伴隨細(xì)胞成熟而逐步增加，粒細(xì)胞系反應(yīng)較強，單核細(xì)胞系反應(yīng)較弱，而淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、巨核細(xì)胞、紅細(xì)胞系均為陰性。嗜堿粒細(xì)胞呈陰性，嗜酸粒細(xì)胞呈強陽性。骨髓檢查專題知識講座第48頁過氧化物酶染色臨床意義

過氧化物酶染色在臨床上主要用于判別急性髓細(xì)胞和急性淋巴細(xì)胞白血病，同時還有利于急性髓細(xì)胞白血病分型。

M2、M3反應(yīng)強，M1、M5反應(yīng)弱，尤其有利于M3與M5判別。

急性淋巴細(xì)胞白血病急性單核細(xì)胞白血病急性粒細(xì)胞白血病急性早幼粒細(xì)胞白血病

CDEF骨髓檢查專題知識講座第49頁過氧化物酶染色質(zhì)量確保1、過氧化物酶染色要求標(biāo)本一定要新鮮，骨髓片與血片均可。2、過氧化氫輕易失效，可將其滴于血膜上，觀察有沒有氣泡產(chǎn)生來判斷。3、過氧化氫濃度應(yīng)適宜，過高會抑制酶作用。4、配制TMB乙醇濃度應(yīng)掌握在85—88%為好，過高會使蛋白快速凝固，影響染液滲透。5、染液PH以5.5為好。6、細(xì)胞化學(xué)染色不是為識別單個細(xì)胞，更不能以單個細(xì)胞反應(yīng)來解釋結(jié)果，而應(yīng)依據(jù)全片整體情況來分析。骨髓檢查專題知識講座第50頁（四）蘇丹黑B染色法原理蘇丹黑B是一個較強脂溶性染料，易溶于細(xì)胞中脂質(zhì)成份中去，從而顯示細(xì)胞中脂質(zhì)所在。臨床意義蘇丹黑B染色結(jié)果及臨床應(yīng)用與過氧化物酶染色基礎(chǔ)一致，主要用于急性白血病類型判別。因其與細(xì)胞中脂質(zhì)結(jié)合而不受涂片新鮮程度影響。其敏感度高于過氧化物酶法，但特異性較過氧化物酶法低。骨髓檢查專題知識講座第51頁（五）過碘酸-雪夫染色（糖原染色）原理過碘酸是種氧化劑，能使含有乙二醇基（-CHOH-CHOH）多糖類物質(zhì)氧化，形成二醛基（-CHO-CHO）。醛基與雪夫試劑中無色品紅結(jié)合變成紫紅色化合物，沉積于含有多糖類細(xì)胞內(nèi)。該反應(yīng)稱為過碘酸-雪夫反應(yīng)（PAS），又稱糖原染色。骨髓檢查專題知識講座第52頁正常血細(xì)胞染色反應(yīng)1.粒細(xì)胞系統(tǒng)分化差原始粒細(xì)胞呈陰性，分化好原始粒細(xì)胞至中性分葉核粒細(xì)胞均呈陽性反應(yīng)，并伴隨細(xì)胞成熟而逐步增強，陽性呈彌散性、細(xì)顆粒狀；嗜堿性粒細(xì)胞中嗜堿性顆粒呈陽性，而顆粒之間胞質(zhì)不著色；嗜酸性粒細(xì)胞中嗜酸性顆粒不著色，而顆粒之間胞質(zhì)呈紅色。2.紅細(xì)胞系統(tǒng)有核紅細(xì)胞及紅細(xì)胞均呈陰性。3.單核細(xì)胞系統(tǒng)分化差原始單核細(xì)胞呈陰性，其它陰性或陽性，陽性多數(shù)呈細(xì)顆粒狀。4.淋巴細(xì)胞少數(shù)呈陽性，陽性率常小于20％，陽性呈粗顆粒狀或塊狀。5.巨核細(xì)胞系統(tǒng)巨核細(xì)胞和血小板呈陽性，呈顆粒狀或塊狀。骨髓檢查專題知識講座第53頁EFGHABCDE淋巴細(xì)胞呈顆粒狀陽性，F(xiàn)淋巴細(xì)胞呈粗顆粒狀陽性，G單核細(xì)胞顆粒狀陽性，H有核紅細(xì)胞呈陰性A中性粒細(xì)胞呈彌散狀陽性，B中性幼稚粒細(xì)胞呈彌散、顆粒狀陽性，C嗜酸性粒細(xì)胞顆粒呈陰性，D嗜堿性粒細(xì)胞顆粒呈陽性。骨髓檢查專題知識講座第54頁糖原染色臨床意義臨床上可用于（1）判別紅白血病、MDS幼紅細(xì)胞陽性巨幼貧、再障幼紅細(xì)胞陰性（2）判別急粒白血病細(xì)胞陰性急淋白血病細(xì)胞陽性急單白血病細(xì)胞極弱陽/陰性（3）判別弋謝細(xì)胞強陽性尼曼一匹克細(xì)胞陰性骨髓檢查專題知識講座第55頁（六）特異性酯酶染色（氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色）原理粒細(xì)胞內(nèi)特異性酯酶能水解氯乙酸AS-D萘酚，產(chǎn)生AS-D萘酚與重氮鹽堅牢紫醬GBC偶聯(lián)，生成不溶性紅色沉淀，并定位于胞漿中。

粒細(xì)胞酯酶GBC

氯乙酸AS—D萘酚AS-D萘酚紅色沉淀骨髓檢查專題知識講座第56頁正常血細(xì)胞染色反應(yīng)

特異性酯酶主要分布于中性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞胞漿內(nèi)，陽性反應(yīng)呈紅寶石顆粒狀。1.粒細(xì)胞系統(tǒng)分化差原始粒細(xì)胞呈陰性，分化好原始粒細(xì)胞以下各階段均呈陽性，嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞呈陰性。2.單核細(xì)胞系統(tǒng)個別細(xì)胞呈弱陽性，其它呈陰性。3.其它細(xì)胞如淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、巨核細(xì)胞、有核紅細(xì)胞、血小板等均呈陰性，肥大細(xì)胞陽性。

中性粒細(xì)胞呈強陽性幼稚粒細(xì)胞呈強陽性原始細(xì)胞呈陽性淋巴細(xì)胞呈陰性骨髓檢查專題知識講座第57頁特異性酯酶染色臨床意義臨床上主要用于急性白血病判別

急粒急單急淋急性粒-單白血病陽性陰性陰性個別細(xì)胞呈陽性骨髓檢查專題知識講座第58頁（七）非特異性酯酶染色非特異性酯酶包含有α-醋酸萘酚酯酶（α-NAE）、α-丁酸萘酚酯酶（α-NBE）、醋酸AS-D萘酚酯酶染色原理：細(xì)胞中萘酚酯酶能水解各種萘酚酯，生成萘酚與重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性有色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酶所在部位。上述萘酚酯酶可存在于單核細(xì)胞、粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞中，都屬非特異性酯酶。單核細(xì)胞系統(tǒng)陽性可被氟化鈉抑制，所以需同時做氟化鈉抑制試驗。骨髓檢查專題知識講座第59頁正常血細(xì)胞染色反應(yīng)1.正常單核系分化差原始單核細(xì)胞呈陰性外，各階段均呈陽性，可被氟化鈉所抑制。2.粒系和淋巴系細(xì)胞含量少，呈弱陽性或陰性，陽性不被氟化鈉抑制。3.其它細(xì)胞巨核細(xì)胞和血小板呈陽性，少數(shù)有核紅細(xì)胞呈弱陽性，都不被氟化鈉抑制。骨髓檢查專題知識講座第60頁非特異性酯酶染色臨床意義臨床上可用于急性白血病類型判別。（1）急單白血?。∕5）細(xì)胞呈陽性，粒-單細(xì)胞白血病（M4）個別細(xì)胞呈陽性，可被氟化鈉抑制（2）急粒白血?。ㄖ饕荕3）早幼粒呈陽性，不被氟化鈉抑制（3）急淋白血病細(xì)胞呈陰性骨髓檢查專題知識講座第61頁（八）酯酶雙染色【原理】在同一張涂片上進行兩種酯酶染色方法稱為酯酶雙染色。多數(shù)采取一個特異性酯酶加一個非特異性酯酶染色。反應(yīng)原理基礎(chǔ)上同各自染色原理，同一張涂片上細(xì)胞要分別在兩種不一樣基質(zhì)液中作用一定時間，最終復(fù)染，顯微鏡觀察?！九R床意義】酯酶雙染色可同時觀察兩種不一樣或同一