抗原抗體反應(yīng)的原理

關(guān)于抗原抗體反應(yīng)的原理緒言第2頁,共50頁，2024年2月25日，星期天

第一節(jié)免疫學(xué)技術(shù)的范疇與應(yīng)用一、免疫學(xué)技術(shù)的范疇二、免疫學(xué)技術(shù)的應(yīng)用特點第3頁,共50頁，2024年2月25日，星期天免疫學(xué)技術(shù)的范疇1、對具有免疫活性物質(zhì)的定性、定量測定2、對免疫系統(tǒng)的組成成分的數(shù)量、狀態(tài)的測定第4頁,共50頁，2024年2月25日，星期天

免疫學(xué)技術(shù)的應(yīng)用特點1、對象——“包羅萬象”2、方法——“兼容并蓄”第5頁,共50頁，2024年2月25日，星期天

第二節(jié)有關(guān)免疫學(xué)基本概念一、抗原的概念與屬性二、免疫細胞的概念與分類三、免疫應(yīng)答的概念與過程第6頁,共50頁，2024年2月25日，星期天免疫原性——可識別、可反應(yīng)性（誘導(dǎo)機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的特性）免疫反應(yīng)性

——選擇結(jié)合性（和免疫應(yīng)答產(chǎn)物特異性結(jié)合的特性）抗原的概念與屬性第7頁,共50頁，2024年2月25日，星期天免疫細胞的概念與分類免疫細胞（Immunecells）泛指所有參與免疫應(yīng)答及與免疫應(yīng)答活動相關(guān)的細胞。免疫活性細胞（Immunecompetentcell，ICC）能夠接受抗原刺激、產(chǎn)生特異性的活化、增殖、分化并形成效應(yīng)產(chǎn)物的淋巴細胞。第8頁,共50頁，2024年2月25日，星期天

免疫細胞的類型

紅細胞血小板肥大細胞中性粒細胞巨噬細胞樹突狀細胞漿細胞T細胞NK細胞第9頁,共50頁，2024年2月25日，星期天免疫應(yīng)答的概念與過程免疫應(yīng)答（immuneresponse）免疫系統(tǒng)接觸抗原后，免疫細胞對抗原進行識別；并使特異性淋巴細胞活化、增殖；表現(xiàn)出免疫效應(yīng)的過程。免疫應(yīng)答的階段1、抗原識別階段（antigen-recognizingphase）2、淋巴細胞活化階段（lymphocyte-activatingphase）

3、抗原清除階段（antigen-eliminatingphase）第10頁,共50頁，2024年2月25日，星期天

第三節(jié)抗原抗體反應(yīng)的基本原理一、抗原抗體反應(yīng)的原理二、抗原抗體反應(yīng)的特點三、影響抗原抗體反應(yīng)的因素第11頁,共50頁，2024年2月25日，星期天抗原抗體反應(yīng)的原理1、抗原抗體結(jié)合的作用力2、抗原抗體結(jié)合物析出原因第12頁,共50頁，2024年2月25日，星期天引起抗原抗體結(jié)合的作用力1、電荷引力（庫侖引力）2、電子云引力（VanderWaals力）3、氫鍵結(jié)合力4、疏水作用力第13頁,共50頁，2024年2月25日，星期天抗原抗體結(jié)合物析出的原因析出+——++——+—++—+—+—+——++——+—++—+—+—電解質(zhì)+——++——+—++—+—+—+——++——+—++—+—+—+——++——+—++—+—+—+——++——+—++—+—+—+——++——+—++—+—+—+——++——+—++—+—+—第14頁,共50頁，2024年2月25日，星期天

抗原抗體反應(yīng)的特點1、特異性2、可逆性3、適合比例性第15頁,共50頁，2024年2月25日，星期天特異性抗原A抗原C抗原B特異性反應(yīng)交叉反應(yīng)無反應(yīng)第16頁,共50頁，2024年2月25日，星期天可逆性K（親和常數(shù)）=Ag+AbAgAb第17頁,共50頁，2024年2月25日，星期天適合比例性抗體含量抗原含量前帶后帶等價帶第18頁,共50頁，2024年2月25日，星期天網(wǎng)格學(xué)說（latticetheory）抗體過剩抗原過?？贵w抗體比例合適第19頁,共50頁，2024年2月25日，星期天

抗原抗體反應(yīng)的影響因素1、電解質(zhì)2、酸堿度（pH值6-8）3、溫度（37-42。C）第20頁,共50頁，2024年2月25日，星期天

第四節(jié)免疫學(xué)檢測技術(shù)的評價一、評價標準

二、特異性與敏感性的關(guān)系第21頁,共50頁，2024年2月25日，星期天評價標準Specificity（特異）Sensitivity（敏感）Simplicity（簡便）Safety（安全）Saving（節(jié)約）第22頁,共50頁，2024年2月25日，星期天特異性與敏感性的關(guān)系特異性高、敏感性低

敏感性高、特異性低第23頁,共50頁，2024年2月25日，星期天抗原的提取與制備第24頁,共50頁，2024年2月25日，星期天

第一節(jié)抗原/免疫原制備的基本概念一、抗原制備的目的二、抗原的“純度”三、抗原制備的主要技術(shù)途徑第25頁,共50頁，2024年2月25日，星期天抗原制備的目的免疫原：激活T、B細胞半抗原：檢測相應(yīng)抗體第26頁,共50頁，2024年2月25日，星期天抗原的“純度”免疫原：保留足夠的可被T、B細胞識別的抗原決定簇半抗原：盡可能減少影響反應(yīng)特異性的抗原決定簇第27頁,共50頁，2024年2月25日，星期天抗原制備的主要技術(shù)途徑天然抗原——分離、純化半抗原——人工合成、載體聯(lián)接抗原肽——合成、基因工程制備第28頁,共50頁，2024年2月25日，星期天

第二節(jié)完全抗原/免疫原的制備方法一、顆粒性抗原的制備二、可溶性抗原的制備第29頁,共50頁，2024年2月25日，星期天顆粒性抗原的制備1、采集、分離抗原2、無害化處理第30頁,共50頁，2024年2月25日，星期天可溶性抗原的制備與純化1、處理與粉碎2、蛋白質(zhì)分離3、單一組分提取4、抗原純度鑒定

第31頁,共50頁，2024年2月25日，星期天處理與粉碎組織粉碎：機械、生物

細胞破碎：物理、化學(xué)、生物

第32頁,共50頁，2024年2月25日，星期天蛋白質(zhì)分離選擇性沉淀：鹽析有機溶劑沉淀水溶性非離子型聚合物沉淀

透析技術(shù)：超濾技術(shù)：

第33頁,共50頁，2024年2月25日，星期天單一組分提取層析技術(shù)：凝膠過濾離子交換親和層析

離心技術(shù)：差速離心密度梯度離心電泳技術(shù)：電泳洗脫等電聚焦第34頁,共50頁，2024年2月25日，星期天凝膠層析（分子篩）第35頁,共50頁，2024年2月25日，星期天離子交換層析+++———————++++++++——+++——++第36頁,共50頁，2024年2月25日，星期天親和層析第37頁,共50頁，2024年2月25日，星期天抗原純度鑒定方法：層析性質(zhì)測定電泳法免疫法指標：電泳純免疫純第38頁,共50頁，2024年2月25日，星期天

第三節(jié)半抗原免疫原制備的方法一、載體的選擇二、半抗原與載體的聯(lián)接第39頁,共50頁，2024年2月25日，星期天載體的選擇蛋白質(zhì)載體：BSA、HAS、OVA、KLH聚合多肽載體：多聚賴氨酸高分子聚合物載體：PVP、羧甲基纖維素第40頁,共50頁，2024年2月25日，星期天半抗原與載體的聯(lián)接1、連接方式：物理法（吸附）化學(xué)法2、化學(xué)連接方法：直接聯(lián)接法：間接聯(lián)接法：第41頁,共50頁，2024年2月25日，星期天半抗原與載體直接聯(lián)接碳化二亞胺法蛋白質(zhì)-COO—+R-N+=CN-R`

H-N+-R蛋白質(zhì)-COO-C-NH-R`+半抗原-NH2

O蛋白質(zhì)-C-NH-半抗原+R-NH-CO-NHR`第42頁,共50頁，2024年2月25日，星期天半抗原與載體直接聯(lián)接

戊二醛法蛋白質(zhì)-NH2

+半抗原-NH2+COH-（CH2）

3-

COH蛋白質(zhì)-N=CH-（CH2）

3–

CH=N-半抗原第43頁,共50頁，2024年2月25日，星期天半抗原與載體直接聯(lián)接

氯甲酸異丁酯法半抗原-COOH

+Cl-COO-CH2CH（CH3）2

OO半抗原-C-O-C-O-CH2CH（CH3）2+蛋白質(zhì)-NH2

半抗原-CO-NH-蛋白質(zhì)+HO-CH2CH（CH3）2

第44頁,共50頁，2024年2月25日，星期天半抗原與載體間接聯(lián)接琥珀酸酐法

OO半抗原-CH2–OH+C-O-CCH3CH3O半抗原-CH2–O-C-(CH2)2-COOH第45頁,共50頁，2024年2月25日，星期天半抗原與載體間接聯(lián)接O-（羥甲基）羥胺法半抗原-C=O

+H2N-O-CH2-COOH

半抗原-C=N-O-CH2-COOH