生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座

四超二級(jí)結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)域

超二級(jí)結(jié)構(gòu)（supersecondarystructure）是指在多肽鏈中彼此鄰近二級(jí)結(jié)構(gòu)在空間折疊時(shí)相互靠近，相互作用，形成了一個(gè)有規(guī)則二級(jí)結(jié)構(gòu)聚集體，稱(chēng)為超二級(jí)結(jié)構(gòu)。當(dāng)前發(fā)覺(jué)超二級(jí)結(jié)構(gòu)有α螺旋組合（αα）、β折疊組合（βββ）和α螺旋β折疊組合（βαβ），其中以βαβ組合最為常見(jiàn)。這些超二級(jí)結(jié)構(gòu)能夠直接作為組成單位參加三級(jí)結(jié)構(gòu)或結(jié)構(gòu)域構(gòu)建，它是蛋白質(zhì)構(gòu)象中二級(jí)結(jié)構(gòu)與三級(jí)結(jié)構(gòu)之間一個(gè)過(guò)渡層次，故稱(chēng)超二級(jí)結(jié)構(gòu)。也稱(chēng)為基元(motif)或基序或模體。

蛋白質(zhì)超二級(jí)結(jié)構(gòu)是指由若干相鄰二級(jí)結(jié)構(gòu)單元組合在一起，彼此相互作用，形成有規(guī)則在空間上能夠識(shí)別二級(jí)結(jié)構(gòu)組合體，有三種基本組合形式αα、αβα、βββ。生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第1頁(yè)生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第2頁(yè)

結(jié)構(gòu)域（StructuralDomain）是介于二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)之間一個(gè)結(jié)構(gòu)層次。是指蛋白質(zhì)亞基結(jié)構(gòu)中顯著分開(kāi)緊密球狀結(jié)構(gòu)區(qū)域，是蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)內(nèi)獨(dú)立折疊單元。結(jié)構(gòu)域通常都是幾個(gè)超二級(jí)結(jié)構(gòu)單元組合。結(jié)構(gòu)域與結(jié)構(gòu)域之間經(jīng)常有一段長(zhǎng)短不等肽鏈相連，形成所謂鉸鏈區(qū)。不一樣蛋白質(zhì)分子中結(jié)構(gòu)域數(shù)目不一樣，同一蛋白質(zhì)分子中幾個(gè)結(jié)構(gòu)域彼此相同或很不相同。常見(jiàn)結(jié)構(gòu)域氨基酸殘基數(shù)在100～400個(gè)之間，最小結(jié)構(gòu)域只有40～50個(gè)氨基酸殘基，大結(jié)構(gòu)域可超出400個(gè)氨基酸殘基。結(jié)構(gòu)域普通都含有一定功效。也叫模體（motif）或基序生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第3頁(yè)生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第4頁(yè)生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第5頁(yè)

-螺旋

-轉(zhuǎn)角HTH模體結(jié)構(gòu)示意圖螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋模體由2個(gè)

螺旋和1個(gè)

轉(zhuǎn)角組成。HTH模體是DNA結(jié)合蛋白三維結(jié)構(gòu)中一部分，每一DNA結(jié)合蛋白含一個(gè)HTH模體，位于分子表面。DNA結(jié)合蛋白常以二聚體形式存在，兩個(gè)HTG模體相距3.4nm，與DNA螺距相當(dāng)，分別結(jié)合于DNA分子中相鄰兩個(gè)深溝中。HTH模體約由20個(gè)氨基酸殘基組成，第1個(gè)

螺旋含7個(gè)氨基酸殘基，

轉(zhuǎn)角含4個(gè)氨基酸殘基，第2個(gè)

螺旋含9個(gè)氨基酸殘基。第2個(gè)

螺旋是DNA識(shí)別部位，結(jié)合于DNA分子深溝中。

螺旋

螺旋

轉(zhuǎn)角NC模體：在許多蛋白質(zhì)分子中，常發(fā)覺(jué)幾個(gè)（多為2

3個(gè)）含有二級(jí)結(jié)構(gòu)肽段相互靠近，形成含有特定功效空間構(gòu)象；或者僅是一個(gè)含有特定功效很短肽段。

模體（motif）生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第6頁(yè)五球狀蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)

由蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)、超二級(jí)結(jié)構(gòu)或結(jié)構(gòu)域相互連接組合形成蛋白質(zhì)構(gòu)象結(jié)構(gòu)稱(chēng)謂蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)。含有三級(jí)結(jié)構(gòu)多肽鏈稱(chēng)謂亞基（subunit）。單個(gè)多肽鏈組成蛋白，含有三級(jí)結(jié)構(gòu)才能有活性。多條肽鏈形成蛋白，需要亞基深入組合才能有活性。親水基團(tuán)在外，疏水基團(tuán)在內(nèi)，形成疏水關(guān)鍵。生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第7頁(yè)生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第8頁(yè)維持蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)化學(xué)鍵為非共價(jià)鍵氫鍵；鹽堿（離子鍵）；疏水鍵；范德華力；配位鍵；二硫鍵生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第9頁(yè)六蛋白質(zhì)四級(jí)結(jié)構(gòu)由兩條或以上含有三級(jí)結(jié)構(gòu)多肽鏈以非共價(jià)鍵形式組合在一起，形成結(jié)構(gòu)稱(chēng)謂蛋白質(zhì)四級(jí)結(jié)構(gòu)。生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第10頁(yè)

1

2

2

1NCNC血紅蛋白四級(jí)結(jié)構(gòu)成人血紅蛋白由2條

鏈和2條

鏈組成,各亞基分別含一個(gè)血紅素.生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第11頁(yè)生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第12頁(yè)第四節(jié)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功效關(guān)系自然規(guī)律：結(jié)構(gòu)決定功效，功效反應(yīng)結(jié)構(gòu)一蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)決定高級(jí)結(jié)構(gòu)二結(jié)構(gòu)與功效一級(jí)結(jié)構(gòu)相同蛋白序列相同；氨基酸變異造成功效喪失?？臻g結(jié)構(gòu)與功效構(gòu)象與功效鐮刀型貧血癥：生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第13頁(yè)生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第14頁(yè)

表中九種動(dòng)物之間胰島素分子一級(jí)結(jié)構(gòu)中存在氨基酸殘基組成差異不影響胰島素生物活性。臨床上曾經(jīng)應(yīng)用豬和牛胰島素治療人糖尿病，取得了顯著療效。

胰島素分子中氨基酸殘基差異部分來(lái)源氨基酸殘基差異部分A8A9A10B30人ThrSerIleThr豬TheSerIleAla狗ThrSerIleAla兔ThrSerIleSer牛AlaSerValAla羊AlaGlyValAla馬ThrGlyIleAla抹香鯨ThrSerIleAla

鯨AlaSerThrAla生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第15頁(yè)

絲氨酸蛋白酶催化基團(tuán)絲氨酸周?chē)潭ò被嵝蛄?/p>

絲氨酸蛋白酶是活性中心含有絲(或蘇)氨酸蛋白水解酶家族。從表中可見(jiàn)，其活性部位絲氨酸（195）附近氨基酸殘基序列相似。表中藍(lán)色標(biāo)識(shí)氨基酸為同源序列。絲氨酸蛋白酶含有相同一級(jí)結(jié)構(gòu)和相同三級(jí)結(jié)構(gòu)。生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第16頁(yè)

動(dòng)物體細(xì)胞色素C一級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)化樹(shù)圖中數(shù)字表示該類(lèi)動(dòng)物與其祖先相比細(xì)胞色素C一級(jí)結(jié)構(gòu)氨基酸殘基差異數(shù)生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第17頁(yè)0

10

121101110101093201110653010954230

98654520

1011786766013121110910981201312121110109810201110109887610330

14152221202119182119201701514111099891188722018171413111211111311121124100212119181718171718171817261815027262222222122212423242229242224031302928272527262828272731282932140人,猩猩獼猴馬驢豬、牛、羊狗小灰鯨兔袋鼠雞、火雞企鵝北京鴨響尾蛇嚙龜牛蛙金槍魚(yú)螺旋蠅蠶蛾

蠶蛾螺旋蠅金槍魚(yú)牛蛙?chē)旐懳采弑本喥簌Z雞，火雞袋鼠兔小灰鯨狗豬牛羊驢馬獼猴人，猩猩人與一些動(dòng)物細(xì)胞色素C一級(jí)結(jié)構(gòu)氨基酸差異數(shù)量比較生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第18頁(yè)

磷酸丙糖異構(gòu)酶和丙酮酸激酶結(jié)構(gòu)域1空間構(gòu)象相同性

磷酸丙糖異構(gòu)酶催化3-磷酸甘油醛和磷酸二羥丙酮互變，丙酮酸激酶催化磷酸烯醇式丙酮酸轉(zhuǎn)移磷酸基生成ATP和烯醇式丙酮酸，但其空間結(jié)構(gòu)含有相同性，其空間結(jié)構(gòu)中心均是由

8個(gè)

-折疊組成-折疊桶，每個(gè)

-折疊又被

-螺旋所分隔磷酸丙糖異構(gòu)酶丙酮酸激酶結(jié)構(gòu)域1生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第19頁(yè)生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第20頁(yè)朊病毒與蛋白質(zhì)構(gòu)象病

朊病毒蛋白（prionprotein,PrP）是正常存在于人體神經(jīng)原、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞等各種細(xì)胞細(xì)胞膜上糖蛋白。朊病毒（prion,PrPsc）是正常朊病毒蛋白（PrPc）空間構(gòu)象由

螺旋變成

折疊所致。朊病毒本身不能自我復(fù)制，但能夠攻擊大腦正常朊病毒蛋白，使之構(gòu)象改變并與其結(jié)合，形成朊病毒二聚體。此二聚表達(dá)再攻擊正常朊病毒蛋白，形成朊病毒四聚體。周而復(fù)始，腦組織中朊病毒不停積蓄，造成腦組織發(fā)生退行性病變。生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第21頁(yè)

正常朊病毒蛋白與朊病毒空間結(jié)構(gòu)差異朊病毒（PrPsc）是蛋白質(zhì)，不含核酸。它是正常朊病毒蛋白（PrPc）空間構(gòu)象由

-螺旋變成

-片層結(jié)構(gòu)所致。所以，這類(lèi)疾病又稱(chēng)蛋白質(zhì)構(gòu)象病。朊病毒本身不能復(fù)制，但它卻能夠攻擊大腦正常朊病毒蛋白，使其發(fā)生構(gòu)象改變，并與其結(jié)合，成為致病朊病毒二聚體。此二聚體再攻擊正常朊病毒蛋白。這樣，腦組織中朊病毒不停積蓄，造成腦組織發(fā)生退行性變。

正常朊病毒蛋白結(jié)構(gòu)（顯示

-螺旋）

朊病毒結(jié)構(gòu)（顯示

-片層結(jié)構(gòu)）生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第22頁(yè)詳細(xì)幾個(gè)蛋白功效胰島素（Insulin）血紅蛋白（Hemoglobin）免疫球蛋白（Immunoglobulin）膜蛋白結(jié)構(gòu)前蛋白原活化生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第23頁(yè)

人胰島素一級(jí)結(jié)構(gòu)胰島素由A、B兩條多肽鏈組成，A鏈含21個(gè)氨基酸殘基，B鏈含30個(gè)氨基酸殘基。A鏈內(nèi)有一個(gè)鏈內(nèi)二硫鍵，A與B之間有兩個(gè)鏈間二硫鍵。因?yàn)閮蓷l鏈之間由共價(jià)鍵相連接，所以胰島素沒(méi)有四級(jí)結(jié)構(gòu)。SerGlyIleValGluGlnCysCysThrIleCysSerLeuTyrGlnLeuGluAsnTyrCysAsnPheValAsnGlnHisLeuCysGlySerHisLeuValGluAlaLeuTyrLeuValCysGlyGlyGluArgPhePheTyrThrProLysThrNH215101520COOHA鏈NH2151015202530HOOCB鏈生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第24頁(yè)生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第25頁(yè)生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第26頁(yè)生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第27頁(yè)胞外區(qū)跨膜區(qū)胞內(nèi)區(qū)生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第28頁(yè)生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第29頁(yè)第五節(jié)蛋白質(zhì)性質(zhì)一蛋白質(zhì)膠體性質(zhì)親水膠體(1-100nm)粒子，含有膠體溶液性質(zhì)（真溶液）丁達(dá)爾現(xiàn)象；布朗運(yùn)動(dòng)；不透過(guò)半透膜；穩(wěn)定膠體溶液（真溶液）。生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第30頁(yè)透析(dialysis):磁力攪拌器透析前透析后透析袋經(jīng)過(guò)透析，小分子通透透析袋，散布于透析液中，大分子量蛋白質(zhì)不能通透透析袋，留在透析袋內(nèi)。從而，蛋白質(zhì)溶液中小分子物質(zhì)經(jīng)過(guò)透析被分離除去。生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第31頁(yè)形成穩(wěn)定膠體溶液原因：水化膜和同性電荷蛋白質(zhì)所帶電荷和其周?chē)@水化膜是維持蛋白質(zhì)在水溶液中穩(wěn)定兩大原因。脫水和中和電荷能夠造成蛋白質(zhì)沉淀。水化膜正電荷++++++++++++++++++++++++

H+OH-OH-OH-H+H+脫水脫水脫水蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)親水膠體帶負(fù)電荷親水膠體蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)帶正電荷親水膠體帶正電荷疏水膠體不帶電疏水膠體（極易沉淀）帶負(fù)電疏水膠體負(fù)電荷生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第32頁(yè)二兩性解離和等電點(diǎn)pIpHpH﹤﹤生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第33頁(yè)

三蛋白質(zhì)變性作用和復(fù)性

生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第34頁(yè)

牛胰核糖核酸酶分子變性與復(fù)性變性是指蛋白質(zhì)在一些理化原因作用下，其正?？臻g構(gòu)象遭到破壞，主要是次級(jí)鍵或二硫鍵發(fā)生破壞，造成蛋白質(zhì)理化性質(zhì)改變（如溶解度下降、粘度增加）和生物學(xué)活性喪失。蛋白質(zhì)變性不影響其一級(jí)結(jié)構(gòu)。三蛋白質(zhì)變性作用和復(fù)性生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第35頁(yè)變性物理原因：加熱、紫外線(xiàn)照射、超聲、猛烈震蕩等化學(xué)原因：強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、有機(jī)溶劑、重金屬鹽等沉淀改變pH至pI破壞水溶液中蛋白質(zhì)水化膜和中和電荷（變性蛋白質(zhì)）（蛋白質(zhì)未變性）凝固加熱（變性，不再溶解）變性不一定沉淀沉淀不一定變性凝固均變性并不溶解加熱生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第36頁(yè)蛋白質(zhì)變性（Denaturation）蛋白質(zhì)復(fù)性（Renaturation)四蛋白質(zhì)沉淀（sedimentation）作用precipitation（沉淀）；Aggregation（凝集）1中性鹽法鹽析（salting-out）；分段鹽析（gradingsalting-out）重金屬鹽2有機(jī)溶劑乙醇；丙酮3生物堿單寧酸；苦味酸4有機(jī)酸三氯乙酸生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第37頁(yè)第六節(jié)蛋白質(zhì)分離純化與測(cè)定一普通標(biāo)準(zhǔn)步驟材料取得與破碎（機(jī)械、滲透、凍融、超聲和酶解等）蛋白抽提蛋白粗體（沉淀）蛋白質(zhì)分離（精純化）測(cè)定：濃度；純度；分子量；性質(zhì)功效判定等生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第38頁(yè)

蛋白質(zhì)理化性質(zhì)與慣用純化方法二蛋白質(zhì)提取與純化原理生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第39頁(yè)（一）改變蛋白質(zhì)溶解度鹽析：

高濃度中性鹽使蛋白質(zhì)從溶液中析出有機(jī)溶劑沉淀：

降低溶液介電常數(shù)，使蛋白質(zhì)分子間相互吸引而沉淀生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第40頁(yè)（二）依據(jù)蛋白質(zhì)分子大小不一樣分離方法離心(centrifugation)：

利用機(jī)械快速旋轉(zhuǎn)所產(chǎn)生離心力，將不一樣密度物質(zhì)進(jìn)行分離

依據(jù)轉(zhuǎn)速分類(lèi)：慣用離心機(jī)<10000rpm

高速離心機(jī)20000~25000rpm

超速離心機(jī)>50000rpm

相對(duì)離心力（×g）=1.119×10–5×（rpm）2×r

依據(jù)應(yīng)用分類(lèi)：分析型離心機(jī)制備型離心機(jī)[g:gravity,rpm:revolutionperminut,r:離心半徑]生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第41頁(yè)勻漿沉淀上清1000g,5min上清上清上清上清沉淀沉淀沉淀沉淀沉淀4000g,10min15000g,20min30000g,30min100000g,90min100000g,180min（未破壞真核細(xì)胞）（細(xì)胞膜碎片，細(xì)胞核）（線(xiàn)粒體，細(xì)菌）（溶酶體，菌體碎片）（微粒體）（核糖核蛋白體）胞液

亞細(xì)胞成份差速離心分離差速離心法是沉降速度離心一個(gè)，采取離心力由小到大分階段離心方法，將密度不一樣物質(zhì)分步驟地逐一分離開(kāi)來(lái)。亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)分離就是其中最好例子。差速離心法生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第42頁(yè)

幾個(gè)蛋白質(zhì)分子量與沉降系數(shù)關(guān)系在單位力場(chǎng)下，溶質(zhì)分子沉降速度與離心角速度、離心半徑呈正比，其百分比常數(shù)為沉降系數(shù)，用S表示，單位為秒。=s·

2

普通蛋白質(zhì)沉降系數(shù)為10

13

10

12秒，故人們以Svedberg(S)單位來(lái)表示沉降系數(shù)，即1S=10

13秒。沉降系數(shù)大小與蛋白質(zhì)密度和形狀相關(guān)。生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第43頁(yè)透析(dialysis):磁力攪拌器透析前透析后透析袋經(jīng)過(guò)透析，小分子通透透析袋，散布于透析液中，大分子量蛋白質(zhì)不能通透透析袋，留在透析袋內(nèi)。從而，蛋白質(zhì)溶液中小分子物質(zhì)經(jīng)過(guò)透析被分離除去。生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第44頁(yè)超濾（ultrafiltration）:

在一定壓力下，使蛋白質(zhì)溶液在經(jīng)過(guò)一定孔徑超濾膜時(shí)，小分子量物質(zhì)濾過(guò)，而大分子量蛋白質(zhì)被截留，從而到達(dá)分離純化目標(biāo)。這種方法既能夠純化蛋白質(zhì)，又可到達(dá)濃縮蛋白質(zhì)溶液目標(biāo)。

磁力攪拌器待超濾蛋白質(zhì)溶液加壓氮?dú)獬瑸V膜生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第45頁(yè)凝膠過(guò)濾（gelfiltration）：凝膠過(guò)濾又稱(chēng)分子篩層析，在層析柱內(nèi)填充惰性微孔膠粒（如交聯(lián)葡聚糖），將蛋白質(zhì)溶液加入柱上部后，小分子物質(zhì)經(jīng)過(guò)膠粒微孔進(jìn)入膠粒，向下流動(dòng)路徑加長(zhǎng)，移動(dòng)遲緩；大分子物質(zhì)不能或極難進(jìn)入膠粒內(nèi)部，經(jīng)過(guò)膠粒間空隙向下流動(dòng)，其流動(dòng)路徑短，移動(dòng)速度較快，從而到達(dá)按不一樣分子量將溶液中各組分分開(kāi)目標(biāo)

生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第46頁(yè)洗脫液膠粒樣品小分子大分子蛋白濃度洗脫體積各試管進(jìn)行連續(xù)搜集試管走行方向

凝膠過(guò)濾分離蛋白質(zhì)示意圖凝膠過(guò)濾生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第47頁(yè)

凝膠過(guò)濾分離蛋白質(zhì)示意圖生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第48頁(yè)依據(jù)各種蛋白質(zhì)在一定pH環(huán)境下所帶電荷種類(lèi)與數(shù)量不一樣特點(diǎn)，將不一樣蛋白質(zhì)給予分離。慣用方法有：離子交換層析電泳等電聚焦。

（三）依據(jù)蛋白質(zhì)電荷性質(zhì)分離方法生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第49頁(yè)低鹽濃度洗脫液高鹽濃度洗脫液各試管進(jìn)行連續(xù)搜集混合蛋白質(zhì)離子交換層析柱++++++++++++++++

離子交換層析分離蛋白質(zhì)示意圖試管走行方向離子交換層析(ionexchangechromatography)：生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座第50頁(yè)生物化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)下專(zhuān)家講座