pcr基因擴增專業(yè)知識講座

pcr基因擴增專業(yè)知識講座pcr基因擴增專業(yè)知識講座第1頁試驗目標經(jīng)過本試驗學習PCR反應基礎原理與試驗技術。pcr基因擴增專業(yè)知識講座第2頁試驗原理聚合酶鏈式反應(polymerasechainreaction,PCR)，是一個在體外快速擴增特定基因或DNA序列方法，故又稱為基因體外擴增法。在待擴增DNA片斷兩側和與其兩側互補兩個寡核苷酸引物，經(jīng)變性、退火和延伸若干個循環(huán)后，DNA擴增2n倍。pcr基因擴增專業(yè)知識講座第3頁PCR技術原理1.變性：在加熱或堿性條件下可使DNA雙螺旋氫鍵斷裂，形成單鏈DNA，稱之為變性。2.退火：是模板與引物復性。引物是與模板某區(qū)序列互補一小段DNA片段。3.延伸：從結合在特定DNA模板上引物為出發(fā)點，將四種脫氧核苷酸以堿基配對形式按5’→3’方向沿著模板次序合成新DNA鏈。pcr基因擴增專業(yè)知識講座第4頁(c)(b)引物25’3’3’3’5’5’(d)新引物5’3’靶DNA擴增(a)5’3’引物13’5’3’5’引物2互補鏈引物1互補鏈單位長度鏈不一樣長度鏈5’3’3’5’引物1互補鏈引物2互補鏈目標片段（不一樣長度鏈未示出）聚合酶鏈式反應示意圖(e)(f)(g)pcr基因擴增專業(yè)知識講座第5頁pcr基因擴增專業(yè)知識講座第6頁pcr基因擴增專業(yè)知識講座第7頁pcr基因擴增專業(yè)知識講座第8頁pcr基因擴增專業(yè)知識講座第9頁pcr基因擴增專業(yè)知識講座第10頁溫度（℃）時間（min）94726094℃變性（1min）60℃退火（1min）72℃延伸（1.5min）循環(huán)1循環(huán)2循環(huán)3PCR反應溫度循環(huán)周期PCR反應每一個溫度循環(huán)周期都是由DNA變性、引物退火和反應延伸三個步驟完成。圖中設定反應參數(shù)是94℃變性1min，60℃退火1min，72℃延伸1.5min。如此周而復始，重復進行，直至擴增產(chǎn)物數(shù)量滿足試驗需求為止。pcr基因擴增專業(yè)知識講座第11頁普通PCR反應條件pcr基因擴增專業(yè)知識講座第12頁試驗儀器電泳儀pcr基因擴增專業(yè)知識講座第13頁瓊脂糖凝膠電泳槽pcr基因擴增專業(yè)知識講座第14頁PCR儀pcr基因擴增專業(yè)知識講座第15頁凝膠成像系統(tǒng)pcr基因擴增專業(yè)知識講座第16頁移液器pcr基因擴增專業(yè)知識講座第17頁試驗材料1、DNA模板2、4種dNTP3、引物1、引物24、Taq酶5、瓊脂糖6、DNA相對分子質量標準物7、吸頭、50ulPCR管pcr基因擴增專業(yè)知識講座第18頁試劑10×PCR緩沖液(含Mg2＋)4×dNTP(每種1mmol)Tag酶1U/ulDNA模板引物1:5`-

GGGGAATTCATGGTGAGCAAGGGC-3`引物2:5`-GACCTGCAGGCATGCAAGCTTGGC-3`

引物溶液濃度10pmol/ulpcr基因擴增專業(yè)知識講座第19頁試驗步驟1在0.5mlRCR管內配置20ul反應體系：

CK(ul)1#(ul)模板01引物10.40.4引物20.40.410×PCRBuffer22Taq酶0.50.5dNTPs0.40.4ddH2O14.315.3Total2020pcr基因擴增專業(yè)知識講座第20頁PCR反應程序(1)94℃變性5min，(2)94℃變性1min，

(3)52℃退火1min，

(4)72℃延伸1min。(5)重復(2)-(4)30次（6）72℃延伸1min。pcr基因擴增專業(yè)知識講座第21頁試驗匯報要求：1、寫出本試驗目標、原理；2、試驗器材及試驗步驟；3、列出試驗結果示意圖并