體外診斷試劑生產(chǎn)質量控制要點

關于體外診斷試劑生產(chǎn)質量控制要點體外診斷試劑產(chǎn)品介紹一酶聯(lián)免疫診斷試劑產(chǎn)品乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）二快速診斷試劑產(chǎn)品人類免疫缺陷病毒抗體檢測試劑盒（膠體金法）三PCR核酸診斷試劑產(chǎn)品乙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）四臨床化學診斷試劑產(chǎn)品葡萄糖試劑盒（液體單試劑）（氧化酶法）第2頁,共96頁，2024年2月25日，星期天一.酶聯(lián)免疫診斷試劑產(chǎn)品【產(chǎn)品名稱】

乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）【包裝規(guī)格】96人份/盒【預期用途】

本試劑盒采用酶聯(lián)免疫法原理檢測HBsAg，適用于血清或血漿類標本。第3頁,共96頁，2024年2月25日，星期天酶聯(lián)免疫法反應原理雙抗體夾心法雙抗原夾心法標本抗-HBs抗-HBs-HRPHBsAg第4頁,共96頁，2024年2月25日，星期天乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）的原理

采用抗-HBs包被反應板，加入待測樣本，經(jīng)孵育后，加入抗-HBs-HRP，當樣本中存在HBsAg時，該HBsAg與包被抗-HBs結合并與抗-HBs-HRP結合形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP復合物，加入TMB底物產(chǎn)生顯色反應，反之則無顯色反應。第5頁,共96頁，2024年2月25日，星期天試劑盒組份1.微孔反應板2.酶結合物3.陽性對照4.陰性對照5.洗滌液6.顯色劑A7.顯色劑B8.終止液9.封片10.說明書第6頁,共96頁，2024年2月25日，星期天主要生產(chǎn)設備微孔反應板包被機微孔反應板全自動封閉生產(chǎn)線灌封流水線超聲波洗瓶機全自動進口分裝機生物安全柜酶標儀橫枕式包裝機第7頁,共96頁，2024年2月25日，星期天生產(chǎn)工藝流程圖合并分裝純化包被結酶純化配制配制配制抗-HBs血清酶標用抗-HBs抗-HBs-HRP酶結合物反應板包板用單抗-HBs單抗-HBs腹水正常人血清、陽性血陰、陽性對照顯色劑、終止液、洗滌液TMB、硫酸、吐溫20成品半成品滴配半成品檢定成品檢定第8頁,共96頁，2024年2月25日，星期天外購原輔料控制原輔料必須從合格供應商目錄所載廠家購入。采購的生產(chǎn)用原輔料，均應符合藥品的標準、包裝材料標準、生物制品規(guī)程或其它標準，不得對產(chǎn)品的質量產(chǎn)生不良影響。

第9頁,共96頁，2024年2月25日，星期天自制主要原料生產(chǎn)和質量控制要點

工藝用水抗原抗體酶標記物第10頁,共96頁，2024年2月25日，星期天基因工程HBsAg生產(chǎn)和質量控制要點生產(chǎn)工序質量控制要點細胞培養(yǎng)基因工程細胞株，經(jīng)接種復蘇后，進行細胞傳代培養(yǎng)。無菌操作，培養(yǎng)基的配制，細胞培養(yǎng)溫度，細胞的形態(tài)及傳代速度。純化收集的細胞培養(yǎng)上清液經(jīng)抗-HBs親和層析柱等純化。層析柱填料的使用次數(shù)，所用緩沖液的pH值，上樣、平衡、洗脫速度。第11頁,共96頁，2024年2月25日，星期天基因工程HBsAg質量標準效價：ELISA純度：采用SDS功能性實驗：陰性對照、陽性對照、陰性參考品符合率、最低檢出量、精密性、穩(wěn)定性蛋白濃度：用雙縮脲法測定第12頁,共96頁，2024年2月25日，星期天單抗-HBs生產(chǎn)和質量控制要點生產(chǎn)工序質量控制要點細胞復蘇及傳代培養(yǎng)單克隆抗體細胞株，經(jīng)接種復蘇后，進行細胞傳代培養(yǎng)。無菌操作，培養(yǎng)基的配制，細胞培養(yǎng)溫度。腹水制備福氏不完全佐劑免疫，7-10天后單克隆抗體細胞懸液注射于F1代小鼠，10天后采集小鼠腹水，離心，制得單抗-HBs腹水。對數(shù)生長期細胞接種。腹水純化用制備的單抗-HBs腹水，經(jīng)飽和硫酸銨二步沉淀，經(jīng)離子交換層析柱純化即為單抗-HBs。層析填料的使用次數(shù)，所用緩沖液的pH值，上樣、平衡、洗脫速度。純化的得率。第13頁,共96頁，2024年2月25日，星期天單抗-HBs質量標準純度：采用SDS法蛋白含量：采用Lowry法效價：ELISA效價功能性檢測：免疫活性、穩(wěn)定性第14頁,共96頁，2024年2月25日，星期天多抗-HBs生產(chǎn)和質量控制要點生產(chǎn)工序質量控制要點抗血清制備用福氏佐劑和純化HBsAg抗原制成乳化膠乳劑注射實驗動物，經(jīng)多次免疫后，采集動物血清。動物的選擇，乳劑配制的均一性。純化

抗血清，經(jīng)親和層析柱粗提后，正常人全血清等多種親和層析柱等純化制得。親和柱的制備及使用次數(shù)，所用緩沖液的pH等的控制，純化的收率。第15頁,共96頁，2024年2月25日，星期天多抗-HBs的質量標準純度：SDS法檢定蛋白含量：Lowry法效價：對流電泳法測定效價功能性檢測：免疫活性、穩(wěn)定性第16頁,共96頁，2024年2月25日，星期天多抗-HBs-HRP生產(chǎn)和質量控制要點生產(chǎn)工序質量控制要點酶的活化HRP與NaIO4反應，再加入乙二醇制成活化的酶溶液。辣根過氧化物酶RZ值≥3.0及活化時間的控制酶的偶聯(lián)酶溶液液加入抗-HBs抗體pH,溫度及時間的控制還原酶反應液加入NaBH4溶液還原。還原時間的控制純化飽和硫酸銨純化純度控制第17頁,共96頁，2024年2月25日，星期天辣根過氧化物酶質量標準溶解性：應符合要求PH值：應符合要求活性測定：應符合要求RZ值：應≥3.0

第18頁,共96頁，2024年2月25日，星期天多抗-HBs-HRP質量標準免疫活性穩(wěn)定性試驗第19頁,共96頁，2024年2月25日，星期天生產(chǎn)工序生產(chǎn)要點質量控制點反應板制備1包被液的配制pH值的控制2*反應板的包被包被液量的準確性，反應板包被放置的溫度、濕度及時間的控制3反應板的洗滌、加封閉液液量的準確性4*反應板的封閉房間溫度的控制，封閉時間的控制5反應板的抽干抽干機的真空度、溫度6*鋁箔袋的熱封房間的濕度控制，鋁箔袋的密封性7*反應板的抽檢應符合相關質量要求反應板制備生產(chǎn)和質量控制要點第20頁,共96頁，2024年2月25日，星期天反應板制備包被液配制質量控制點：包被緩沖液pH測定方法：用pH計測定第21頁,共96頁，2024年2月25日，星期天反應板制備反應板的包被質量控制點：包被液量的準確性要求：100μl/孔操作：將待包被的微孔反應板放置傳送帶上，開始包被，每塊包被板應用目測法檢查其96孔加液是否完整。前10塊包被板檢查加液量是否準確，檢后的包被板放入報廢專用盤內(nèi)，作報廢處理。

連續(xù)100塊包被板檢查合格后，進入正常包被過程。正常包被過程中每100塊包被板應抽1塊作過程檢查。第22頁,共96頁，2024年2月25日，星期天反應板制備反應板的包被質量控制點：反應板包被放置的溫度及時間的控制要求：2-8℃冷庫包被過夜。

操作：包被板應堆放整齊，并用一次性塑料布覆蓋。注明產(chǎn)品名稱、批號和時間，放入2-8℃冷庫包被過夜。第23頁,共96頁，2024年2月25日，星期天反應板制備反應板的洗滌、加封閉液質量控制點：液量的準確性要求:

洗板液量：200μl/孔封閉液量：250μl/孔

第24頁,共96頁，2024年2月25日，星期天反應板制備反應板的封閉質量控制點：封閉溫度：37±0.5℃

封閉時間：2小時

操作：將加好封閉液的包被板整齊堆放在托盤內(nèi)，注明批號、封閉開始時間和結束時間，放入恒溫房。到達規(guī)定時間后，迅速取出包被板，轉入下一道工序的生產(chǎn)。

第25頁,共96頁，2024年2月25日，星期天反應板制備反應板的抽干質量控制點：抽干機的真空度、溫度要求：真空度：低于100Pa，維持4小時以上溫度：20±2℃

第26頁,共96頁，2024年2月25日，星期天反應板制備鋁箔袋的熱封質量控制點：房間的濕度：＜40%

鋁箔袋的密封性：端面刀封溫度210±5℃

中封刀封溫度210±5℃操作：房間濕度控制：生產(chǎn)操作前提前2小時，打開去濕機進行工作場地去濕，使車間濕度達到40%以下。鋁箔袋的密封性：在線袋袋檢。第27頁,共96頁，2024年2月25日，星期天反應板制備

反應板的抽檢質量標準：陰性參考品符合率：用國家參考品或國家參考品標化的參考品進行檢定，不得出現(xiàn)假陽性。陽性參考品符合率：用國家參考品或國家參考品標化的參考品進行檢定，不得出現(xiàn)假陰性。最低檢出量：用國家參考品或國家參考品標化的參考品進行檢定，HBsAgadr、adw及ay亞型的最低檢出量應符合要求。精密性：用國家參考品或國家參考品標化的參考品進行檢定，CV（%）應不高于15%（n=10）。第28頁,共96頁，2024年2月25日，星期天生產(chǎn)工序生產(chǎn)要點質量控制點陰、陽性對照的配制1陰性血清的滅活滅活的時間，溫度2*陰性對照的配制檢測陰性OD值3陽性血清的滅活滅活的時間，溫度4*陽性對照的配制檢測陽性OD值陰、陽性對照制備的生產(chǎn)和質量控制要點第29頁,共96頁，2024年2月25日，星期天陰、陽性血清的滅活要求：滅活時間：1小時溫度：60℃操作：將血清置水浴箱內(nèi)。隨時注意測量血清溫度，當血清溫度到達60℃時，開始計時至規(guī)定時間止。

第30頁,共96頁，2024年2月25日，星期天陰、陽性對照的配制控制陰性對照的配制質控點：陰性對照OD值要求：OD值≤0.050陽性對照的配制質控點：陽性對照OD值要求：OD值≥1.000

第31頁,共96頁，2024年2月25日，星期天通用試劑制備的生產(chǎn)和質量控制要點生產(chǎn)工序生產(chǎn)關鍵點質量控制點顯色劑、終止液、洗滌液等通用試劑的制備1顯色劑B的配制避光配制、分裝溶液配制的pH、電導的控制配制后12小時內(nèi)進行分裝2顯色劑A的配制72小時內(nèi)進行分裝溶液配制的pH、電導的控制3終止液的配制比重控制4洗滌液的配制pH、電導的控制第32頁,共96頁，2024年2月25日，星期天顯色劑B的配制質量控制點：

1溶液配制的準確性用pH計測定溶液pH值應符合要求用電導率儀測定溶液電導率應符合要求

2配制、分裝環(huán)境：避光

3配制后溶液分裝的即時性：12小時內(nèi)進行分裝第33頁,共96頁，2024年2月25日，星期天顯色劑A的配制質量控制點：

1溶液配制的準確性用pH計測定溶液pH值用電導率儀測定溶液電導率

2配制后溶液存放：72小時內(nèi)進行分裝第34頁,共96頁，2024年2月25日，星期天終止液的配制質量控制點：溶液配制的準確性：用婆美計測定溶液的比重應符合要求

第35頁,共96頁，2024年2月25日，星期天洗滌液的配制質量控制點：溶液配制的準確性用pH計測定溶液pH值用電導率儀測定溶液電導率

第36頁,共96頁，2024年2月25日，星期天酶結合物制備生產(chǎn)和質量控制要點生產(chǎn)工序生產(chǎn)關鍵點質量控制點酶結合物的制備、滴配1酶稀釋液的配制pH的控制2*酶結合物的滴配通過比較陽性參考品、陰性參考品、精密性以及最低檢出率情況，用方陣滴定法進行EIA法測定確定酶結合物的濃度第37頁,共96頁，2024年2月25日，星期天半成品檢定質量標準物理檢查

試劑空白陰性對照陽性對照

陰性參考品符合率陽性參考品符合率最低檢出量精密性穩(wěn)定性實驗

:第38頁,共96頁，2024年2月25日，星期天試劑的分裝、貼簽生產(chǎn)和質量控制要點除菌過濾質量控制點：過濾膜的起泡點實驗要求：濾器滅菌121℃30分鐘；0.22μm濾芯泡點≥3.5bar第39頁,共96頁，2024年2月25日，星期天

分裝質量控制點：液量的準確性、試劑瓶的密封性要求：

分裝液量應大于等于標示量

；分裝好的試劑瓶應無漏液現(xiàn)象。

第40頁,共96頁，2024年2月25日，星期天

貼簽質量控制點：批號打印的準確性要求：批號等打印正確、清晰操作：貼瓶開始后，前30瓶應仔細檢查瓶貼質量，包括瓶貼位置，批號等打印是否正確、清晰，粘貼是否牢固、平整等。合格后，每50瓶抽1瓶進行檢查。

第41頁,共96頁，2024年2月25日，星期天合并包裝生產(chǎn)和質量控制要點生產(chǎn)工序生產(chǎn)要點質量控制點合并包裝1包裝盒的壓印生產(chǎn)日期、批號打印的準確性、清晰度2合并合并組分的齊全性印刷類包裝品的物料平衡第42頁,共96頁，2024年2月25日，星期天成品檢定質量標準物理檢查

試劑空白陰性對照陽性對照陰性參考品符合率陽性參考品符合率最低檢出量精密性穩(wěn)定性實驗

第43頁,共96頁，2024年2月25日，星期天成品入庫入庫控制點：產(chǎn)品放行報告；入庫數(shù)要求：憑由質量管理部經(jīng)理簽署的成品出廠合格報告，成品檢定書辦理入庫手續(xù)，入庫數(shù)應與成品出廠合格報告中所報數(shù)量一致。第44頁,共96頁，2024年2月25日，星期天P2生物安全實驗室管理人員衛(wèi)生進入P2實驗室必須加穿潔凈防護服，帶一次性乳膠手套和一次性口罩。只允許工作人員進入，禁止非工作人員進入實驗室。生物安全柜實驗室的操作嚴格按操作規(guī)程進行操作，對存在感染性或潛在感染性的操作須在生物安全柜內(nèi)進行。做好相應的消毒、使用記錄。消毒及滅菌所有直接或間接接觸病原微生物的儀器、設備、器具，均需進行消毒處理，能高壓的選擇121℃高壓滅菌30分鐘處理，不能高壓的選擇1%次氯酸鈉消毒。實驗中產(chǎn)生的具有感染性或潛在感染性的穿透性利器廢物置入黃色塑料利器盒中，其他非利器廢物置入黃色醫(yī)療廢物塑料袋中。實驗室應指定專人負責感染性或存在潛在感染性材料的保藏，做好標識，建立臺帳。第45頁,共96頁，2024年2月25日，星期天二.金標產(chǎn)品【產(chǎn)品名稱】人類免疫缺陷病毒(HIV1/2)抗體診斷試劑盒(膠體金法)【包裝規(guī)格】

50人份/盒【預期用途】本試劑盒適用于對人血清/血漿或全血中的(HIV1/2)抗體的快速檢測。第46頁,共96頁，2024年2月25日，星期天金標產(chǎn)品檢驗原理

本品采用膠體金免疫層析技術，在玻璃纖維膜上預包被金標記HIVgp160和gp36抗原等，在硝酸纖維膜檢測線和質控線上分別包被HIVgp41、gp36混合抗原和抗體等，當檢測進行時，樣品中HIV抗體可與金標記HIV抗原結合形成復合物，由于層析作用復合物沿試紙條向前移動。若樣品中含有可被檢測的HIV抗體，則與檢測線預包被的HIV抗原結合形成“金標記HIV抗原—HIV抗體—HIV包被抗原”復合物而凝聚顯色；若樣品中沒有HIV抗體或HIV抗體的含量低于檢測限時，則不形成復合物而不顯色。示意圖

陰性加樣區(qū)加樣區(qū)

陽性

無效檢測線質控線第47頁,共96頁，2024年2月25日，星期天主要組成成份

HIV(1/2)抗體膠體金試紙條/板50Tests

樣品稀釋液（磷酸鹽緩沖液）1瓶×4.0ml/瓶說明書 1份第48頁,共96頁，2024年2月25日，星期天金標產(chǎn)品主要生產(chǎn)設備點樣儀切割機核酸蛋白儀電子防潮箱全自動噴點系統(tǒng)劃膜機多功能薄膜封口機干燥箱第49頁,共96頁，2024年2月25日，星期天金標產(chǎn)品生產(chǎn)工藝流程圖氯化金膠體金標記抗原HIVgp36HIVgp160金標記抗原金反應墊燒金標金噴金干燥包被抗原HIVgp36A抗原檢測線包被液抗HIVgp160單抗質控線包被液配制配制反應膜劃膜干燥試紙大板組裝試紙條切割試紙板封裝氯化鈉等配制樣品稀釋液待檢成品合并出廠成品檢定滴配

滴配檢定半成品檢定半成品檢定成品檢定分裝、帖簽物料質控點工序關鍵工序第50頁,共96頁，2024年2月25日，星期天gp160抗原制備的生產(chǎn)和質量控制生產(chǎn)工序質量控制要點細胞培養(yǎng)取工程細胞株，經(jīng)接種復蘇后，進行大規(guī)模細胞連續(xù)培養(yǎng)，收集培養(yǎng)上清液。上清液經(jīng)滅活、過濾、超濾，得濃縮上清液，置-20℃保存。無菌操作，培養(yǎng)溫度，溶氧值，pH值，細胞密度，細胞表達水平。

純化濃縮上清液經(jīng)親和層析柱純化，用適宜的緩沖溶液淋洗、洗脫，收集洗脫峰，經(jīng)濃縮即得純化的gp160抗原。層析柱填料的使用次數(shù)，所用緩沖液的pH值，上樣、淋洗、洗脫速度。第51頁,共96頁，2024年2月25日，星期天gp160抗原質量標準物理性狀：為澄清溶液純度：采用SDS分子量：免疫活性穩(wěn)定性第52頁,共96頁，2024年2月25日，星期天gp36抗原制備的生產(chǎn)和質量控制生產(chǎn)工序質量控制要點發(fā)酵用gp36工程菌發(fā)酵，收集菌體。工程菌誘導溫度，工程菌誘導時間。純化菌體經(jīng)超聲破碎，制得粗制gp36抗原。粗制gp36抗原經(jīng)親和層析柱純化，用適宜的緩沖液進行透析，經(jīng)濃縮即得純化的gp36抗原。超聲破碎時間，層析柱填料的使用次數(shù)，所用緩沖液的pH值控制，上樣、淋洗、洗脫速度。第53頁,共96頁，2024年2月25日，星期天gp36抗原質量標準純度分子量

功能性試驗穩(wěn)定性第54頁,共96頁，2024年2月25日，星期天gp41抗原制備的生產(chǎn)和質量控制生產(chǎn)工序質量控制要點發(fā)酵用工程菌發(fā)酵，收集菌體。工程菌誘導溫度，工程菌誘導時間。純化超聲破碎，制得粗制gp41抗原。粗制gp41抗原經(jīng)親和層析、分子篩等純化，收集目的蛋白峰，即得純化的gp41抗原。超聲破碎時間，層析柱填料的使用次數(shù)，所用緩沖液的pH值，上樣、淋洗、洗脫速度。第55頁,共96頁，2024年2月25日，星期天gp41抗原質量標準純度：采用SDS法檢定應符合要求分子量

功能性試驗穩(wěn)定性第56頁,共96頁，2024年2月25日，星期天

抗HIV單抗制備的生產(chǎn)和質量控制生產(chǎn)工序質量控制要點細胞復蘇及傳代培養(yǎng)單克隆抗體細胞株，經(jīng)接種復蘇后，進行細胞傳代培養(yǎng)。無菌操作，培養(yǎng)基的配制，細胞培養(yǎng)溫度。腹水制備福氏不完全佐劑免疫，7-10天后單克隆抗體細胞懸液注射于F1代小鼠，10天后采集小鼠腹水，離心，制得單抗-HIV腹水。對數(shù)生長期細胞接種。純化用制備的抗HIV單抗腹水，經(jīng)親和層析柱純化等即得抗HIV單抗。層析柱填料的使用次數(shù)，所用緩沖液的pH值，上樣、平衡、洗脫速度。第57頁,共96頁，2024年2月25日，星期天單抗質量標準純度分子量功能性檢測穩(wěn)定性試驗：37℃放置15天，檢測上述標本，可達到上述功能性檢測標準。

第58頁,共96頁，2024年2月25日，星期天金反應墊制備的生產(chǎn)和質量控制要點生產(chǎn)工序生產(chǎn)關鍵點質量控制點金反應墊的制備1膠體金的制備顏色、波長的控制2*金標抗原的制備pH值、顏色、波長的控制3*滴配適當?shù)卣{(diào)整兩種金標抗原的濃度和比例，比較靈敏度和特異性結果，確定最佳的工作濃度。4*噴金包被量的控制5抽干真空度、時間的控制6保存避光、干燥的控制第59頁,共96頁，2024年2月25日，星期天金反應墊的制備膠體金的制備控制點：膠體金顏色、波長的控制要求：膠體金顏色：紅色；波長：528±4nm第60頁,共96頁，2024年2月25日，星期天金反應墊的制備金標抗原的制備質量控制點：GP160和GP36抗原標記時pH值、顏色、波長的控制要求：用PH計測定，pH值：6-7；顏色：紅色波長：533±4nm第61頁,共96頁，2024年2月25日，星期天金反應墊的制備滴配質量控制點：金標抗原的靈敏度和特異性要求：通過HIV快速診斷試劑國家參考品測定方法：適當?shù)卣{(diào)整兩種金標抗原的濃度和比例，比較靈敏度和特異性結果，確定最佳的工作濃度。用HIV快速診斷試劑國家參考品檢驗，應符合要求。第62頁,共96頁，2024年2月25日，星期天金反應墊的制備噴金質量控制點：包被液量的準確性要求：2μl/mm方法：將待包被的玻璃纖維放置于面板，開始包被，每張玻璃纖維應用目測法檢查加液是否完整。連續(xù)5張玻璃纖維檢查合格后，進入正常包被過程。正常包被過程中每100張金反應墊應抽1張作過程檢查。第63頁,共96頁，2024年2月25日，星期天金反應墊的制備金反應墊的抽干質量控制點：真空度、時間的控制要求：真空度：低于100Pa

時間：維持2小時以上第64頁,共96頁，2024年2月25日，星期天

金反應墊的保存質量控制點：金反應墊的存放要求：避光、干燥（濕度＜30%

）操作：用目測法檢測保存金反應墊的鋁箔袋的密封性。存放金反應墊的干燥柜每天監(jiān)測濕度2次。金反應墊的制備第65頁,共96頁，2024年2月25日，星期天金反應膜制備生產(chǎn)和質量控制要點生產(chǎn)工序生產(chǎn)關鍵點質量控制點金反應膜制備1質控線包被液的配制pH值及濃度的控制2檢測線包被液的配制pH值及濃度的控制3*包被抗原滴配適當?shù)卣{(diào)整抗原的濃度和比例，比較靈敏度和特異性結果，確定最佳的工作濃度。4*劃膜包被點樣量的控制、質控線及檢測線間距的控制5抽干真空度、時間控制6保存避光、濕度的控制第66頁,共96頁，2024年2月25日，星期天金反應膜制備質控線包被液的配制控制點：包被緩沖液pH值及包被濃度要求：包被緩沖液pH值：用pH計測定包被濃度：用核酸蛋白儀檢測其蛋白濃度應符合要求第67頁,共96頁，2024年2月25日，星期天金反應膜制備檢測線包被液的配制質量控制點：包被緩沖液pH值及包被濃度要求：包被緩沖液pH值：pH計測定包被濃度：用核酸蛋白儀檢測其蛋白濃度應符合要求第68頁,共96頁，2024年2月25日，星期天金反應膜制備包被抗原滴配控制點：包被抗原滴配的靈敏度和特異性要求：通過HIV快速診斷試劑國家參考品測定方法：適當?shù)卣{(diào)整抗原的濃度和比例，比較靈敏度和特異性結果，確定最佳的工作濃度。用國家參考品檢驗，應符合要求。第69頁,共96頁，2024年2月25日，星期天金反應膜制備劃膜包被控制點：點樣量、質控線及檢測線間距要求：點樣量0.5-1.5μl/mm；兩線間距5-6.5mm操作：將待包被的硝酸纖維素膜放置于軌道，用卡尺檢測質控線和檢測線出樣管的間距，符合要求后開始包被。觀察包被液體出樣情況，連續(xù)5分鐘無異常，則進入正常包被過程。正常包被過程中每卷金反應膜抽1張進行檢查。第70頁,共96頁，2024年2月25日，星期天金反應膜制備金反應膜的抽干質量控制點：真空度、時間的控制要求：真空度：低于100Pa

時間：維持2小時以上第71頁,共96頁，2024年2月25日，星期天金反應膜制備金反應膜的保存控制點：金反應膜存放要求：避光、干燥（濕度＜30%

）操作：用目測法檢測保存金反應膜的鋁箔袋的密封性。存放金反應膜的干燥柜每天監(jiān)測濕度2次。第72頁,共96頁，2024年2月25日，星期天樣品稀釋液制備生產(chǎn)和質量控制要點樣品稀釋液的配制質量控制點：pH值要求：用pH計進行測量第73頁,共96頁，2024年2月25日，星期天試紙大板的組裝及分裝生產(chǎn)和質量控制要點生產(chǎn)工序生產(chǎn)關鍵點質量控制點試紙大板的組裝及分裝1*試紙大板的裝配加樣墊、金反應墊、金反應膜、吸水紙等各組分銜接的控制2*試紙條的切割試紙條切割寬度的控制3CT盒的組裝試紙條完整性的檢驗4裝鋁箔袋鋁箔袋的密封性第74頁,共96頁，2024年2月25日，星期天試紙大板的組裝及分裝試紙大板的裝配質量控制點：加樣墊、金反應墊、金反應膜、吸水紙等各組分應銜接緊密第75頁,共96頁，2024年2月25日，星期天試紙大板的組裝及分裝試紙條的切割質量控制點：試紙條切割寬度要求：300±2mm*8mm

第76頁,共96頁，2024年2月25日，星期天試紙大板的組裝及分裝CT盒的組裝質量控制點：應檢查試紙條的完整性

第77頁,共96頁，2024年2月25日，星期天試紙大板的組裝及分裝控制裝鋁箔袋質量控制點：鋁箔袋應密封第78頁,共96頁，2024年2月25日，星期天樣品稀釋液的配制、分裝及貼簽生產(chǎn)工序生產(chǎn)關鍵點質量控制點樣品稀釋液的制備1配制溶液配制pH的控制2分裝、燈檢液量的準確性，分裝液量應不低于標示量3標簽打印批號打印的準確性及清晰度第79頁,共96頁，2024年2月25日，星期天合并包裝的生產(chǎn)和質量控制要點質量控制點：1.包裝盒的批號打印準確、清晰。2.合并組分的齊全性，物料的損耗是否符合規(guī)定要求。第80頁,共96頁，2024年2月25日，星期天成品檢驗質量標準外觀：試紙條外觀平整，材料附著牢固。每條寬不小于3mm。物理檢查：膜面無破損、劃痕。陰性參考品符合率：應符合要求陽性參考品符合率：應符合要求最低檢出限參考品符合率：應符合要求精密性試驗：應符合要求濾血功能：應符合要求穩(wěn)定性試驗：試劑盒各組分置37℃15天，應符合性能要求。第81頁,共96頁，2024年2月25日，星期天三.PCR核酸診斷試劑產(chǎn)品【產(chǎn)品名稱】

乙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）【包裝規(guī)格】

32人份/盒【預期用途】

本試劑盒采用PCR技術、實時熒光探針技術、用于對臨床血清或血漿標本中的乙型肝炎病毒核酸DNA的定量檢測。第82頁,共96頁，2024年2月25日，星期天PCR診斷試劑的原理

本品系由乙型肝炎病毒特異性引物、熒光探針、以及Taq酶等成分組成，采用PCR體外擴增的方法，用過熒光信號的變化，定量檢測人血清或血漿標本中的HBVDNA。第83頁,共96頁，2024年2月25日，星期天【試劑盒組份】樣品處理液A樣品處理液BHBVPCR反應液AHBVPCR反應液BHBVPCR反應液C工作標準品①工作標準品②工作標準品③工作標準品④陰性對照

第84頁,共96頁，2024年2月25日，星期天生產(chǎn)工藝流程圖Tris、PEG6000、氯化鈉、辛酸鈉、EDTA-Na2樣品處理母液引物、探針、Taq酶、dNTP、UNG酶樣品處理試劑樣品處理液A樣品處理液BPCR工作母液PCR擴增反應試劑PCR反應液APCR反應液BPCR反應液C基因工程菌株工作標準品質粒配制配制配制配制培養(yǎng)、抽提工作標準品①工作標準品②工作標準品③工作標準品④HBVDNA陰性血陰性對照配制配制分裝待檢半成品半成品檢定半成品待檢成品貼簽、合并出廠成品成品檢定物料工序關鍵工序質控點功能性試驗工作參數(shù)標定第85頁,共96頁，2024年2月25日，星期天PCR產(chǎn)品生產(chǎn)和質量控制要點生產(chǎn)工序質量控制點原輔料的檢驗主要原輔料按質量標準要求進行檢驗，合格才能用于生產(chǎn)提取試劑的配制及分裝配制完成的試劑立即分裝，分裝的裝量準確性控制擴增試劑的配制及分裝配制完成的試劑應立分裝，分裝的裝量準確性控制*工作標準品的制備工作標準品的定標半成品檢定應符合相應標準成品檢定應符合相應標準第86頁,共96頁，2024年2月25日，星期天工作標準品的定標

根據(jù)測定的HBV質粒含量，取適量HBV質粒用模擬血清稀釋后，以質控參考品為標準進行標定，使最終稀釋濃度為約107Copies/ml，即為工作標準品①。然后將工作標準品①進行10倍系列梯度稀釋，稀釋后為工作標準品②、工作標準品③、工作標準品④。第87頁,共96頁，2024年2月25日，星期天質量標準陰性對照：陰性對照的檢測結果應為陰性，工作標準品：工作標準品Q1～Q4的測定值符合下表的范圍，并且其線性相關系數(shù)|r|≥0.950。 工作標準品 已知拷貝數(shù)（IU/ml） 拷貝數(shù)允許范圍（IU/ml）

Q1（工作標準品①） K1×107 3.54K1×106～2.83K1×107 Q2（工作標準品②） K2×106 3.54K2×105～2.83K2×106 Q3（工作標準品③） K3×105 3.54K3×104～2.83K3×105 Q4（工作標準品④） K4×104 3.54K4×103～2.83K4×104陰性參考品符合率： 檢測國家標準品，對8份陰性參考品檢測結果不得出現(xiàn)假陽性。陽性參考品符合率： 檢測國家標準品，對9份陽性參考品檢測結果不得出現(xiàn)假陰性。最低檢出限： 檢測國家標準品中，線性和靈敏度參考品L0~L5必須檢出，L6僅供參考。與標準值的線性回歸系數(shù)R≥97.0%。精密性： 測定公司工作標準品10次，定量結果的變異CV≤10%。若以Ct計算，CV值小于15％（n＝10）。第88頁,共96頁，2024年2月25日，星期天四.臨床化學診斷試