手性藥物高效液相色譜拆分

關(guān)于手性藥物高效液相色譜拆分

手性藥物的高效液相色譜拆分方法包括薄層色譜、氣相色譜、液相色譜、超臨界流體色譜和電泳在內(nèi)的幾乎所有色譜和準(zhǔn)色譜手段都已應(yīng)用于對(duì)映體拆分。一般分為間接法與直接法。第2頁(yè),共20頁(yè)，2024年2月25日，星期天直接法手性試劑衍生化法(CDF)間接法手性固定相(CSP)拆分法手性流動(dòng)相(CMP)拆分法第3頁(yè),共20頁(yè)，2024年2月25日，星期天

手性固定相是由擔(dān)體鍵合高光學(xué)純度的手性異構(gòu)體制作而成，檢測(cè)物在手性固定相表面形成非對(duì)映體對(duì)，根據(jù)其穩(wěn)定常數(shù)不同而獲得分離。用于色譜分離的手性固定相已經(jīng)被大量研究，已有100多種液相色譜固定相被商業(yè)化。目前所研究的高效液相色譜手性固定相有7大類(lèi)。其中主要應(yīng)用的有：Pirkle型CSP、環(huán)糊精CSP、多糖類(lèi)CSP、蛋白質(zhì)CSP。

手性固定相(CSP)拆分法

第4頁(yè),共20頁(yè)，2024年2月25日，星期天CSP種類(lèi)作用機(jī)理應(yīng)用Pirkle型CSP通過(guò)含末端羧基或異氰酸酯基手性前體與氨基鍵合硅膠進(jìn)行縮合反應(yīng)，分別形成含酰胺或脲型結(jié)構(gòu)CSP氨基酸、乙內(nèi)酰脲、內(nèi)酰脲、胺類(lèi)、醇類(lèi)及硫醇類(lèi)藥物對(duì)映體拆分環(huán)糊精CSP環(huán)糊精的手性識(shí)別主要來(lái)自環(huán)內(nèi)腔對(duì)芳烴或脂肪烴類(lèi)側(cè)鏈的包容作用，以及環(huán)外殼上的羥基與藥物對(duì)映體分子發(fā)生氫鍵作用β一環(huán)糊精：適用于大多數(shù)藥物α一環(huán)糊精：適用于相對(duì)分子質(zhì)量小于200的藥物γ一環(huán)糊精：適用于較大相對(duì)分子質(zhì)量藥物多糖類(lèi)CSP主要來(lái)自氨基甲酸酯或酯的部位與被拆分物之間形成氫鍵或偶極～偶極作用，或通過(guò)被拆分物分子進(jìn)入纖維索網(wǎng)狀腔，導(dǎo)致腔內(nèi)立體環(huán)境的改變而實(shí)現(xiàn)主要用于分離巴比妥類(lèi)藥物、麻醉藥和抗抑郁藥等蛋白質(zhì)CSP可識(shí)別藥物對(duì)映體在蛋白質(zhì)的結(jié)合位點(diǎn)而達(dá)到手性分離可直接分離許多藥物，如硫噴妥因、心得怡及阻滯劑等第5頁(yè),共20頁(yè)，2024年2月25日，星期天

優(yōu)點(diǎn)：分離時(shí)間短，而手性選擇性和拆分能力高，多數(shù)藥物在分離前都不需要進(jìn)行衍生化反應(yīng)，分離方法直接。

局限性：色譜柱價(jià)格昂貴，部分固定相還存在穩(wěn)定性差，柱容量低，柱強(qiáng)度差等缺點(diǎn)，且根據(jù)不同手性藥物的性質(zhì)不同，選用的分析方法也不同。

CSP法優(yōu)缺點(diǎn)第6頁(yè),共20頁(yè)，2024年2月25日，星期天手性流動(dòng)相(CMP)拆分法

又稱(chēng)手性添加劑法，這種拆分法是在流動(dòng)相中加入手性試劑，利用手性試劑與各對(duì)映體結(jié)合的穩(wěn)定常數(shù)不同，以及藥物與結(jié)合物在固定相上分配系數(shù)的不同來(lái)進(jìn)行分離。優(yōu)點(diǎn)：此法不需昂貴的手性柱，亦無(wú)須進(jìn)行柱前衍生，手性添加劑可視要求而更換，使用比較方便。其中主要應(yīng)用的有：配體交換型手性添加劑、環(huán)糊精添加劑、手性離子對(duì)添加劑。

第7頁(yè),共20頁(yè)，2024年2月25日，星期天手性試劑衍生化法(CDF)

該法是藥物對(duì)映體在分離前與高光學(xué)純度衍生化試劑(CDA)反應(yīng)，形成非對(duì)映體，再進(jìn)行色譜分離測(cè)定。

該法要求手性試劑及反應(yīng)產(chǎn)物在化學(xué)性質(zhì)上和手性上很穩(wěn)定，在反應(yīng)及色譜條件下，試劑、手性藥物和反應(yīng)產(chǎn)物不發(fā)生消旋化反應(yīng)。手性試劑應(yīng)具有紫外或熒光吸收等敏感結(jié)構(gòu)，使生成物具有良好的可檢測(cè)性。第8頁(yè),共20頁(yè)，2024年2月25日，星期天一些手性衍生化試劑和應(yīng)用

第9頁(yè),共20頁(yè)，2024年2月25日，星期天

優(yōu)點(diǎn)：可使用已有的非手性同定相，花費(fèi)少，通過(guò)選用具有強(qiáng)烈紫外吸收或熒光吸收的手性試劑，可提高檢測(cè)敏感度，而且多數(shù)的衍生化試劑具有良好的對(duì)熱及水的穩(wěn)定性。

局限性：是手性試劑需要有高的光學(xué)純度，各對(duì)映體的衍生化速率及平衡常數(shù)應(yīng)一致，要求衍生化反應(yīng)迅速、徹底，否則影響定量結(jié)果。衍生化和色譜分析過(guò)程中應(yīng)不發(fā)生消旋化，外消旋藥物需要有可被衍生化的基團(tuán)，此外衍生化法步驟較煩瑣，衍生化試劑絕大多數(shù)毒性相當(dāng)大，而且該方法難以實(shí)現(xiàn)分析的自動(dòng)化。

CDF法優(yōu)缺點(diǎn)第10頁(yè),共20頁(yè)，2024年2月25日，星期天色譜柱：250×4.6mmi.d，(制備醋酸纖維素酯類(lèi)液相色譜固定相，涂漬在修飾硅膠表面)，采用濕法自行裝柱。色譜條件：以正己烷一異丙醇的混合溶液(體積比為9：1)作流動(dòng)相，流速為0.5mL／min，柱溫30℃

,紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。柱性能評(píng)價(jià)：用流動(dòng)相沖洗該色譜柱，直到基線穩(wěn)定．以1，3，5——叔丁基苯測(cè)定死時(shí)間，以苯測(cè)其理論塔板數(shù)為22969m—1

。

撲爾敏的拆分第11頁(yè),共20頁(yè)，2024年2月25日，星期天藥物撲爾敏溶解在流動(dòng)相溶劑中，配制的濃度為3.2mg／mL。撲爾敏的結(jié)構(gòu)示意圖1所示。第12頁(yè),共20頁(yè)，2024年2月25日，星期天在上述色譜條件下，分別以0.

4和0.5uL的進(jìn)樣量進(jìn)樣分析第13頁(yè),共20頁(yè)，2024年2月25日，星期天結(jié)果表明：

此柱在分離藥物撲爾敏時(shí)，隨著進(jìn)樣量的增大，此柱有些過(guò)載，分離效果不佳。一般來(lái)說(shuō)，在分離物進(jìn)樣過(guò)載的情況下，樣品的分離效果較差，隨著進(jìn)樣量的降低，樣品的分離更充分。這是因?yàn)槭中苑蛛x是一個(gè)吸附和分配的過(guò)程，在進(jìn)樣量過(guò)載的情況下，沒(méi)有足夠的手性基團(tuán)與分離物進(jìn)行作用，因而對(duì)映體的分離就不充分。第14頁(yè),共20頁(yè)，2024年2月25日，星期天雷諾嗪的拆分色譜柱：150mm×4.6mm，用纖維素—三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)濕法裝柱。色譜條件：以純甲醇作流動(dòng)相，流速為1mL／min，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。分離效果：雷諾嗪對(duì)映體獲得比較好的拆分效果，分離度達(dá)到1.579，保留時(shí)間也比較短，7min內(nèi)即可拆分完畢。第15頁(yè),共20頁(yè)，2024年2月25日，星期天隨著流速的下降，分離度逐漸升高。第16頁(yè),共20頁(yè)，2024年2月25日，星期天

通過(guò)控制流速、流動(dòng)相等方法對(duì)雷諾嗪的拆分進(jìn)行了下述研究。通過(guò)雖然上法雷諾嗪得到非常好的拆分，但是拆分時(shí)間過(guò)短，容量因子k太小(k<1)，且無(wú)法根據(jù)需要調(diào)節(jié)。于是考察醇類(lèi)系統(tǒng)對(duì)雷諾