3.(1)DNA重組技術(shù)的基本工程（第2課時(shí)）課件高二下學(xué)期生物人教版選擇性必修3

DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)質(zhì)?；蚬こ淘噭〥NA粗提取3.1.2DNA的粗提取與鑒定

學(xué)習(xí)目標(biāo)1.通過課堂合作探究和模擬構(gòu)建重組DNA的過程，說出合成新的DNA分子的基本原理，闡明重組DNA技術(shù)所需的三種基本工具及其作用（科學(xué)探究、科學(xué)思維）。2.通過資料分析和思考討論認(rèn)同基因工程的誕生和發(fā)展離不開理論研究和技術(shù)創(chuàng)新，關(guān)注基因工程的社會(huì)議題（生命觀念、社會(huì)責(zé)任）。3.進(jìn)行DNA的粗提取與鑒定的實(shí)驗(yàn)，掌握相關(guān)的實(shí)驗(yàn)原理和技能（科學(xué)探究）。學(xué)習(xí)重難點(diǎn)教學(xué)重點(diǎn)：DNA的粗提取與鑒定；教學(xué)難點(diǎn)：DNA的粗提取與鑒定。探究?實(shí)踐DNA、RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面存在差異，可以利用這些差異，選擇適當(dāng)?shù)姆椒▽?duì)它們進(jìn)行提取。

實(shí)驗(yàn)原理：DNA不溶于酒精，但某些蛋白質(zhì)溶于酒精，利用這一原理可初步分離蛋白質(zhì)和DNA；DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，它能溶于2mol/L的NaCl溶液；在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色，可用于DNA的鑒定。2mol/L探究?實(shí)踐

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.了解DNA的物理和化學(xué)性質(zhì)，理解DNA粗提取和鑒定的原理；2.學(xué)會(huì)DNA粗提取的方法以及二苯胺試劑對(duì)DNA進(jìn)行鑒定。

實(shí)驗(yàn)材料：新鮮的洋蔥或者香蕉、菠菜、菜花、豬肝等DNA含量相對(duì)較高的材料探究?實(shí)踐下列哪些材料不能用來進(jìn)行DNA的粗提取與鑒定？為什么？

①豬血

②豬肝③雞血

④洋蔥⑤大腸桿菌豬血不可以，因?yàn)樨i是哺乳動(dòng)物，哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞中沒有細(xì)胞核、細(xì)胞器如線粒體等，因此DNA含量很低，不適合用來提取DNA。要選用新鮮的、DNA含量較高的材料；不能選用哺乳動(dòng)物的血作為材料。探究?實(shí)踐

實(shí)驗(yàn)試劑：研磨液、體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精、2mol/L的NaCl溶液、二苯胺試劑、蒸餾水；

實(shí)驗(yàn)用具：燒杯、量筒、玻璃棒、研缽、紗布、漏斗、試管、試管架、試管夾、酒精燈、石棉網(wǎng)、三腳架、火柴、刀片和天平。探究?實(shí)踐

實(shí)驗(yàn)步驟：1.取30g洋蔥，切碎，然后放入研缽中，倒入10ml研磨液，充分研磨。目的：破壞細(xì)胞和細(xì)胞核，釋放DNA。2.在漏斗中墊上紗布，將洋蔥研磨液過濾到燒杯中，在4℃冰箱放置幾分鐘后，再取上清液。也可以將研磨液直接倒入離心管，1500r/min，離心5分鐘，取上清液放入燒杯中。目的：將細(xì)胞碎片與細(xì)胞質(zhì)及內(nèi)容物分開。探究?實(shí)踐

實(shí)驗(yàn)步驟：3.在上清液中加入體積相等的、預(yù)冷的酒精溶液（體積分?jǐn)?shù)為95%），靜置2~3min，溶液中出現(xiàn)的白色絲狀物就是粗提取的DNA。目的：將DNA與蛋白質(zhì)分開，析出DNA。抑制核酸水解酶活性，抑制DNA降解；抑制分子運(yùn)動(dòng)，使DNA更容易析出；低溫有利于增加DNA分子柔韌性，減少DNA斷裂。為什么用預(yù)冷的酒精？探究?實(shí)踐

實(shí)驗(yàn)步驟：4.用玻璃棒演一個(gè)方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸去上面的水分；或?qū)⑷芤簩?dǎo)入離心管中，10000r/min轉(zhuǎn)速下離心5min，棄上清液，將管底的沉淀物晾干

。目的：將DNA單獨(dú)分離出來。攪拌應(yīng)輕緩，沿著一個(gè)方向進(jìn)行，減少DNA分子的斷裂，以便獲得完整的DNA分子。探究?實(shí)踐

實(shí)驗(yàn)步驟：5.取兩支20ml的試管，各加入2mol/L的NaCl溶液5ml。將絲狀物或沉淀物溶于其中一支試管的NaCl溶液中。然后向兩支試管中加各入4ml二苯胺試劑，混合均勻后，將試管置于沸水中加熱5min。待試管冷卻后，比較兩支試管的顏色變化。目的：溶解DNA并對(duì)DNA進(jìn)行鑒定。二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用。水浴加熱時(shí)試管液面要低于燒杯水的液面。

探究?實(shí)踐

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：加熱前實(shí)驗(yàn)組：粗提取的DNA與二苯胺試劑反應(yīng)后變成藍(lán)色；

加熱后對(duì)照組：溶液顏色基本沒有變化。探究?實(shí)踐1.你提取出白色絲狀物或沉淀物了嗎？用二苯胺鑒定的結(jié)果如何？

有無提取絲狀物或沉淀物分析與評(píng)價(jià)否是DNA粗提取失敗或提取含量低DNA粗提取成功有無/不明顯成功DNA含量低/操作失誤/二苯胺不是新鮮配制二苯胺鑒定顏色變化探究?實(shí)踐2.你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些雜質(zhì)嗎？

分析與評(píng)價(jià)回顧必修一細(xì)胞中的物質(zhì)，可知粗提取的DNA中含有蛋白質(zhì)、其他核酸如RNA、糖類、脂質(zhì)等雜質(zhì)。3.本實(shí)驗(yàn)中利用哪些實(shí)驗(yàn)原則？