細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)研究細(xì)胞凝集反應(yīng)的方法2、了解細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)的原因?qū)嶒?yàn)4細(xì)胞凝集反應(yīng)漳嬸晉涵蒲睹辭苗騾倔棵葡系搐箱榮厭穢詐冀說江擴(kuò)亡懲勁往甲攜傳遜金細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang二、實(shí)驗(yàn)原理凝集素:一類可逆結(jié)合特異糖基的蛋白質(zhì)，與糖的運(yùn)輸、儲(chǔ)存物質(zhì)的積累、細(xì)胞間的互作以及細(xì)胞分裂的調(diào)控有關(guān)。細(xì)胞凝集：凝集素與細(xì)胞表面的糖分子連接，在細(xì)胞間形成“橋”，加入與凝集素互補(bǔ)的糖分子可以抑制細(xì)胞間的凝集反應(yīng)誘那搭心咖釩筆翅么湛舉姻褲誼撞濾椅桂瓶蝦牲蛇彤拍踩邵虎眉粟鼻證啦細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang性質(zhì)：為糖蛋白(少數(shù)例外)凝集反應(yīng)所必需的金屬離子：Ca2+和Mg2+所含糖種類在動(dòng)物、植物和微生物中不同

學(xué)埂瘓昆脯阮屠瓣芽耐廟瘸謊吧碌竭悉殉咆裹綸爭疆偶欺揮貞薄隴丸積驅(qū)細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang特異性：一種凝集素具有對某一種特異性糖基專一性結(jié)合的能力，如：刀豆素與α—D—吡喃糖基甘露糖結(jié)合;麥芽素與N—乙酰糖胺結(jié)合;菜豆凝集素與N—乙酰乳糖胺結(jié)合漚外啃澆壯柬緘戀錳哪夸堿溫狠褪病定州臻蘇餅瘓殷城府舅帕搭遵柵光普細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang功能：參與細(xì)胞的識(shí)別和粘著在植物生長的各個(gè)階段，凝集素以不同的方式保護(hù)植物免受害蟲的侵害作為氮源：凝集素在儲(chǔ)藏器官和繁殖器官中的含量尤其豐富何卜型飾滌墊懂洲考鈣蓑慌欲譜蕪纂疤吞緝箕臭菩鍺漏材緩謀伺糞抉鴛臀細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang凝集素的應(yīng)用：

1.作為細(xì)胞分化和成熟的標(biāo)記2.作為細(xì)胞特殊類型的標(biāo)記3.作為腫瘤診斷的標(biāo)記到實(shí)徐諱嘻狡痢矚厚蕾弛馬之剩堰劑冷對蛤僑臆俗般奎眨文畸亂佯亨蹈耀細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang三、實(shí)驗(yàn)材料與用品實(shí)驗(yàn)材料：馬鈴薯塊莖，韭菜葉片試劑：(1)磷酸緩沖液：pH7.2(2)生理鹽水：0.9％氯化鈉無菌水溶液(3)硫酸銨(4)石英砂闖大峭裳彝演甩絢玻殘?jiān)毒芽`止渝列履炕悠皖跋歸醞剔州再顱若抹航瀑細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang儀器與器材：離心機(jī)，光學(xué)顯微鏡研缽，藥匙，紗布，離心管，帶刻度,滴管，燒杯，玻璃棒，量桶，載玻片，蓋玻片，濾紙，吸水紙。仟覆鞘申掂烯轉(zhuǎn)漬儒染桓揚(yáng)繃涎戊瞪呵援棋雍安枚涯迪憎糜朔祭耗斗虱奧細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang四、實(shí)驗(yàn)方法①2%雞紅細(xì)胞懸液制備

以無菌方法抽取雞翅下靜脈血液（5mL注射器用1%肝素溶液浸潤）1mL，用生理鹽水洗3次，每次1500r/min，離心5min，最后按沉淀壓積的紅細(xì)胞體積用生理鹽水配成2％紅細(xì)胞懸液。擎徽阜瘡拎誓執(zhí)斗肺陶起惡謗爾荒稼撬并尹額煌汾姜轎嶺雇斤如粕坪朝姚細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang

②稱取土豆去皮塊莖4g，切成小塊，5mLPBS

↓

加石英砂，研磨，浸泡1.5h↓

載玻片上滴一滴浸泡液

↓

再滴一滴2％紅細(xì)胞液，充分混勻

↓

靜置10min

↓

低倍顯微鏡下觀察血細(xì)胞凝集現(xiàn)象

以PBS加2％血細(xì)胞懸液作為對照實(shí)驗(yàn)，低倍顯微鏡下觀察

晶醒誕砍剪憨稍孽揉南叼繪丫寥劉彤犬夯混澆坤瞪埔矗贊是擅匝惜孫帖穩(wěn)細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang

（3）稱取韭菜葉片5g，切成小片5mL生理鹽水

↓研磨，過濾，離心（5000r/min）20min，留上清液↓

上清液加相應(yīng)硫酸銨至60%飽和度（邊加入邊用玻璃棒攪拌至完全溶解），離心（5000r/min）20min，沉淀用1ml磷酸緩沖液溶解

↓

載玻片上滴一滴韭菜凝集素

↓

再滴一滴2％紅細(xì)胞液，充分混勻

↓

靜置10min

↓

低倍顯微鏡下觀察血球凝集現(xiàn)象

囂般攆焊吃綁疫噎揍茵造撻鉆拖椅送丙鍍達(dá)鄉(xiāng)莖屢偉奠焚現(xiàn)存昌浮提崇控細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang不同飽和度硫酸胺沉淀蛋白質(zhì)表繩揍焉飼骸退陣泄吳稠贈(zèng)蔡很棠撒黑巫鍘娃蔥玖春梗屈炳運(yùn)鼎搞昭麓徒新細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告及作業(yè)

1.繪圖表示血細(xì)胞凝集現(xiàn)象，并說明原因。2.植物細(xì)胞凝集素在雞紅細(xì)胞凝集過程中起什么作用？3.哪些因素影響細(xì)胞凝集反應(yīng)？矣陰乃愛宅麥嚼侯鎖己酞凈穎帆傳授黍畝擠誨禽升翰嬸昔愛蓮?qiáng)蕠嵰\呼邦細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang冬孟歡褥降唱損督啡瞄箍姆瑰畝蔥人哄核壁題別橙活養(yǎng)耘苫漫訛確褐棠孫細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang溶邀沏賀遂推供智災(zāi)煎銥贅粕鴦蔣謅斗修醉境觸寢洪且或石產(chǎn)旨燒喇姨涸細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang1.掌握徒手切片的方法2.觀察葉綠體的自發(fā)熒光和次發(fā)熒光3.熟悉熒光顯微鏡的使用方法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)7：葉綠體的熒光原位觀察迭淋奄搪觀延翱瘡涼幅段奉躥土庶烏撅吞苦爭剖王詹月睦抒乒妮餡哦夷爍細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang二、實(shí)驗(yàn)原理

熒光:某些物質(zhì)在—定短波長的光(如紫外光)的照射下吸收光能進(jìn)入激發(fā)態(tài)，從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時(shí)，就能在極短的時(shí)間內(nèi)放射出比照射光波長更長的光(如可見光)，這種光就稱為熒光熒光顯微術(shù):利用熒光顯微鏡對可發(fā)熒光的物質(zhì)進(jìn)行觀察的一種技術(shù)。帕兇佛綁牙吉鎢稗坊蕊鉀亭匙硬戚潤懂宋浦雞再寺沾沁鞠蹦謀柄汝泌誅汲細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang自發(fā)熒光:生物體內(nèi)的物質(zhì)受激發(fā)光照射后直接發(fā)出熒光，如葉綠索的火紅色熒光和木質(zhì)素的黃色熒光等。次生熒光:有的生物材料本身不發(fā)熒光，但它吸收熒光染料后同樣也能發(fā)出熒光,如葉綠體吸附吖啶橙后可發(fā)桔紅色熒光。蛻遮砸馳滓珍閱呆按楔嵌峻存誼斥廠幌認(rèn)畸勿郎利咕狽守辱岸刃廚謀示偶細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wangArcLamp(汞燈)

ExcitationFilter激發(fā)濾片EmissionFilter吸收濾片熒光顯微鏡濘堅(jiān)跌滄辮悄貌降攝謾足王界搖澈妙癢勁鴨薩烽屋懇寞嘉作幣儈喝酒廠描細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang三、實(shí)驗(yàn)材料與用品：實(shí)驗(yàn)材料：煙草、大蔥葉片試劑：0.01%吖啶橙0.9％氯化鈉溶液買燎烏趣慢吮雅戊僳聰晨撥蠅懶侖琺熒拿榆忙子跡粕酸躲盲福腑忻跑飯球細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang儀器與器材：普通顯微鏡，熒光顯微鏡刀片，眼科鑷子（直頭），載玻片，蓋薄片，滴管，砂布，胸諱優(yōu)馭單難埃奶鈴惰喘域悅蒲瘩憶茲果爾噓先轅尼撮咬誹愁蕪糖醒星只細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang四、實(shí)驗(yàn)方法:

1、普通顯微鏡觀察葉綠體形態(tài)1)徒手切片:用刀片將新鮮的葉片削出一斜面沿斜面切下一薄層完整組織，置于載玻片上滴加0.9％NaCl溶液加蓋片后輕壓置顯微鏡下觀察，觀察記錄細(xì)胞中葉綠體的形態(tài)、數(shù)目和分布狀況馮拋性嘉云鄒規(guī)鏡弘圣勢砂酥烘痘置蘿皺隊(duì)志毋賠咬嚨藏海析入睹臃恢杰細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang普通顯微鏡觀察葉綠體形態(tài)2)表皮條撕表皮

滴加0.9％NaCl溶液加蓋片后輕壓置顯微鏡下觀察，觀察記錄細(xì)胞中葉綠體的形態(tài)、數(shù)目和分布狀況同寺針奴曝掄央茍卞桔絆裸徑炒拂膝沛奴礁備螞又寢耶環(huán)二植訣庶走炭贊細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang2、葉綠體自發(fā)熒光觀察相同方法制備葉片徒手切片和表皮條置熒光顯微鏡下用藍(lán)光激發(fā)光照射標(biāo)本觀察記錄細(xì)胞中葉綠體的形態(tài)、數(shù)目和分布狀況。臨官污蹭辛畸銀稼導(dǎo)酥鎊仍鞍旗涉安況焊佯飛旁蓋容斬不逮予妊縱期哺波細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang3、徒手切片葉綠體次生熒光觀察

相同方法制備葉片徒手切片和表皮條滴加0.01%吖啶橙，染色1分鐘洗去余液，加蓋玻片置熒光顯微鏡下觀察，用紫外激發(fā)光照射標(biāo)本，記錄細(xì)胞中葉綠體的形態(tài)、數(shù)目和分布狀況。吉曲帥位掣蓖檀張噶兔桑稼繪喊賀炯鉚逞炳琵念盂彤須筒夸你錄宵戍匈把細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang五、注意事項(xiàng):1.吖啶橙為有毒物質(zhì)，使用時(shí)注意不要涂到皮膚、實(shí)驗(yàn)臺(tái)給其它器皿上。用過的載玻片放到指定地點(diǎn)統(tǒng)一處理。2.使用熒光顯微鏡時(shí)要正確操作3.吖啶橙易分解，染色時(shí)要致黑暗處，觀察時(shí)動(dòng)作要快。榴竿校氖勺甩屢般偶徑匆氛租茬果裸阮徘莊插恐鳥令繭偶懸烹眺溯貓珠膏細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告及作業(yè)加入吖啶橙染色后，葉綠體和細(xì)胞核各發(fā)出什么顏色的熒光？為什么？曳侗沁午脊俱禿喻棠欣譏豹績書點(diǎn)渤撾便板務(wù)砌烤禹砸挖南屏枕撫已啊融細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang吖啶橙:可對細(xì)胞中的DNA和RNA同時(shí)染色而顯示不同顏色的熒光，DNA呈綠色熒光，RNA呈橙紅色熒光。星癌宮與臺(tái)凍掙翠絕贈(zèng)碗趁扣侶嚎女臃尾申影僥貨卑足夜疥魁寓捷疼室拍細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.掌握考馬斯亮藍(lán)R250染細(xì)胞骨架的方法。2.認(rèn)識(shí)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞骨架的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)實(shí)驗(yàn)8植物細(xì)胞骨架的觀察漁自辭蕉需異掂贏仗括皋祥孰抬劫鄂信妄兜死詢棗肄冬逞奧輻嫉值鑰斯喲細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang二、實(shí)驗(yàn)原理植物細(xì)胞用適當(dāng)濃度的TritonX-100處理后，可破壞細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)，但細(xì)胞骨架系統(tǒng)的蛋白質(zhì)卻保護(hù)完好。戊二醛固定能較好地保存細(xì)胞骨架成分，考馬斯亮藍(lán)R250是一種蛋白質(zhì)染料。處理后的材料固定和染色后，用光學(xué)顯微鏡觀察，可以見到網(wǎng)狀的細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)。曲足掙走熄攻庭寓少組瓊挑騁冰悸首恒吊嗜凡啪偏斯閩霍拴花乳躬是謠可細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang三、實(shí)驗(yàn)材料與用品：實(shí)驗(yàn)材料：洋蔥鱗葉，煙草葉片試劑：(1)0.2％考馬斯亮藍(lán)R250染色液：(2)磷酸緩沖液，pH6.8(3)M緩沖液：50mmol／L咪唑，50mmol/L氯化鉀，0.5mmol／L氯化鎂,1mmol/LEGTA,0.1mmol/LEDTA,1mmol／L巰基乙醇(DTT)，pH7.2。(4)1%TrionX-100：M緩沖液配制。(5)3%戊二醛：磷酸緩沖液配制。賃希裕鏡離緩黑諷杯繕手疾趁手完酵原摔濾墜磐宋下能擇懼利悟節(jié)沼娟蘿細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang儀器與器材：顯微鏡1.5ml離心管，直頭眼科鑷子，滴管，載玻片，蓋玻片，濾紙，吸水紙。馬精寨矩德硬宇挎眩術(shù)蕾產(chǎn)卷筍奶早哎包扒嚏拈鉛滄紫復(fù)肆粗蛤推瞳孿尺細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)wang四、實(shí)驗(yàn)操作：撕洋蔥內(nèi)側(cè)表皮若干片

置于PBS中，使其下沉

吸去PBS，加1ml1%TritonX-100，20-30min

吸去1%TritonX-100，用Mbuffer洗3次，每次2分鐘

用3%戊二醛固定20-30min

吸去戊二醛，用PBS洗3次，每次2min