流行性淋巴管炎診斷技術(shù)

1流行性淋巴管炎診斷技術(shù)1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了流行性淋巴管炎的臨床檢查、膿汁顯微鏡檢查及變態(tài)反應(yīng)試驗技術(shù)要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于口岸、產(chǎn)地、集散地及飼養(yǎng)單位(或個人)的馬(騾)的流行性淋巴管炎的診斷和檢疫。2.1檢查前準(zhǔn)備術(shù)者及助手均穿全套工作服，術(shù)者戴醫(yī)用膠皮手套。配制消毒藥液(0.1%新潔爾滅或3%來蘇兒)。由助手保定被檢馬(騾)。2.2臨床檢查方法先視診被檢動物體表有無結(jié)節(jié)、膿腫及潰瘍，而后觸摸頸部及胸部兩側(cè)，了解結(jié)節(jié)及膿腫的分布、大小、性質(zhì)以及淺表淋巴管腫脹情況。最后檢查可視粘膜。2.3病變特征流行性淋巴管炎的特征性癥狀是在皮膚、皮下組織及黏膜上發(fā)生結(jié)節(jié)、膿腫和潰瘍。皮下淋巴管發(fā)炎腫大，并有串珠狀結(jié)節(jié)。非重癥病馬(騾),其體溫、食欲及精神無明顯變化。2.3.1皮膚病變最常發(fā)生于四肢、頭部，頸部及胸側(cè)的皮膚及皮下組織。初期結(jié)節(jié)小而扁平呈丘疹狀，以后逐漸增至黃色或黃綠色黏稠的膿汁，瘍底形成平的潰瘍，以后肉芽組織贅生，形成蘑菇狀潰瘍(潰瘍面高于周圍的皮膚)。潰瘍不易愈合，并向周圍擴(kuò)散，或幾個潰瘍?nèi)诤弦黄穑纬梢粋€大潰瘍面。2.3.2黏膜病變?nèi)硇愿腥静±?，可在鼻腔、口唇、眼結(jié)膜及陰道黏膜等處發(fā)生結(jié)節(jié)。結(jié)節(jié)的特征是扁平，呈不整圓瘍。病變發(fā)生于鼻腔時，則流出少量黏膿性鼻液。2.3.3淋巴管炎病變受侵害的淋巴管變粗變硬，如索狀(索腫),并沿腫脹的淋巴管形成數(shù)個結(jié)節(jié)，呈串珠狀排列(串珠狀結(jié)節(jié)),最終破潰形成蘑菇狀潰瘍。局部淋巴結(jié)腫大化膿。2.4判定具有2.3.1、2.3.2和2.3.3任何一項病變者，均應(yīng)懷疑為流行性淋巴管炎病馬(騾),并做膿汁顯微鏡檢查或變態(tài)反應(yīng)試驗。3膿汁顯微鏡檢查3.1材料準(zhǔn)備普通光學(xué)顯微鏡，載玻片，蓋玻片，滅菌2mL～5mL注射器帶16號針頭，滅菌小試管，滅菌棉拭子，滅菌移液管，10%氫氧化鈉溶液或生理鹽水。2用注射器無菌采取膿腫內(nèi)的膿汁，或用棉拭子采取潰瘍面上的膿汁及膿痂，放入小試管，立即送實驗室檢查，或放4℃冰箱保存待檢。3.2操作方法用移液管吸取10%氫氧化鈉液或生理鹽水，滴一小滴(約0.025mL)于載玻片中央、而后用鉤菌環(huán)取少量膿汁放于液滴內(nèi)混勻，加上蓋玻片，即成壓滴標(biāo)本。棉拭子采取的膿汁及膿痂可直接涂于載玻片上。再加10%氫氧化鈉液一小滴，等膿痂變透明后，加上蓋玻片。3.2.2顯微鏡檢查將壓滴標(biāo)本放于載物臺上，把顯微鏡的集光器下調(diào)，使進(jìn)入物鏡的光線弱一些。先以高倍鏡頭(擴(kuò)大400倍～500倍)檢查，后用油浸鏡頭檢查。膿汁中流行性淋巴管炎囊球菌的典型形態(tài)為橢圓形(象西瓜子)或圓形，具有雙層菌膜，一端或兩端尖銳，大小為3μm～4μm×2μm～3μm,內(nèi)部為均質(zhì)半透明狀態(tài)，內(nèi)含2～4個折光性強(qiáng)的小顆粒，呈現(xiàn)回旋運(yùn)動。菌體多單個存在，也有2～3個菌相連者，常?？稍谀摷?xì)胞內(nèi)看到十幾個菌體成堆存在。3.3判定3.3.1全面檢查2個壓滴標(biāo)本，任何一個標(biāo)本發(fā)現(xiàn)典型的流行性淋巴管炎囊球菌，則判為流行性淋巴管炎膿汁檢查陽性。3.3.2二個壓滴標(biāo)本均未發(fā)現(xiàn)流行性淋巴管炎囊球菌，應(yīng)再采樣檢查一次，如仍未發(fā)現(xiàn)囊球菌，則判為流行性淋巴管炎膿汁檢查陰性。4變態(tài)反應(yīng)試驗4.1材料準(zhǔn)備4.1.1器材：滅菌1mL注射器及針頭，游標(biāo)卡尺，剪毛剪，75%酒精棉球或0.1%新潔爾滅棉球。4.1.2變態(tài)反應(yīng)原。4.2操作方法在被檢馬、騾左側(cè)或右側(cè)頸部中三分之一的中央部健康皮膚處剪毛，面積5cm×5cm。被毛盡量剪短。4.2.2測量皮膚皺褶厚度在使用囊球菌素時，須在注射前將剪毛部位的皮膚用手指捏起，以游標(biāo)卡尺測量皮膚皺褶的生理厚度(以mm表示),并記入登記表。登記表樣式見附錄A(資料性附錄)。4.2.3消毒及注射用75%酒精棉球或0.1%新潔爾滅棉球消毒剪毛部位后，使用滅菌注射器皮內(nèi)注射囊球菌素或濃縮囊球菌素，成年馬(騾)0.3mL,兩歲以內(nèi)馬(騾)0.2mL。注射后3天內(nèi)，避免重度使役，防止磨擦注射部位。4.2.4檢查在注射后第24h、48h、72h各檢查一次。注射囊球菌素者，用游標(biāo)尺測量注射部位皮膚的皺褶厚度(以mm表示)。注射濃縮囊球菌素者，用游標(biāo)卡尺測量注射部位皮膚腫脹的面積(以cm×cm)表示，并將結(jié)果記入登記表。以第24h、48h和72h三次檢查中的最強(qiáng)反應(yīng)為準(zhǔn)。皮膚增厚度為最強(qiáng)反應(yīng)的皮膚皺褶厚度減去皮膚皺褶生理厚度所得的差。腫脹面積指注射部位發(fā)生的界限明顯的疼痛性彌漫性腫脹范圍，其判定標(biāo)準(zhǔn)見表1。表1變態(tài)反應(yīng)判定標(biāo)準(zhǔn)表濃縮囊球菌素腫脹面積/cm2陰性陽性注1:疑似反應(yīng)馬(驟),間隔一周在對側(cè)頸部再注射一次，操作方法同4.2。兩次疑似反應(yīng)判流注2:注射囊球菌素或濃縮囊球菌素后24h～48h,小部分馬(騾)出現(xiàn)輕度體溫升高，絕大多注3:流行性淋巴管炎治愈馬(騾),不宜做變態(tài)反應(yīng)試5鑒別診斷5.1鼻疽皮膚鼻疽的結(jié)節(jié)、潰瘍和淋巴管索腫等癥狀易與流行性淋巴管炎相混淆。但皮膚的潰瘍底凹陷，濕潤而呈豬油樣。潰瘍邊緣呈撕裂或火山口狀，沒有明顯的愈合傾向。膿汁內(nèi)含有革蘭氏陰性、著色不均勻的鼻疽假單胞菌。應(yīng)用鼻疽菌素點(diǎn)眼呈陽性反應(yīng)。5.2潰瘍性淋巴管炎病變主要發(fā)生于后肢下部，潰瘍不呈蘑菇狀，容易愈合，附近的淋巴結(jié)幾乎不受侵害，病程呈良性經(jīng)過，膿汁內(nèi)含有革蘭氏陽性小桿菌(假結(jié)核棒狀桿菌)。將病料制成(1:5)～(1:10)的懸液，腹腔注射1mL于雄性豚鼠，引起類似鼻疽的典型睪丸炎，各實質(zhì)臟器產(chǎn)生干酷性壞死結(jié)節(jié)。6綜合判定6.1具有2.3.1、2.3.2、2.3.3任何一項病變，同時膿汁顯微鏡檢查呈陽性者，判為流行性淋巴管炎病馬(騾)。6.2具有2.3.1、2.3.2、2.3.3任何一項病變，同時變態(tài)反應(yīng)試驗呈陽性者，判為流行性淋巴管炎病馬6.3無可