魚華支睪吸蟲囊蚴鑒定方法

魚華支睪吸蟲囊蚴鑒定方法6.2.6結(jié)果判定當(dāng)陽(yáng)性對(duì)照在315bp位置出現(xiàn)一條單一的核酸條帶，陰性對(duì)照沒(méi)有該核酸帶，實(shí)驗(yàn)結(jié)果成立；待測(cè)樣品在315bp位置出現(xiàn)核酸條帶者為陽(yáng)性；無(wú)帶或帶的大小不是315bp的樣品為陰性。6.3綜合判定魚體組織用壓片和蛋白酶消化法檢查檢出囊蚴，再用PCR方法鑒定為陽(yáng)性，可確認(rèn)為華支睪吸蟲囊蚴：PCR結(jié)果為陰性的囊蚴可判定為非華支睪吸蟲囊蚴。陽(yáng)性樣品可進(jìn)行測(cè)序進(jìn)一步確證，序列見(jiàn)EDTA先加適量蒸餾水，完全溶解后用蒸餾水定容至1000mL。用5mol/L.的鹽酸調(diào)到pH8.0。A.B核酸染色劑(EB)用滅菌燕餾水配制成10mg/mL的濃縮液。用時(shí)每100ml.瓊脂中加5pL。A.9上樣緩沖液每100ml.溶液中含：溴酚藍(lán)0.25g,蔗糖40g。A.10PCR產(chǎn)物參考序列g(shù)gnangttaagcaccgaccggtgcaaancagatttgcategaatgcattgccaatactgaagectegaccaacaaeggagegegeacattcacaacaataacaacaattgagecacgactecgeegecaccccctecatggttgegtceggeacattggggaanagccatagateeggcaceccacacacatacacacaattgtgtgggganateacaagacccaagecacgactttttgggegtcgtgatagtttat(資料性附錄)華支睪吸蟲病及其囊蚴形態(tài)B.1華支睪吸蟲病概述華支睪吸蟲病(Clomorchiasissinensis)又稱肝吸蟲病，是由華支睪吸蟲寄生引起肝膽病變?yōu)橹鞯囊环N食源性人獸共患青生蟲病。華支睪吸蟲病流行于中國(guó)、朝鮮、印度、越南、非律賓等國(guó)家。在我國(guó)，廣東、廣西、香港、臺(tái)灣以及東北三省較為嚴(yán)重，長(zhǎng)江流域、黃淮流域及部分丘陵流行區(qū)呈輕、中度流行。成蟲主要寄生在人、犬、貓、豬等哺乳動(dòng)物的肝膽管內(nèi)，成蟲排出的蟲卵經(jīng)膽汁入小腸后隨糞便排出體外。蟲卵入水后被第一中間宿主淡水螺吞食，在螺體內(nèi)發(fā)育為尾蚴逸出，尾蚴遇到第二中間宿主淡水魚，鉆入魚體內(nèi)發(fā)育成囊蚴。人們因生食或半生食含有活囊蚴的魚、蝦而感染。囊蚴進(jìn)入十二指腸后，移行至膽管發(fā)育為成蟲。人們生食或半生食魚蝦是主要的感染方式，如吃生魚片和魚生粥，可將活囊蚴食入而感染。另外，用同一塊砧板處理生、熟食物，或飲用生水，也有可能感染。動(dòng)物的糞便入水而污染魚塘，可引起肝吸蟲病的傳播。在燒、烤、燙或蒸魚時(shí)，可因溫度不夠或時(shí)間不足而不能殺死全部囊蚴。B.2魚華支睪吸蟲囊蚴的主要宿主和形態(tài)結(jié)構(gòu)淡水魚類和蝦類是華支睪吸蟲的第二中間宿主。該蟲對(duì)魚類的選擇性不強(qiáng)，國(guó)內(nèi)已證實(shí)的演水魚宿主有12科39屬68種。但從流行病學(xué)角度看，養(yǎng)殖的淡水鯉科魚類，如草魚、青魚、鰱魚、鳙魚、鯪魚、鯉魚、編魚和卿魚等特別重要，麥穗魚等野生小型魚類感染率很高。囊蚴可分布在魚體的肌肉、皮、頭、鰓、鰭及鱗等各部分，一般以肌肉最多，尤其在魚體中部的背部和尾部肌肉較多。因魚的種屬不同，囊蚴的分