PCV2類ISRE和Cap蛋白N-糖基化位點的生物學(xué)功能研究的開題報告

PCV2類ISRE和Cap蛋白N-糖基化位點的生物學(xué)功能研究的開題報告一、研究背景豬圓環(huán)病毒2型（PorcineCircovirusType2,PCV2）是一種小型、非包膜、單股DNA病毒，感染老年豬和生長期豬能引起多種臨床病癥，如早產(chǎn)、腹瀉、肺炎、豬肉品質(zhì)下降等。PCV2被廣泛認(rèn)為是豬圓環(huán)病毒?。≒orcineCircovirusDisease,PCVD）的病原體。PCV2基因組大小只有1.76kb左右，因此其蛋白質(zhì)功能多數(shù)沒有被徹底解析。目前已知的蛋白質(zhì)有Cap（Cap又稱ORF2）蛋白和Rep（Rep又稱ORF1）蛋白兩種。Cap蛋白是PCV2包膜蛋白，也是主要免疫原性蛋白，其在病毒定位和病毒感染過程中起到至關(guān)重要的作用。Cap蛋白的N-糖基化是一種重要的后翻譯修飾，在其他病毒中也被廣泛研究，與病毒在宿主體內(nèi)的感染力和免疫逃逸方面有關(guān)。ISRE（InterferonStimulatedResponseElement）是一種干擾素刺激反應(yīng)元件，是宿主免疫應(yīng)答中的一個關(guān)鍵元件。本研究著重探究PCV2中Cap蛋白的N-糖基化位點和ISRE的生物學(xué)功能，對于進(jìn)一步了解PCV2的蛋白質(zhì)生物學(xué)功能以及研究PCV2與宿主免疫逃逸等方面具有積極意義。二、研究目的1.確認(rèn)PCV2中Cap蛋白的N-糖基化位點，在序列中進(jìn)行標(biāo)注和對比分析2.通過動物實驗驗證Cap蛋白N-糖基化位點的作用，探究其與PCV2感染力、病原性和免疫逃逸等方面的聯(lián)系3.研究PCV2類ISRE的生物學(xué)功能，探究其在PCV2感染和宿主免疫逃逸等方面的作用三、研究內(nèi)容1.N-糖基化位點的預(yù)測和實驗驗證根據(jù)Cap蛋白的氨基酸序列和已有的N-糖基化位點信息，利用生物信息學(xué)方法預(yù)測Cap蛋白的N-糖基化位點，并通過質(zhì)譜等實驗手段進(jìn)行驗證。2.N-糖基化位點的功能研究構(gòu)建突變體Cap蛋白，將預(yù)測到的N-糖基化位點突變，通過細(xì)胞培養(yǎng)和動物實驗驗證其在PCV2感染力、病原性和免疫逃逸等方面的作用。3.ISRE的生物學(xué)功能研究通過構(gòu)建ISRE響應(yīng)元素的報告基因體系，研究PCV2類ISRE的生物學(xué)功能，并探究其在PCV2感染和宿主免疫逃逸等方面的作用。四、研究方法1.生物信息學(xué)方法通過生物信息學(xué)方法進(jìn)行N-糖基化位點的預(yù)測，并利用已有的序列信息進(jìn)行比對和驗證。2.質(zhì)譜等實驗手段通過質(zhì)譜等實驗手段進(jìn)行N-糖基化位點的驗證。3.細(xì)胞培養(yǎng)實驗通過細(xì)胞培養(yǎng)實驗，研究Cap蛋白N-糖基化位點的作用，并探究其對PCV2感染力和病原性的影響。4.動物實驗通過動物實驗，驗證Cap蛋白N-糖基化位點在PCV2感染和免疫逃逸等方面的生物學(xué)作用。五、研究預(yù)期成果1.確認(rèn)PCV2中Cap蛋白的N-糖基化位點，描述其在病毒感染過程中的作用2.探究PCV2類ISRE的生物學(xué)功能，描述其在宿主免疫應(yīng)答中的作用3