食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中唾液酸的測(cè)定

1食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中唾液酸的測(cè)定第一法液相色譜-紫外檢測(cè)法適用于燕窩及其制品中結(jié)合態(tài)唾液酸的測(cè)定。第二法液相色譜-熒光檢測(cè)法和第三法液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法適用于液態(tài)乳、乳粉、糕點(diǎn)、飲料中唾液酸總量的測(cè)樣品在鹽酸溶液中加熱水解，釋放出唾液酸，樣品試液用強(qiáng)陰離子交換色譜柱分離，紫外3.1.1乙腈(CH3CN)：色譜）：3.2.1鹽酸溶液（0.05mol/L吸取4.17mL濃鹽酸，溶于水并稀釋至1003.2.20.1%磷酸溶液：吸取1mL磷酸，溶于水并稀釋至1000mL。3.2.30.1%磷酸溶液-乙腈（4+6）：將0.1%磷酸溶液和乙腈按4比3.3.1唾液酸（N-乙酰神經(jīng)氨酸，C11H19N）：mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，于4℃下避光保存，保存期6個(gè)5.0mL、10.0mL和20.0mL于100mL容量瓶中，加流動(dòng)相（3.2.3）定容至刻度，混勻。唾液酸標(biāo)準(zhǔn)系2列工作液的濃度分別為1.0mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、50.0mg/L、100.0mg/4儀器和設(shè)備4.1液相色譜儀：配有紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器。4.2恒溫水浴鍋。4.3渦旋混合器。4.6烘箱。4.7高速離心機(jī)。4.9研缽。轉(zhuǎn)移至容量瓶中，用流動(dòng)相（3.2.3）定容至刻度，混勻。移取2mL于離心管中游離態(tài)唾液酸含量測(cè)定：稱取0.1g（精確并轉(zhuǎn)移至容量瓶中，用水定容至刻度，混勻。移取2m3并轉(zhuǎn)移至容量瓶中，用流動(dòng)相（3.2.3）定容至刻度，混勻。移取2mL于離心管中，15.2.3檢測(cè)波長(zhǎng)：205nm。將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液分別注入液相色譜儀中，測(cè)定相應(yīng)的峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)系列工作液中唾液酸將試樣溶液注入液相色譜儀中，得到峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)液中唾液酸的濃度。標(biāo)作液和待測(cè)樣液中唾液酸的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器線性響應(yīng)范圍內(nèi)。如果含量超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性X=……（1）X——試樣中唾液酸的含量，單位為克每千克（g/ρ——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的試樣溶液中唾液酸的濃度，單位為毫克每升（mg/L對(duì)于固體燕窩樣品，需要分別測(cè)定唾液酸總量和游離態(tài)唾液酸含量。固體燕窩中結(jié)合態(tài)唾在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的4為10g時(shí)，檢出限為0.003g/kg，定量限為0樣品在鹽酸溶液中加熱水解，釋放出唾液酸，提取液經(jīng)固相萃取柱凈化后，與鄰苯二胺反熒光衍生物，樣品試液用反相色譜柱分離，熒光檢測(cè)10.1.4乙酸鋅[Zn(CH3COO)210.1.5亞鐵氰化鉀[K4Fe(CN)6·3H2O固相萃取柱吸附劑是由親脂性二乙烯苯和親水性N-乙烯基吡咯烷酮兩種單體按照一定比例聚合成的10.2.1鹽酸溶液（0.05mol/L吸取4.17mL濃鹽酸，溶于）：10.2.3鄰苯二胺鹽酸鹽溶液（50mg/mL稱取2.5g鄰10.2.5亞鐵氰化鉀（92g/L稱取10.6g亞鐵氰化鉀10.2.60.2%磷酸溶液：吸取2mL磷酸10.3.1唾液酸（N-乙酰神經(jīng)氨酸，C11H19NO9，CAS號(hào)131-48-6）：純度≥96%，或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證授予mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，于4℃下避光保存，保存期6個(gè)54.0mL、10.0mL和20.0mL于100mL容量作液的濃度分別為2.0mg/L、10液態(tài)樣品搖勻；基質(zhì)均勻的半固態(tài)樣品和粉狀樣品直接用于下一步試樣提??；其他樣粉碎均勻。制備好的試樣儲(chǔ)存于樣品瓶中，密振蕩一次。取出離心管，冷卻至室溫。9000r/min離心5min，將上層水解液轉(zhuǎn)移至25mL吸取上清液，使該樣液以小于1mL/min的流速通過(guò)固相萃取柱，棄去約1-2mL流出液，再收集流12.2.3熒光檢測(cè)器激發(fā)波長(zhǎng)：2356A（%）B（%）5555將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液分別注入液相色譜儀中，測(cè)定相應(yīng)的峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)系列工作液中唾液酸將衍生后的試樣溶液注入液相色譜儀中，得到峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)液中唾液酸衍的濃度。標(biāo)準(zhǔn)工作液和待測(cè)樣液中唾液酸衍生物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器線性響應(yīng)范圍內(nèi)。如果X=……（2）X——試樣中唾液酸的含量，單位為克每千克（g/ρ——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的試樣溶液中唾液酸的濃度，單位為毫克每升（mg/Lf——稀釋倍數(shù)；在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的7樣品在鹽酸溶液中加熱水解，釋放出唾液酸，提取液經(jīng)固相萃取柱凈化后，樣品試液用反相17.1.3乙酸鋅[Zn(CH3COO)2·2H217.1.4亞鐵氰化鉀[K4Fe(CN)6·3H2O固相萃取柱吸附劑是由親脂性二乙烯苯和親水性N-乙烯基吡咯烷酮兩種單體按照一定比例聚合成的17.2.1鹽酸溶液（0.05mol/L吸取4.17mL濃鹽酸，溶于水）：17.2.4亞鐵氰化鉀（92g/L稱取10.6g亞鐵氰化鉀17.2.50.1%甲酸溶液：吸取1mL甲酸，溶于水并稀釋至1000mL。17.3.1唾液酸（N-乙酰神經(jīng)氨酸，C11H19NO9，CAS號(hào)131-48-6）：純度≥96%，或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證授予加水定容至刻度，混勻，于4℃下避光保存，保存8液態(tài)樣品搖勻；基質(zhì)均勻的半固態(tài)樣品和粉狀樣品直接用于下一步試樣提??；其他樣），振蕩一次。取出離心管，冷卻至室溫。9000r/min離心5min，將上層水解液轉(zhuǎn)移至25mL吸取上清液，使該樣液以小于1mL/min的流速通過(guò)固相萃取柱，棄去約1-2mL流出液，再收集流出液。取50μL流出液，加入乙腈-水溶液950μL19.2.1.1色譜柱：C18柱，3.19.2.1.5流動(dòng)相：A相：0.1%甲酸A（%）19.2.2.1離子源：電噴霧（E9將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液分別注入液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀中，測(cè)定相應(yīng)的峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)系列工作液中唾液酸的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積的響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。唾液酸標(biāo)準(zhǔn)溶液按照液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜條件測(cè)定試樣溶液和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，如果被測(cè)化合物保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間相差不超過(guò)±2.5％，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的離子均出現(xiàn)且信噪比≥3，而且定性離子對(duì)的相對(duì)豐度(是用相對(duì)于最強(qiáng)離子豐度的強(qiáng)度百分比表示)與濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)工作溶液的相對(duì)豐度允許偏差不超過(guò)表4規(guī)定的范>20%～50%±20%±25%±30%±50%將試樣溶液注入液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀中，得到峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)液中唾液酸的濃度。標(biāo)準(zhǔn)工作液和待測(cè)樣液中唾液酸的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器線性響應(yīng)范圍內(nèi)。如果含量超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)X=……（3）X——試樣中唾液酸的含量，單位為克每千克（g/ρ——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的試樣溶液中唾液酸的濃度，單位為毫克每升（mg/Lf——稀釋倍數(shù)；在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的稱樣量為1g時(shí)，唾液酸的檢出限為0.02g/kg，定量限為0.05 Ratio-41.2(100.0%)308.0->87.0,308.0 Ratio-41.2(100.0%)308.0->87.0,308.0->170.0x10254321.522.5