PCR培訓(xùn)班考試題

PAGE10一.填空（每空0.5分，共15分）1.為加強醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增實驗室規(guī)范化管理，衛(wèi)生部于2010年發(fā)布《醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增實驗室管理辦法》，北京市衛(wèi)生局為做好實驗室備案工作，于2012年發(fā)布了《北京市醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室技術(shù)審核暫行規(guī)定》。（2019）2.北京市衛(wèi)生局及各區(qū)縣衛(wèi)生局負(fù)責(zé)所轄行政區(qū)域內(nèi)地方醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室的備案和監(jiān)督管理工作。其中備案的技術(shù)審核工作流程主要包括：申報、資料審核、現(xiàn)場驗收、整改、通知實驗室資料審核結(jié)果。醫(yī)療機構(gòu)的醫(yī)學(xué)檢驗科應(yīng)當(dāng)設(shè)有臨床細(xì)胞分子遺傳學(xué)專業(yè)診療科目。備案的臨床基因擴增檢驗實驗室參加醫(yī)療機構(gòu)的年度校驗。（2019）3.臨床基因擴增檢測的分析中質(zhì)量保證關(guān)鍵內(nèi)容包括：室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評。其中前者監(jiān)測和控制的是實驗室測定的重復(fù)性，而后者則通過對不同的實驗室測定結(jié)果的比對而評價實驗室測定的準(zhǔn)確度。（2019）4.DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的特點是：螺旋中的兩條鏈為反向平行，其中一條鏈的方向為5’-3’，另一條鏈的方向為3’-5’。（2019）5.核酸包括兩種類型：脫氧核糖核酸和核糖核酸，二者的主要區(qū)別為：前者由ATCG四種堿基組成，而后者由AUCG四種堿基組成。（2019）6.根據(jù)遺傳中心法則，遺傳信息的流動方向為DNARNA蛋白質(zhì)。（2019）7.普通臨床基因擴增檢驗實驗室一般包括下面四個分區(qū)：試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)。（2019）8.提純的核酸樣品可根據(jù)OD260波長的光吸收值算出其含量，通過計算260/280的比值計算出其純度。（2019）9.臨床基因擴增實驗室檢測用的試劑應(yīng)當(dāng)經(jīng)國家藥監(jiān)局批準(zhǔn)。（2019）10.cfDNA的和中文名稱是細(xì)胞游離DNA，ctDNA的中文名稱是循環(huán)腫瘤DNA。（2019）11.在PCR前，為保護操作者和樣本，手工處理樣本應(yīng)該在樣本制備區(qū)的生物安全柜中進(jìn)行，并使用帶濾芯的移液吸頭進(jìn)行樣本操作。（2020）12.醫(yī)療廢物垃圾袋結(jié)扎采用“鵝口頸”套扎結(jié)扎形式。（2020）13.銳器盒容積達(dá)到總體積的3/4時需要更換。（2020）14.核酸檢測中，全血樣本采集一般使用EDTA或枸櫞酸鹽抗凝，不使用肝素抗凝。（2020）15.熒光定量PCR使用的Taqman探針兩端標(biāo)記有報告熒光R5’基團和熒光粹滅Q3’基團。（2020）16.新冠病毒核酸檢測應(yīng)該在生物安全Ⅱ級實驗室開展，同時采用生物安全Ⅲ級實驗室的個人防護。（2020）17.PCR的基本反應(yīng)過程包括變性、退火、延伸。（2020）18.DNA/RNA的紫外吸收在260nm附近有最大吸收值。（2020）19.核酸的基本結(jié)構(gòu)單位是：核苷酸，其組成包括堿基、核糖或脫氧核糖和磷酸。（2020）二．是非題（在你認(rèn)為正確的句子后面打√，錯誤的后面打×，每題1分，共15分）DNA雙鏈中，堿基A-T之間以三個氫鍵相連，G-C以兩個氫鍵相連。（×）（2019）與細(xì)胞學(xué)初篩相比較，HPV核酸檢測初篩具有更高的敏感性。（√）（2019）使用有防“污染”作用的尿苷糖基酶（UNG）的PCR試劑盒，該酶可以降解含有UTP的擴增產(chǎn)物。（√）（2019）DNA變性是指在物理或化學(xué)因素的作用下，導(dǎo)致兩條DNA鏈之間的氫鍵斷裂，而核酸分子中的所有共價鍵同時也受影響。（×）（2019）自制室內(nèi)質(zhì)控品時，應(yīng)對質(zhì)控品的均勻性和穩(wěn)定性進(jìn)行評價。（√）（2019）定量PCR與定性PCR測定原理的最主要的區(qū)別點在于前者的測定點在PCR的指數(shù)擴增期，而后者多為擴增平臺期。（×）（2019）處理PCR標(biāo)本時，在沒有生物安全柜的情況下，可用超凈臺操作。（×）（2019）臨床檢驗中的系統(tǒng)誤差通常表現(xiàn)為質(zhì)控物測定結(jié)果的SD增大。（×）（2019）擴增管沒有蓋好會造成PCR反應(yīng)液熱蒸發(fā)，直接影響結(jié)果，但不會成為一個污染源。（×）（2019）核酸是極性化合物，溶于水，不溶于乙醇等有機溶劑。（√）（2019）核酸的解鏈溫度（Tm）與G+C含量有關(guān)，G+C含量愈大，Tm愈低。（×）（2019）無法參加室間質(zhì)量評價計劃時，可以用室內(nèi)質(zhì)控替代。（×）（2019）一般進(jìn)行HCV-RNA檢測時宜采用EDTA抗凝血，不宜采用肝素抗凝。（√）（2019）以次氯酸為主要成分的清潔劑在配制后可以長期使用。（×）（2019）質(zhì)量管理體系的要素包括質(zhì)量方針、質(zhì)量目標(biāo)和質(zhì)量指標(biāo)。（√）（2019）核酸的復(fù)制是由3’-5’方向進(jìn)行。53（×）（2020）核酸的解鏈溫度（Tm）與G+C含量有關(guān)，G+C含量愈大，Tm愈高。（√）（2020）標(biāo)本差錯率和實驗室布局的合理性均為實驗室質(zhì)量體系監(jiān)控指標(biāo)。（√）（2020）實驗室質(zhì)量體系文件無統(tǒng)一格式，無標(biāo)準(zhǔn)文件，應(yīng)切合實際，怎么做怎么寫。（×）（2020）有標(biāo)準(zhǔn)文件進(jìn)行新冠病毒核酸檢測時，采集鼻咽拭子標(biāo)本可使用棉簽。（×）（2020）植絨拭子在常規(guī)應(yīng)用前，可由制造商對實驗室未加修改而使用的已確認(rèn)的檢驗程序進(jìn)行獨立驗證。（×）（2020）DNA在中性或弱堿性溶液中易水解，但在酸性溶液中較穩(wěn)定，RNA在堿性溶液中穩(wěn)定。（×）（2020）答案：在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或弱堿性溶液中較穩(wěn)定，DNA在堿中變性，但不水解，RNA水解。DNA變性的本質(zhì)是雙鏈間氫鍵的斷裂。（√）（2020）DNA微溶于水，可溶于有機溶劑。（×）（2020）溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有機溶劑三．單選題（請將所選答案填寫在題后的括號中，每題1分，共25分）1.PCR技術(shù)的發(fā)明人是：（C）（2019）A.WatsonJ.D.;B.CrickF.H.C.;C.KaryMullis;D.RosalindFranklin.2.二級生物安全柜能對以下哪些進(jìn)行防護：（D）（2019）A.人員B.實驗品C.環(huán)境D.以上都是3.在生物界尚無充足證據(jù)的信息流動過程的是（A）（2019）A．蛋白質(zhì)→RNAB．RNA→DNAC．DNA→DNAD．DNA→RNA4.核酸提取純化中，RNase潛在污染源是：（D）（2019）A.實驗室環(huán)境；B.實驗用品如吸頭、離心管等；C.實驗人員的手；D.以上都是5.生物安全水平的級別共分為幾個等級（D）（2019）A．1個B．2個C．3個D．4個6.有關(guān)于熒光定量PCR方法，下述哪一條是錯誤的？（A）（2019）A.在擴增的指數(shù)期定量；B.采用內(nèi)標(biāo)和外標(biāo)方法均可；C.可采用Taqman探針；D.在擴增的終點測定定量7.在選擇開展臨床檢驗項目時，應(yīng)首先考慮：（B）（2019）A.臨床有效性和分析有效性；B.檢測精密度和檢測準(zhǔn)確度；C.臨床有效性和檢測精密度；D.分析有效性和檢測準(zhǔn)確度8以下哪項有利于DNA的保存：（A）（2019）A.加入EDTA螯合鈣離子，去除核酸酶的活性；B.加入少量DNase；C.溶于pH3.0溶液；D.加入少量RNase9.實驗室的清潔工作應(yīng)在以下情況下進(jìn)行：（A）（2019）A.每次實驗后B.文件規(guī)定清潔時間C.實驗室發(fā)生污染時D.以上都是10.熒光定量PCR檢測過程中，基線漂移的可能原因有：（D）（2019）A.蒸發(fā)；B.探針?biāo)釩.相鄰熒光通道干擾D.以上都是11.將基因擴增檢驗實驗室的產(chǎn)物分析區(qū)設(shè)置為負(fù)壓狀態(tài)，目的是：（B）（2019）A.防止有生物傳染危險的樣本逸出；B.防止擴增產(chǎn)物從該區(qū)逸出；C.防止該區(qū)灰塵的逸出；D.為了生物安全的目的12.常用RNase抑制劑是（B）（2019）A.乙醇；B.DEPC；C.異丙醇;D.精胺13.真核生物染色體DNA主要以下列哪種形式存在（D）（2019）A.環(huán)狀單鏈分子B.線性單鏈分子C.環(huán)狀雙鏈分子D.線性雙鏈分子14.TaqMan探針采用的是（A）（2019）A．熒光標(biāo)記的探針B．生物素標(biāo)記的探針C．同位素標(biāo)記的探針D．SYBRGreen熒光染料15.最大量程為200ul的微量移液器，顯示讀數(shù)為020，實際的吸液容量值為：(C）（2019）A．0.2ulB．2ulC．20ulD．200ul16.有關(guān)核小體的錯誤敘述是：（D）（2019）A．核小體是染色體的基本單位B．DNA和組蛋白共同構(gòu)成核小體C．DNA和組蛋白H1構(gòu)成核小體連接區(qū)D．RNA和組蛋白共同構(gòu)成核小體17.基因突變的實質(zhì)是：（A）（2019）A．染色體上的DNA序列變化了B．染色體上的DNA變成了RNAC．染色體上的DNA變成了蛋白質(zhì)D．染色體上的DNA高級結(jié)構(gòu)發(fā)生了局部改變18.如果一個PCR反應(yīng)體系中加入模板200個，經(jīng)過30個循環(huán)后擴增產(chǎn)物的數(shù)量將達(dá)到（C）（2019）A.200×30×2B.200×30C.200×230D.200×30219.Sanger測序體系與PCR反應(yīng)體系的主要區(qū)別是前者含有：（B）（2019）A.模板B.ddNTPC.DNA聚合酶D.引物Sanger測序體系與PCR相同點：都是基于堿基互補配對原則，在DNA聚合酶作用下的聚合反應(yīng)。不同點：1反應(yīng)過成不同：PCR是引物對擴增，測序則是單引物擴增。2反應(yīng)成分不同：PCR是需要4種脫氧堿基，測序則有ddNTP20.分子雜交試驗不能用于：（C）（2019）A.單鏈DNA分子之間的雜交B.單鏈DNA與RNA分子之間的雜交C.抗原與抗體分子之間的結(jié)合D.雙鏈DNA與RNA分子之間的雜交21.在Sanger基因測序技術(shù)中所使用的酶是:（A）（2019）A.DNA聚合酶B.RNA聚合酶C.DNA連接酶D.DNA拓?fù)涿?2.雙鏈DNA中的堿基對有：（D）（2019）A．A-UB．G-TC．C-AD．T-A23.下列四個DNA片段中含有回文結(jié)構(gòu)的是（D）（2019）A.GAAGAAB.TGGAAAC.GAAAAGD.GAATTC24.核酸分子中儲存遺傳信息的關(guān)鍵部分是：（D）（2019）A.mRNAB.tRNAC.rRNAD.DNA25.核酸檢測探針的標(biāo)志性特征是：（A）（2019）A．一小段已知序列的單鏈核酸；B.一小段未知序列的單鏈核酸；C.一小段已知序列的雙鏈核酸；D.有同位素或非同位素標(biāo)記物。作為探針的核酸序列至少必須具備以下兩個條件：①應(yīng)是單鏈，若為雙鏈，必須先行變性處理。②應(yīng)帶有容易被檢測的標(biāo)記。它可以包括整個基因，也可以僅僅是基因的一部分；可以是DNA本身，也可以是由之轉(zhuǎn)錄而來的RNA。26.核酸分離純化的目的是：（D）（2020）A.除去PCR抑制物B.增加靶核酸濃度，使之達(dá)到PCR測定范圍C.增加樣本均一性，保證測定精密度和重復(fù)性D.以上都是27.mRNA約占總RNA的百分?jǐn)?shù)為：（A）（2020）A.5％B.10％C.15％D.20％28.分子檢測對標(biāo)本采集容器的要求是：（E）（2020）A.密閉B.一次性C.無DNase和RNaseD.無菌E.以上均是29.關(guān)于基因擴增檢測實驗室分區(qū)，以下說法不正確的是：（D）（2020）A.外周血游離DNA標(biāo)本制備可與細(xì)胞/組織標(biāo)本制備區(qū)共用；B.須注意實驗室空氣流向；C.實驗室應(yīng)有充分的通風(fēng)換氣；D.緩沖間不是必需的；E.傳遞窗不是必需的30.“無基因”或“無核酸”概念是指：（E）（2020）A.在基因擴增檢測操作時，要注意防止因為擴增產(chǎn)物污染所致檢測假陽性；B.在基因擴增檢測操作時，要注意防止因為標(biāo)本間交叉污染所致檢測假陽性；C.每次檢測后實驗室內(nèi)的充分通風(fēng)及清潔；D.實驗室各區(qū)物品的專用；E.以上均是31.商品試劑的性能驗證的合格判斷標(biāo)準(zhǔn)是：（D）（2020）A.衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)；B.國際標(biāo)準(zhǔn)；C.滿足臨床疾病的診療要求；D.試劑盒說明書上所宣稱的檢測性能E.以上均是32.L-J指控圖的失控規(guī)則制定的依據(jù)是：（B）（2020）A.各實驗室根據(jù)自身的情況具體確定；B.統(tǒng)計學(xué)的“小概率事件”原理；C.超過均值±3SD；D.超過均值±2SD；E.陰性質(zhì)控品檢測為陽性33.下列哪一種病毒遺傳物質(zhì)為RNA（D）（2020）A.乙肝病毒B.人乳頭瘤病毒C.巨細(xì)胞病毒D.新型冠狀病毒COVID-1934.以下在PCR反應(yīng)中，對擴增產(chǎn)物的特異性起決定性作用的是：（B）（2020）A.模板B.引物C.dNTPD.鎂離子35.有關(guān)于熒光定量PCR方法，下述哪一條是錯誤的？（A）（2020）A.在指數(shù)擴增初期定量；B.在擴增的終點定量；C.可采用Taqman探針；D.采用內(nèi)標(biāo)和外標(biāo)方法均可36.在選擇開展臨床檢驗項目時，應(yīng)首先考慮：（B）（2020）A.臨床預(yù)期用途；B.檢測精密度和檢測準(zhǔn)確度；C.檢測精密度；D.檢測準(zhǔn)確度37.一個PCR反應(yīng)體系中起始模板量為500，經(jīng)過30個循環(huán)后擴增產(chǎn)物的數(shù)量將達(dá)到（C）（2020）A.500×30×2B.5002×30C.500×230D.500×30238.對COVID-19疑似患者采樣，需要（C）級生物安全個人防護裝備（2020）A.ⅠB.ⅡC.ⅢD.Ⅳ39.手衛(wèi)生分為（D）步（2020）A.4B.5C.6D.740.除（A）外均可有效滅活新型冠狀病毒（2020）A.氯已定B.56℃30分鐘C.75%乙醇D.含氯消毒劑41.在基因擴增檢測中，全血或骨髓標(biāo)本不能用肝素抗凝，原因是（D）（2020）A.肝素是TaqDNA聚合酶活性的強抑制劑B.肝素對Mg++有絡(luò)合作用C.經(jīng)典的核酸提取方法很難去除肝素D.以上A和C42.下列哪種情況需對PCR檢測項目進(jìn)行方法學(xué)驗證實驗：（D）（2020）A.開展新項目前B.更換試劑品牌C.更換儀器D.以上全是43.在臨床基因擴增檢驗中，弱陽性室內(nèi)質(zhì)控品發(fā)生失控，常見的原因有下述各項，除（B）外（2020）A.核酸提取中的丟失、有機溶劑的去除不徹底、標(biāo)本中擴增抑制物的殘留等B.擴增儀孔間溫度的不一致性C.擴增產(chǎn)物的污染D.Taq酶和/或反轉(zhuǎn)錄酶的失活44.PCR擴增檢測采用內(nèi)標(biāo)，可以識別擴增檢測的（C）（2020）A.假陰性B.假陽性C.假陰性、假陽性都可以預(yù)防D.假陰性、假陽性都不能預(yù)防45.在一個DNA分子中，如G所占摩爾比為17.2%，則A所占摩爾比為（B）（2020）A.82.8%B.32.8%C.17.2%D.65.6%四.簡答題(每題5分，共25分)1.簡述什么情況下應(yīng)進(jìn)行性能驗證？(5分)（2019）答：（1）在常規(guī)應(yīng)用前，應(yīng)由實驗室對未加修改而使用的已確認(rèn)的檢驗程序進(jìn)行獨立驗證。（2）任何嚴(yán)重影響檢測系統(tǒng)分析性能的情況發(fā)生后，如儀器搬遷、設(shè)施、環(huán)境嚴(yán)重失控等。（3）常規(guī)使用期間，定期做。（4）啟用新的檢測系統(tǒng)：更換試劑、儀器、校準(zhǔn)品溯源性改變2.臨床PCR實驗室質(zhì)量管理體系文件應(yīng)包含哪些內(nèi)容？(5分)（2019）答：（1《質(zhì)量手冊》：質(zhì)量方針和質(zhì)量目標(biāo)的聲明。（2）準(zhǔn)則要求的程序和記錄。（3）實驗室規(guī)定的文件和記錄：為確保有效策劃、運行并控制其過程。（4）適用的法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)及其它規(guī)范文件。3.請簡述完整的員工培訓(xùn)計劃應(yīng)包含哪些內(nèi)容。(5分)（2019）答：（1）培訓(xùn)所涉及的范圍：儀器設(shè)備的使用、維護和校準(zhǔn)。試劑方法原理。質(zhì)量管理體系。相關(guān)法律法規(guī)，相關(guān)領(lǐng)域的新技術(shù)、新理念和新進(jìn)展。實驗操作技能等。（2）如何培訓(xùn)：講座，討論，自學(xué)和參加培訓(xùn)班。（3）培訓(xùn)的評估：書面考試，實驗考核，討論心得，論文，綜述等。4.感染性疾病的定量、定性檢測，人基因組的基因型檢測，對上述三類PCR檢測的室內(nèi)質(zhì)控品的濃度水平和型別如何要求？(5分)（2019）答：定量PCR檢測的室內(nèi)質(zhì)控品的濃度：測定線性范圍內(nèi)的高、中、低三種濃度，型別：生物DNA/RNA參考標(biāo)準(zhǔn)品；定性PCR檢測的室內(nèi)質(zhì)控品的濃度：接近方法測定下限（2-4倍）的濃度，型別：生物DNA參考標(biāo)準(zhǔn)品；人基因組的基因型檢測的室內(nèi)質(zhì)控品的濃度：型別：人類基因組DNA參考標(biāo)準(zhǔn)品。5.簡述生物安全的概念、實驗室生物安全水平的概念。(5分)（2019）答：實驗室生物安全：為了避免微生物和醫(yī)學(xué)實驗室中有害或有潛在危害的生物因子對人、環(huán)境和社會造成的危害或潛在危害，而采取的防護措施（硬件）和管理措施（軟件），達(dá)到對人、環(huán)境和社會的安全防護目的。生物安全水平：根據(jù)實驗室的工作性質(zhì)及可能分離到的病原體等級進(jìn)行安全防護水平的劃分。6.什么是室內(nèi)質(zhì)量控制？(5分)（2020）答：由實驗室工作人員，采取一定的方法和步驟，連續(xù)評價本實驗室工作的可靠性程度，旨在監(jiān)測和控制本實驗室工作的精密度，提高本實驗室常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢驗的一致性，以確定測定結(jié)果是否可靠，可否發(fā)出報告的一項工作。包括三個方面的內(nèi)容：測定前的質(zhì)量控制、統(tǒng)計學(xué)質(zhì)量控制、質(zhì)量控制的評價。7.請從氣流方向