溶血性鏈球菌

關(guān)于溶血性鏈球菌

溶血性鏈球菌又稱(chēng)沙培林對(duì)熱和化學(xué)清毒劑均敏感,常引起扁桃體、咽部、中耳等感染。亦為腎盂腎炎、產(chǎn)褥熱、猩紅熱的病原體。第2頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天一、生物學(xué)特性

二、流行病學(xué)

三、致病性

五、檢驗(yàn)和控制溶血性鏈球菌四、抵抗力第3頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天1、形態(tài)與染色

鏈球菌呈球形或橢圓形，直徑0.6-1.0μm，呈鏈狀排列，長(zhǎng)短不一，從4-8個(gè)至20-30個(gè)菌細(xì)胞組成不等，鏈的長(zhǎng)短與細(xì)菌的種類(lèi)及生長(zhǎng)環(huán)境有關(guān)。在液體培養(yǎng)基中易呈長(zhǎng)鏈，固體培養(yǎng)基中常呈短鏈，由于鏈球菌能產(chǎn)生脫鏈酶，所以正常情況下鏈球菌的鏈不能無(wú)限制的延長(zhǎng)。多數(shù)菌株在血清肉湯中培養(yǎng)2-4h易形成透明質(zhì)酸的莢膜，繼續(xù)培養(yǎng)后消失。該菌不形成芽胞，無(wú)鞭毛，易被普通的堿性染料著色，革蘭氏陽(yáng)性，老齡培養(yǎng)或被中性粒細(xì)胞吞噬后，轉(zhuǎn)為革蘭氏陰性。

第4頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天2、培養(yǎng)特征

需氧或兼性厭氧菌，營(yíng)養(yǎng)要求較高，普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)不良，需補(bǔ)充血清、血液、腹水，大多數(shù)菌株需核黃素、維生素B6、煙酸等生長(zhǎng)因子。最適生長(zhǎng)溫度為37℃，在20-42℃能生長(zhǎng)，最適pH為7.4-7.6。在血清肉湯中易成長(zhǎng)鏈，管底呈絮狀或顆粒狀沉淀生長(zhǎng)。在血平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、邊緣整齊、直徑0.5-0.75mm的細(xì)小菌落，不同菌株溶血不一。

第5頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天3、生化反應(yīng)

分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，對(duì)乳糖、甘露醇、水楊苷、山梨醇、棉子糖、蕈糖、七葉苷的分解能力因不同菌株而異。一般不分解菊糖，不被膽汁溶解，觸酶陰性。

第6頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天4、抗原結(jié)構(gòu)

鏈球菌的抗原構(gòu)造較復(fù)雜，主要有三種：

（1）核蛋白抗原或稱(chēng)P抗原，無(wú)特異性，各種鏈球菌均相同。

（2）多糖抗原或稱(chēng)C抗原，系群特異性抗原，是細(xì)胞壁的多糖組分，可用稀鹽酸等提取。

（3）蛋白質(zhì)抗原或稱(chēng)表面抗原，具有型特異性，位于C抗原外層，其中可分為M、T、R、S四種不同性質(zhì)的抗原成分，與致病性有關(guān)的是M抗原。

第7頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天5、分類(lèi)

根據(jù)鏈球菌在血液培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖后是否溶血及其溶血性質(zhì)分為三類(lèi)。

（1）α-溶血性鏈球菌：菌落周?chē)?-2mm寬的草綠色溶血環(huán)，也稱(chēng)甲型溶血，這類(lèi)鏈球菌多為條件致病菌。

（2）β-溶血性鏈球菌：菌落周?chē)纬梢粋€(gè)2-4mm寬、界限分明、完全透明的無(wú)色溶血環(huán)，也稱(chēng)乙型溶血，因而這類(lèi)菌亦稱(chēng)為溶血性鏈球菌，該菌的致病力強(qiáng)，常引起人類(lèi)和動(dòng)物的多種疾病。（3）γ-鏈球菌：不產(chǎn)生溶血素，菌落周?chē)鸁o(wú)溶血環(huán)，也稱(chēng)為丙型或不溶血性鏈球菌，該菌無(wú)致病性，常存在于乳類(lèi)和糞便中，偶爾也引起感染。第8頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天溶血性鏈球菌在自然界中分布較廣，存在于水、空氣、塵埃、糞便及健康人和動(dòng)物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通過(guò)直接接觸、空氣飛沫傳播或通過(guò)皮膚、粘膜傷口感染，被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也會(huì)對(duì)人類(lèi)進(jìn)行感染。上呼吸道感染患者、人畜化膿性感染部位常成為食品污染的污染源。一般來(lái)說(shuō)，溶血性鏈球菌常通過(guò)以下途徑污染食品：

1、食品加工或銷(xiāo)售人員口腔、鼻腔、手、面部有化膿性炎癥時(shí)造成食品的污染；

2、食品在加工前就已帶菌、奶?；蓟撔匀橄傺谆蛐笄菥植炕摃r(shí)，其奶和肉尸某些部位污染；

3、熟食制品因包裝不善而使食品受到污染。

流行病學(xué)第9頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天

溶血性鏈球菌?？梢鹌つw、皮下組織的化膿性炎癥、呼吸道感染、流行性咽炎的爆發(fā)性流行以及新生兒敗血癥、細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、猩紅熱、腎小球腎炎。溶血性鏈球菌的致病性與其產(chǎn)生的毒素及其侵襲性酶有關(guān)，主要有以下幾種：

1、鏈球菌溶血素：溶血素有O和S兩種，O為含有-SH的蛋白質(zhì)，具有抗原性，S為小分子多肽，分子量較小，故無(wú)抗原性。

2、致熱外毒素：曾稱(chēng)紅疹毒素或猩紅熱毒素，是人類(lèi)猩紅熱的主要毒性物質(zhì)，會(huì)引起局部或全身紅疹、發(fā)熱、疼痛、惡心、嘔吐、周身不適。

致病性

第10頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天3、透明質(zhì)酸酶：又稱(chēng)擴(kuò)散因子，能分解細(xì)胞間質(zhì)的透明質(zhì)酸，故能增加細(xì)菌的侵襲力，使病菌易在組織中擴(kuò)散。

4、鏈激酶：又稱(chēng)鏈球菌纖維蛋白溶酶，能使血液中纖維蛋白酶原變成纖維蛋白酶，具有增強(qiáng)細(xì)菌在組織中的擴(kuò)散作用，該酶耐熱，100℃50分鐘仍可保持活性。

5、鏈道酶：又稱(chēng)鏈球菌DNA酶，能使膿液稀薄，促進(jìn)病菌擴(kuò)散。

6、殺白細(xì)胞素：能使白細(xì)胞失去動(dòng)力，變成球形，最后膨脹破裂。

第11頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天抵抗力該菌抵抗力一般不強(qiáng)，60℃30min即被殺死，對(duì)常用消毒劑敏感，在干燥塵埃中生存數(shù)月。乙型鏈球菌對(duì)青霉素、紅霉素、氯霉素、四環(huán)素、磺胺均敏感。青霉素是鏈球菌感染的首選藥物，很少有耐藥性。

第12頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天第13頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天設(shè)備和材料

1冰箱：O℃——4℃。

2恒溫培養(yǎng)箱：36℃士1℃。

3恒溫水浴鍋：36℃土1℃。

4顯微鏡：10*～l00*。

5均質(zhì)器或滅菌乳缽。

6離心機(jī)：4000r/min。

7架盤(pán)藥物天平：0g——5009，精確至0.5g。

8滅菌試管：10mm*100mm、l6mm*160mm。

9滅菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、5mL、10mL（具1mL刻度）。

10滅菌錐形瓶：100mL。

11滅菌培養(yǎng)皿：直徑90mm。

12滅菌棉簽、鑷子等。

第14頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天培養(yǎng)基和試劑

1葡萄糖肉浸液肉湯：按GB/T4789.28一2003中4.1規(guī)定。在肉浸液肉湯內(nèi)加人1％葡萄糖。

2肉浸液肉湯：按GB/T4789.28一2003中4.1規(guī)定。

3匹克氏肉湯：按GB/T4789.28一2003中4.62規(guī)定。

4血瓊脂平板：按GB/T4789.28一2003中4.6規(guī)定。

5人血漿。6

0.25%氯化鈣。

7

0.85％滅菌生理鹽水。

8桿菌膚藥敏紙片（含0.04單位）。

第15頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天第16頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天

第17頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天

匹克氏肉湯

含1%胰蛋白胨的牛心浸液200mL1：25000結(jié)晶紫鹽水溶液10mL1：800三氮化鈉溶液10mL脫纖維兔血(或羊血)10mL制法：將上述已滅菌的各種成分，用無(wú)菌手續(xù)依次混合，分裝于無(wú)菌試管內(nèi)，每管約2mL，保存于冰箱內(nèi)備用第18頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天血平板：菌落為灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直徑約0.5—0.75mm，為圓形突起的細(xì)小菌落，乙型溶血性鏈球菌周?chē)?—4mm界限分明、無(wú)色透明的溶血圈。

第19頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天制法：取營(yíng)養(yǎng)瓊脂（PH7．6），加熱使其溶解待冷至45-50℃，以滅菌操作于每100毫升營(yíng)養(yǎng)瓊脂加滅菌脫纖維羊血或兔血5-10毫升,輕輕搖勻，立即傾注于平板或分裝試管，制成斜面?zhèn)溆谩?/p>

配方：pH7.4-7.6豆粉瓊脂

100ml

脫纖維羊血

5—10ml

血瓊脂平板（BA）亦可用其它營(yíng)養(yǎng)豐富的基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制血瓊脂。

第20頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天1、樣品處理：取25g固體（或25mL液體）檢樣加入225mL滅菌生理鹽水，制成混懸液。

2、吸取5mL混懸液接種至50mL葡萄糖肉浸液肉湯，或直接劃線于血平板（如檢樣污染嚴(yán)重，可同時(shí)接種5mL至匹克氏肉湯），36℃培養(yǎng)24h，接種血平板，36℃培養(yǎng)24h,挑起乙型溶血圓形突起的細(xì)小菌落，在血平板上分純，觀察在液體和固體中的培養(yǎng)特征、溶血情況及革蘭氏染色、形態(tài)，并進(jìn)行鏈激酶試驗(yàn)和桿菌肽敏感試驗(yàn)。

（一）檢驗(yàn)

第21頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天葡萄糖肉浸液肉湯原

理：

蛋白胨、牛肉浸出粉提供氮源、維生素和生長(zhǎng)因子；氯化鈉維持均衡的滲透壓；磷酸氫二鉀為緩沖劑；葡萄糖提供碳源。配方（每升）：

牛肉(提取浸出粉)500g氯化鈉5g蛋白胨

10g磷酸氫二鉀2g葡萄糖10g

最終pH7.5±0.2將絞碎之去筋膜無(wú)油脂牛肉500g加蒸餾水1000mL，混合后放冰箱過(guò)夜，除去液面之浮油，隔水煮沸半小時(shí)，使肉渣完全凝結(jié)成塊，用絨布過(guò)濾，并擠壓收集全部濾液，加水補(bǔ)足原量。加入蛋白胨、氯化鈉和磷酸鹽，溶解后校正pH7.4～7.6煮沸并過(guò)濾，分裝燒瓶，121℃高壓滅菌30min。第22頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天4、桿菌肽敏感試驗(yàn)：取典型菌落的菌液涂布于血平板上，用滅菌鑷子夾取每片含有0.04單位的桿菌肽紙片置于上述平板上，36℃培養(yǎng)18-24h，如有抑菌圈出現(xiàn)即為陽(yáng)性。用已知的陽(yáng)性菌株做對(duì)照。

第23頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天3、鏈激酶試驗(yàn)：吸取草酸鉀血漿0.2mL，加0.8mL滅菌生理鹽水，混勻，再加入鏈球菌18-24h36℃肉浸液肉湯培養(yǎng)物0.5mL及0.25%氯化鈣0.25mL，混勻，置于36℃水浴10min,血漿混合物自行凝固，觀察凝塊重新完全溶解的時(shí)間，完全溶解為陽(yáng)性，如24h后不溶解即為陰性。同時(shí)用肉浸液肉湯做陰性對(duì)照，用已知的鏈激酶陽(yáng)性的菌株做陽(yáng)性對(duì)照。

第24頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天（二）控制

1、防止帶菌人群對(duì)各種食物的污染，患局部化膿性感染、上呼吸道感染的人員要暫停與食品接觸的工作。

2、防止對(duì)奶及其制品的污染，牛奶場(chǎng)要定期對(duì)生產(chǎn)中的奶牛進(jìn)行體檢，堅(jiān)持?jǐn)D奶前消毒，一旦發(fā)現(xiàn)患化膿性乳腺炎的奶牛要立即隔離，奶制品要用消毒過(guò)的原料，并注意低溫保存。

3、在動(dòng)物屠宰過(guò)程中，應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行檢驗(yàn)法規(guī)，割除病灶并以流水沖洗；在肉制品加工過(guò)程中發(fā)現(xiàn)化膿性病灶應(yīng)整塊剔除。

第25頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天第26頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天第27頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天第28頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天第29頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天報(bào)告第30頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天第31頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天第32頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天第33頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天第34頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天第35頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天第36頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天第37頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天第38頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天第39頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天第40頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天第41頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天第42頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天第43頁(yè),共51頁(yè)，2024年2月25日，星期天第44頁(yè),共5