實(shí)驗(yàn)四細(xì)胞的冷凍保存

關(guān)于實(shí)驗(yàn)四細(xì)胞的冷凍保存一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆占?xì)胞凍存與復(fù)蘇的基本原理、方法和要領(lǐng)熟練進(jìn)行細(xì)胞凍存與復(fù)蘇的操作第2頁(yè),共11頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞凍存的主要目的：保存種子細(xì)胞。減少細(xì)胞被污染的危險(xiǎn)性。減少細(xì)胞因傳代培養(yǎng)而引起的遺傳變異和形態(tài)改變。避免有限細(xì)胞系出現(xiàn)衰老或惡性轉(zhuǎn)化。降低人力和物力。第3頁(yè),共11頁(yè)，2024年2月25日，星期天冰晶細(xì)胞脫水電解質(zhì)濃度變化pH變化蛋白質(zhì)變性水解酶釋出線粒體功能障礙細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變?nèi)苊阁w膜透性變化核內(nèi)DNA構(gòu)型和生物學(xué)行為的變化細(xì)胞損傷冰晶對(duì)細(xì)胞的損傷第4頁(yè),共11頁(yè)，2024年2月25日，星期天冷凍保存原則

冷凍過(guò)程要緩慢。凍存細(xì)胞必須處在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞濃度控制在：1×107－5×107/ml使用高濃度血清或蛋白保護(hù)劑使用合適的細(xì)胞冷凍保護(hù)劑，以保護(hù)細(xì)胞在冷凍過(guò)程中免受冰晶破壞。第5頁(yè),共11頁(yè)，2024年2月25日，星期天細(xì)胞冷凍保護(hù)劑的選擇對(duì)細(xì)胞無(wú)毒易穿透進(jìn)入細(xì)胞，使冰點(diǎn)降低提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性常用冷凍保護(hù)劑是DMSO(二甲基亞砜)GL(甘油)EG(乙二醇)第6頁(yè),共11頁(yè)，2024年2月25日，星期天標(biāo)準(zhǔn)冷凍程序降溫速率-1～-2℃/min；當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí)，可增至-5～-10℃/min到－100℃時(shí)，則可迅速浸入液氮中。第7頁(yè),共11頁(yè)，2024年2月25日，星期天簡(jiǎn)易冷凍程序細(xì)胞凍存管放入泡沫小盒放入-70℃冰箱3h細(xì)胞凍存管放入紗布小袋中液氮表面上停留30min直接投入液氮細(xì)胞凍存管放入泡沫小盒放入-20℃冰箱3h細(xì)胞凍存管放入紗布小袋中放入液氮灌的液氮蒸汽中，逐漸下降到液氮表面（30－40min）停留30min后，直接投入液氮中細(xì)胞凍存管裝入紗布小袋液氮罐口緩慢放入，按-1℃/min，在30－40min內(nèi)到達(dá)液氮表面停留30min投入液氮第8頁(yè),共11頁(yè)，2024年2月25日，星期天液氮從液體向氣體轉(zhuǎn)化的過(guò)程中產(chǎn)生的深低溫-196℃

第9頁(yè),共11頁(yè)，2024年2月25日，星期天本次冷凍程序細(xì)胞凍存管用厚棉花包裹，放入塑料盒中或泡沫盒中，直接投入-70℃超低溫冰箱中。第10頁(yè),共11頁(yè)，2