發(fā)酵工程實驗報告

發(fā)酵工程試驗報告年級 專業(yè)姓名 學號試驗題目 微生物工程試驗〔一組〕一、試驗目的嫻熟把握無菌操作技術，了解生物發(fā)酵過程中種子的擴培過程；把握小型發(fā)酵罐管路消毒、空消、實消、菌種培育等技術；學習把握小型發(fā)酵罐接種、取樣操作系統(tǒng)；學習使用糖度儀，把握血球計數板法；的相關曲線。二、試驗原理pH樣測定，包括對菌體進展計數、測定不同時期的干重以及糖度的變化。80℃下烘干肯定時間后的10-20%。1-5105℃或100℃下烘干，或承受紅外線烘干，也可在80℃或40℃下真空枯燥，枯燥后稱重。血球計數板法，血球計數板是一種有特別構造刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四條溝和兩條嵴，中心有一短橫溝和兩個平臺，兩嵴的表比兩平臺0.1mm0.1mm4001微生物生長曲線，是以微生物數量(活細菌個數或細菌重量)為縱坐標，培育時間為橫坐標畫得的曲線。一般說，微生物(細菌)重量的變化比個數的段(對數生長階段)、生長率下降階段及內源呼吸階段。三、試驗材料及器材菌種酵母菌〔saccharomyces〕藥品蛋白胨、葡萄糖NH4Cl、酵母浸粉、蒸餾水、種子液、無菌蒸餾水、泡敵培育基儀器設備1624三角燒瓶；小試管；酒精棉球假設干；工業(yè)用酒精一瓶；離心機1臺；振613玻璃棒12；50ml6；500ml6；100ml6666612；4四、試驗步驟(一)菌種的擴培菌種的活化〔已預備〕〔1〕180rpm，28℃，48h。種子擴培100ml〔作一、二級種子瓶，115℃，30min3180rpm，30℃，24h。5%的接種量接種于二級種子液中〔10，180rpm，28℃，24h。500ml，滅菌，待用。槍頭〔大、小都要〕(二)發(fā)酵罐的構造與滅菌和酵母菌上罐發(fā)酵空氣過濾器及管路的消毒：蒸汽經空氣過濾器及以后的空氣管道進入發(fā)0.10～0.11MPa〔0.12MPa，。到時間后，關閉蒸汽閥。將空氣經流量計進入空氣過濾器〔0.4VVM20min?！参㈤_。翻開上部蒸汽閥，使蒸汽通過進氣管進入發(fā)酵罐；對發(fā)酵罐進展空消。0.11～0.12MPa80℃以下時，才能排盡發(fā)酵罐內的冷凝水，隨即關閉冷凝水閥。調整進氣管和排氣口，使罐壓保持在0.03～0.05MPa2.5L1.5ml〔0.03~0.035%。擰緊加料口螺母。實消〔必需將安全防護罩裝上〕150rpm罐，連續(xù)升溫。95～100上部的蒸汽閥及排氣閥，使壓力保持在0.1～0.11MPa20min10min當溫度降至發(fā)酵80℃后，慢速〔150rpm〕開啟攪拌機，加速降溫。0.03~0.05MPa28℃。取樣方法：翻開排氣閥，用蒸汽消毒20～30min。關閉蒸汽閥，放出少量料液。關閉閥門，再用蒸汽消毒。接種、取樣在接種口四周圍上酒精棉球，點燃，無菌操作接入種子液。0.03~0.05MPa，28150rpm。48h6出料發(fā)酵罐的清洗(三)酵母生長代謝中生物基質的測定生長曲線的測定〔4000r/min,10min〕收集菌weight，CDW〕與時間的曲線圖。血球計數板計數。繪制細胞個數與時間的曲線圖。基質代謝與菌體生長的關系〔4000r/min,10min〕后，取0.5ml上清液用糖度計測殘?zhí)恰＠L制糖消耗曲線，即糖濃度對時間的變化曲線。五、試驗數據處理(一)本組〔一組〕試驗數據組別 0.0h1糖度值15.5h24.1h39.2h48.5h1 2.21.90.90.40.32 2.11.81.20.50.53 2.21.51.00.60.24 2.21.61.10.80.3平均值 2.1751.71.050.5750.325表2 酵母菌干重〔g/ml〕組別0.0h15.5h24.1h39.2h48.5h10.0030.0210.0310.0260.02620.0030.0170.0170.0250.02430.0040.0190.0400.0240.02440.0020.0300.0290.0250.024平均值0.0030.021750.0290.0250.02453血球計數板計數〔個〕組別0.0h15.5h24.1h 39.2h48.5h15.3×1062.0×1077.8×107 1.2×1088.5×10726.1×1062.8×1075.2×107 9.5×1079.0×10735.9×1062.2×1077.3×107 7.0×1078.5×10745.5×1062.6×1076.5×107 8.0×1078.0×10755.7×1062.4×1076.7×107 9.1×1078.5×107平均值5.3×1062.0×1077.8×107 1.2×1088.5×107(二比照組〔二組〕試驗數據表1糖度測量12

0.0h1.9%2.1%

14.5h1.20%1.8%

22.5h1.0%1.2%

37.6h0.8%0.8%

46.3h0.5%0.6%32.0%1.5%0.9%0.7%0.2%42.0%1.6%0.9%0.9%0.3%平均值2.0%1.2%1.0%0.8%0.4%表1酵母菌干重〔g/ml〕次數\時間0.0h14.5h22.5h37.6h46.3h11x10-31.9x10-24.3x10-29.4x10-28.1x10-225x10-31.6x10-24.2x10-29.2x10-28.5x10-233x10-32.3x10-21.9x10-21.3x10-11.14x10-1平均值3x10-31.93x10-2 3.47x10-2 1.05x10-13血球計數板計數〔個〕9.33x10-2次數\時間0.0h14.5h22.5h37.6h46.3h116334106214284352213281069190553431447210371997675平均值1737810561776.67548總數〔個/ml〕4.25x1069.45x1072.64x1084.442x1081.37x108發(fā)酵過程糖度含量3%發(fā)酵過程糖度含量3%3%2%2%一組二組1%1%0%0h14.5h22.5h37.6h46.3h1%圖1干重變化干重變化0.040.030.02二組一組0.0100h14.5h22.5h37.6h46.3h0.01圖2測酵母菌干重所得生長曲線血球計數板變化曲線血球計數板變化曲線98.587.5二組一組76.560h14.5h22.5h37.6h46.3h圖3血球計數板計數變化曲線(四本組數據變化曲線糖度值變化曲線糖度值變化曲線2.52% 1.5度糖10.500510152025時間/h30354045504發(fā)酵液糖度值變化曲線酵母菌干重變化曲線酵母菌干重變化曲線0.0300.025/0.0200.0150.0100.