全日制講義（四）-生物科學(xué)技術(shù)

第二十二講微生物發(fā)酵技術(shù)................................2

課前檢測..........................................................2

知識梳理.........................................................4

課后檢測.........................................................10

課后作業(yè).........................................................12

第二十三講微生物培養(yǎng)...................................15

課前檢測.........................................................15

知識梳理.........................................................16

課后檢測.........................................................25

課后作業(yè).........................................................26

第二十四講基因工程.....................................31

課前檢測.........................................................31

知識梳理.........................................................33

課后檢測.........................................................42

課后作業(yè).........................................................44

第二十五講細(xì)胞工程.....................................51

課前檢測.........................................................51

知識梳理.........................................................53

植物細(xì)胞工程.....................................................53

動物細(xì)胞工程.....................................................57

課后檢測.........................................................62

課后作業(yè).........................................................64

第二十二講微生物發(fā)酵技術(shù)

爆附檢測

1.（2013海淀高三期末24）下列關(guān)于果酒、果醋、腐乳、泡菜制作過程的敘述正確的是（）

A.發(fā)酵菌群均為原核細(xì)胞B.均需高溫高壓滅菌

C.均可以使用自然菌種D.均需控制無氧條件

2.（2012年東城區(qū)期末）右圖裝置可用于生物技術(shù)實踐的相關(guān)實驗，有關(guān)敘述不氐趟的（）

A.兩種裝置都可先用于果酒的制作，后用于果醋的制作

B.利用裝置甲制作腐乳時，應(yīng)隨著豆腐塊層數(shù)的加高而增加鹽量

C.用裝置乙制作果酒時溫度應(yīng)控制在30℃左右，制作果醋時應(yīng)適當(dāng)降溫

D.裝置乙的排氣口通過一個長而彎曲的膠管，可防止空氣中微生物的污染

3.（2011年豐臺高三期末50）下列與果酒、果醋和腐乳制作相關(guān)的敘述，正確的是（）

A.腐乳制作所需要的適宜溫度最高

B.制備葡萄酒過程中，擰松瓶蓋是為了減少雜菌污染

C.使用的菌種分別是酵母菌、醋酸菌、乳酸菌

D.使用的菌種都具有細(xì)胞壁、核糖體、DNA和RNA

4.（2014海淀期中14）某人利用乳酸菌制作泡菜時，因操作不當(dāng)導(dǎo)致泡菜腐爛。下列分析

中正確的是

①罐口密閉缺氧，抑制了乳酸菌的生長繁殖②罐口封閉不嚴(yán)，氧氣抑制了乳酸菌的生長繁

殖③罐口封閉不嚴(yán)，氧氣抑制了其他腐生菌的生長和繁殖④罐口封閉不嚴(yán)，促進(jìn)了需氧型

腐生菌的生長和繁殖

A.①③B.②④C.②③D.①④

5.（2012年西城區(qū)期末）以下關(guān)于傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的相關(guān)描述正確的是（）

A.釀酒過程中密封的時間越長，酵母菌產(chǎn)生的酒精量就越多

B.釀制果醋所需酵母菌和醋酸菌的發(fā)酵底物、條件相同

C.制作腐乳需利用毛霉產(chǎn)生的酶分解豆腐中的蛋白質(zhì)等物質(zhì)

D.制作泡菜時、乳酸菌可以將葡萄糖分解成乳酸和CO2

知識稿;理

一、細(xì)胞結(jié)構(gòu)、真核細(xì)胞和原核細(xì)胞的結(jié)構(gòu)異同

參看第二講《細(xì)胞結(jié)構(gòu)》部分

二、同化作用和異化作用

1、定義

同化作用：是指生物體把從外界環(huán)境中獲取的營養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)變成自身的組成物質(zhì)，并且

儲存能量的變化過程。根據(jù)是否具有同化能力，將生物分為和。

異化作用：是生物體將體內(nèi)的大分子轉(zhuǎn)化為小分子并釋放出能量的過程。呼吸作用

是異化作用中重要的過程。根據(jù)其呼吸類型，將生物分為、、

常見微生物的新陳代謝類型（先同化后異化）

常見微生物碳源來源氮源來源能源代謝類型

藍(lán)細(xì)菌（藍(lán)藻）二氧化碳含氮有機(jī)物——

大腸桿菌葡萄糖含氮有機(jī)物葡萄糖—

放線菌葡萄糖含氮有機(jī)物葡萄糖異養(yǎng)需氧

霉菌葡萄糖含氮有機(jī)物葡萄糖—

藻類二氧化碳含氮有機(jī)物——

乳酸菌葡萄糖含氮有機(jī)物葡萄糖—

酵母菌葡萄糖含氮有機(jī)物葡萄糖—

硝化細(xì)菌二氧化碳氨氣——

反硝化細(xì)菌葡萄糖亞硝態(tài)氮、葡萄糖異養(yǎng)厭氧型

硝態(tài)氮

固氮藍(lán)藻二氧化碳氮?dú)夤饽茏责B(yǎng)需氧

根瘤菌葡萄糖氮?dú)馄咸烟钱愷B(yǎng)需氧

圓褐固氮菌葡萄糖氮?dú)馄咸烟钱愷B(yǎng)需氧

2、未知菌的新陳代謝類型的判斷

若生活在富含有機(jī)質(zhì)的地方，同化類型為異養(yǎng)型。

若生活在土壤表層、培養(yǎng)液表面或培養(yǎng)過程需震蕩培養(yǎng)，異化類型為需氧型。

課堂練習(xí)1.對下列幾種微生物的敘述正確的是()

①酵母菌②乳酸菌③硝化細(xì)菌④藍(lán)藻⑤煙草花葉病毒

A.從生態(tài)系統(tǒng)的成分看，①②③是分解者，④是生產(chǎn)者

B.從同化作用類型看:②是厭氧型，③④是需氧型

C.從異化作用類型看，①②是異養(yǎng)型，③④是自養(yǎng)型

D.從結(jié)構(gòu)和成分看，①具有成形的細(xì)胞核，⑤的遺傳物質(zhì)中不含胸腺喀嚏

三、果酒果醋腐乳泡菜的制作

(-)利用微生物進(jìn)行發(fā)酵來生產(chǎn)特定的產(chǎn)物

生產(chǎn)應(yīng)用生物學(xué)分代謝類型發(fā)酵條件

類

—果酒——前期需氧，后期不需氧，18-25C

_____果醋________________一直需氧，30-35℃

腐乳毛霉生長需氧，發(fā)酵不需氧。

———

15-18℃

—泡菜——無氧，室溫

(-)實驗原理

1、果酒的原理：酵母菌進(jìn)行有氧呼吸大量繁殖，表達(dá)式為：C6Hl206+02-CO2+H2O+能

旦

里

酵母菌進(jìn)行無氧呼吸產(chǎn)生和,表達(dá)式為：C6Hl206—C2H5OH+CO2+

能量

2、果醋的原理：當(dāng)缺少糖源時和有氧條件下，醋酸菌可將乙醇(酒精)氧化成醋酸。當(dāng)氧

氣、糖源都充足時，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸。C2H5OH+O2-CH3co0H+H20

注意事項:

（1）制作果酒時，先沖洗葡萄再去除枝梗和腐爛的子粒，注意不要反復(fù)多次沖洗。

（2）注入的果汁量不要超過塑料瓶總體積的o由于發(fā)酵旺盛期CO?的產(chǎn)量非常

大,因此需要,防止發(fā)酵瓶爆裂。每天要適時排氣，如：

2?4次，進(jìn)行排氣。

（3）果酒的鑒定：嗅味和品嘗、顯微鏡觀察、用檢驗酒精的存在（橙紅色

變?yōu)榛揖G色）

（4）果醋的鑒定：嗅味和品嘗、顯微鏡觀

察、比較發(fā)酵前后的值

（5）使用該裝置制酒時，應(yīng)該

;制醋時，應(yīng)將充氣口連接

氣泵，輸入氧氣。排氣口是在酒精發(fā)酵時用來排出CCh的，通過一個長而彎曲的

膠管與瓶身連接，其目的是o

（6）在果酒和果醋制作的過程中，Ph均會下降，果醋下降的更快。

（7）充氣的管口要在液面以下，排氣的管口在液面以上。

課堂練習(xí)2.（2011年東城高三期末27）下列關(guān)于果酒和果醋制作的敘述，不正確的是（）

A.制作果酒時瓶口需密閉，而制作果醋時中斷通氧可能會引起醋酸菌死亡

B.在變酸的果酒表面觀察到的菌膜可能是醋酸菌在液面大量繁殖形成的

C.溫度對酵母菌酒精發(fā)酵的影響很大，而對醋酸菌的發(fā)酵影響不大

D.制作果酒和果醋時都應(yīng)用70%的酒精對發(fā)酵瓶消毒并注意無菌操作

課堂練習(xí)3.（2012海淀期中）圖2示果酒和果醋制作流程和發(fā)酵裝置簡圖，與此有關(guān)描述

不正確的是（）

充氣口

排氣口

挑選葡萄一?沖洗一?榨汁一?

酒精發(fā)酵一＞1I

II

果酒果醋

出料口嚷BB

圖甲果酒、果醋制作流程圖乙發(fā)酵裝置

圖2

A.選取新鮮葡萄去除枝梗，再反復(fù)沖洗干凈后備用

B.葡萄汁裝瓶發(fā)酵時，要留出約1/3空間，以保證發(fā)酵前期氧氣供應(yīng)

C.果酒接種醋酸菌后，需適當(dāng)提高溫度，并不斷通入無菌空氣

D.排氣口采用長而彎曲的膠管，其目的是防止雜菌污染

課堂練習(xí)4（2015海淀期末20）某學(xué)生利用酵母菌釀酒過程中，經(jīng)檢測活菌數(shù)量適宜但卻

不產(chǎn)生酒精，此時應(yīng)采取的措施是

A.降低溫度B.隔絕空氣C.加緩沖液D.添加新鮮培養(yǎng)基

3、腐乳的原理：毛霉等微生物產(chǎn)生的能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和

氨基酸；可將脂肪分解成甘油和脂肪酸。

注意事項：

（1）豆腐的含水量為70%左右，水分過多則腐乳不易成形。

（2）先接種毛霉，使毛霉生長5天后，再加鹽腌制8天后，加入鹵湯。

（3）,并隨層加高而在瓶口表面,以防止

。鹽的濃度過低，不足以微生物生長，可能導(dǎo)致—

;鹽的濃度過高，會影響腐乳的口味。

（4）鹵湯酒精含量控制在12%左右為宜。酒精含量的高低與腐乳后期發(fā)酵時間的長短有很

大關(guān)系：酒精含量過高，，使腐乳成熟期;酒精含量過低，不足以抑制微生物

生長，豆腐易腐敗。

（5）加入鹵湯后，將瓶口通過酒精燈火焰，用膠條密封。

（6）發(fā)酵過程中，利用的是毛霉產(chǎn)生的酶，而不是毛霉菌體。

課堂練習(xí)5.（2011年石景山高三期末37）某同學(xué)在制作腐乳的過程中，發(fā)現(xiàn)豆腐腐敗變質(zhì),

下列不屬于其原因的是（）

A.用鹽腌制時，加鹽量太少B.用來腌制腐乳的玻璃瓶，沒有用沸水消毒

C.制作鹵湯時，料酒加的量較多D.裝瓶后，沒有將瓶口密封

課堂練習(xí)6.圖1為腐乳制作過程的流程圖，下列說法不正確的是（）

豆腐上長出毛霉|—加鹽腌制加鹵湯裝瓶|—>|密封腌制

圖1

A.毛霉為好氧型真菌，為避免其無氧呼吸，碼放豆腐時要留出一定縫隙

B,加鹽腌制的目的是析出豆腐中的水分使之變硬，同時能抑制微生物的生長

C.加鹵湯、密封腌制中，毛霉不斷增殖，并產(chǎn)生大量的醐，分解蛋白質(zhì)

D.用膠條密封瓶口時，最好將瓶口通過灑精燈的火焰，以防止瓶口污染

4、泡菜的原理：乳酸菌在無氧條件下，將葡萄糖分解成乳酸。常見的乳酸菌有乳酸鏈球菌

和乳酸桿菌，乳酸桿菌常用于制作酸奶。

注意事項：

（1）腌制過程中，要注意控制腌制的時間、溫度和食鹽的用量。鹽水煮沸冷卻后與新鮮蔬

菜混合均勻，裝入泡菜壇，鹽水要沒過全部菜料。壇蓋邊緣的水槽要注滿水，防止—

,以保證乳酸菌發(fā)酵的無氧環(huán)境。

（2）一般在腌制10天后，亞硝酸鹽的含量______________。

（3）如果希望發(fā)酵快些，可將蔬菜在開水中浸1分鐘后入壇，再加上一些白酒。

（4）加入一些已經(jīng)腌制過的泡菜汁，這相當(dāng)于已經(jīng)擴(kuò)增的發(fā)酵菌，可減少腌制時

間。

發(fā)酵過程中亞硝酸鹽含量的測定

亞硝酸鹽：人體攝入的亞硝酸過量時，會引起中毒。在特定條件下，體內(nèi)亞硝酸鹽會轉(zhuǎn)變成

致癌物亞硝胺。

在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，再與N/一蔡基乙二胺鹽

酸鹽結(jié)合生成色溶液。將經(jīng)過反應(yīng)顯色后的待測樣品與標(biāo)準(zhǔn)液，即

可計算出樣品中的亞硝酸鹽含量。

課堂練習(xí)7.（2011年豐臺高三期末48）下列有關(guān)泡菜制作及亞硝酸鹽含量測定的敘述中,

正確的是（）

A.泡菜制作需要配制鹽水，其中鹽與水的質(zhì)量比為4:1

B.泡菜腌制時間長短會影響亞硝酸鹽含量，但溫度和食鹽的用量不影響其含量

C.亞硝酸鹽含量的測定步驟為：重氮化-酸化-顯色-比色

D.將顯色后的樣品與已知濃度標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行目測比較，可估算出泡菜的亞硝酸鹽含量

課堂練習(xí)&（2012年豐臺區(qū)期末）某人利用乳酸菌制作泡菜，因操作不當(dāng)泡菜腐爛。下列

原因分析合理的是（）

①罐口完全密閉，缺氧抑制了乳酸菌的生長繁殖

②罐口封閉不嚴(yán)，氧氣抑制了乳酸菌的生長繁殖

③罐口封閉不嚴(yán)，氧氣抑制了其他腐生菌的生長繁殖

④罐口封閉不嚴(yán)，促進(jìn)了需氧腐生菌的生長繁殖

A.①③B.②④C.②③D.①④

德后檢測

1.（2013海淀高三期末24）下列關(guān)于果酒、果醋、腐乳、泡菜制作過程的敘述正確的是（）

A.發(fā)酵菌群均為原核細(xì)胞B.均需高溫高壓滅菌

C.均可以使用自然菌種D.均需控制無氧條件

2.（2012年東城區(qū)期末）右圖裝置可用于生物技術(shù)實踐的相關(guān)實驗，有關(guān)敘述不氐觸的（）

oE

甲z.

A.兩種裝置都可先用于果酒的制作，后用于果酸的制作

B.利用裝置甲制作腐乳時，應(yīng)隨著豆腐塊層數(shù)的加高而增加鹽量

C.用裝置乙制作果酒時溫度應(yīng)控制在30℃左右，制作果醋時應(yīng)適當(dāng)降溫

D.裝置乙的排氣口通過一個長而彎曲的膠管，可防止空氣中微生物的污染

3.（2011年豐臺高三期末50）下列與果酒、果醋和腐乳制作相關(guān)的敘述，正確的是（）

A.腐乳制作所需要的適宜溫度最高

B.制備葡萄酒過程中，擰松瓶蓋是為了減少雜菌污染

C.使用的菌種分別是酵母菌、醋酸菌、乳酸菌

D.使用的菌種都具有細(xì)胞壁、核糖體、DNA和RNA

4.（2014海淀期中14）某人利用乳酸菌制作泡菜時，因操作不當(dāng)導(dǎo)致泡菜腐爛。下列分析

中正確的是

①罐口密閉缺氧，抑制了乳酸菌的生長繁殖②罐口封閉不嚴(yán)，氧氣抑制了乳酸菌的生長繁

殖③罐口封閉不嚴(yán)，氧氣抑制了其他腐生菌的生長和繁殖④罐口封閉不嚴(yán)，促進(jìn)了需氧型

腐生菌的生長和繁殖

A.①③B.②④C.②③D.①④

5.（2012年西城區(qū)期末）以下關(guān)于傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的相關(guān)描述正確的是（）

A.釀酒過程中密封的時間越長，酵母菌產(chǎn)生的酒精量就越多

B.釀制果醋所需酵母菌和醋酸菌的發(fā)酵底物、條件相同

C.制作腐乳需利用毛霉產(chǎn)生的酶分解豆腐中的蛋白質(zhì)等物質(zhì)

D.制作泡菜時、乳酸菌可以將葡萄糖分解成乳酸和CO2

德后隹業(yè)

1.（14朝陽一模4）下列關(guān)于生產(chǎn)措施或生活現(xiàn)象的分析，塔送的是（）

A.零度以上低溫貯存果蔬，可降低呼吸酶活性，減少有機(jī)物的分解

B.提倡慢跑，可防止因肌細(xì)胞無氧呼吸積累乳酸而導(dǎo)致的酸脹乏力

C.若H7N9禽流感病毒侵入人體，機(jī)體的T細(xì)胞會合成并分泌淋巴因子

D.由于亞硝酸鹽含量先減少后增加，故應(yīng)在其含量增加前盡快食用泡菜

2.（14海淀二模5）下列有關(guān)生物技術(shù)與實踐的敘述，不正確的是（）

A.用雙縮胭試劑檢測某組織樣液中是否含有蛋白質(zhì)

B.用龍膽紫染色觀察根尖細(xì)胞的有絲分裂

C.制作泡菜時密封壇口的目的是促進(jìn)酵母菌的增殖

D.在適宜的高滲溶液中酵解法去除植物細(xì)胞壁

3.（13朝陽一模1）下列各項與直接培養(yǎng)微生物無關(guān)的是（）

A.制作果醋需將環(huán)境溫度保持在30-35℃

B.將土壤稀釋液涂布于選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)

C.將樣品顯色液與標(biāo)準(zhǔn)顯色液比較，測定樣品中亞硝酸鹽含量

D.制作腐乳時，需先將豆腐在適宜溫度、濕度條件下放置5天

4.（13延慶一模5）在家庭中用鮮葡萄制作果酒時，正確的操作是（）

A.給發(fā)酵裝置適時排氣

B.讓發(fā)酵裝置接受光照

C.葡萄汁裝滿發(fā)酵瓶保證無氧

D.酵母菌裝置放在40℃處

5.（13海淀二模1）制作果酒、果醋和泡菜三個實驗的共同點(diǎn)是（）

A.菌種為異養(yǎng)原核生物

B.將原料滅菌后再發(fā)酵

C.保證無氧環(huán)境下發(fā)酵

D.發(fā)酵液最終呈現(xiàn)酸性

6.（2012豐臺1模5）人們常用醋酸桿菌來釀造果醋，下列說法正確的是：（）

A.醋酸桿菌在線粒體進(jìn)行有氧呼吸第三階段氧與［H］結(jié)合時釋放的能量最多

B.釀造過程中，當(dāng)缺少糖源的時候，醋酸桿菌將乙醇變?yōu)橐胰?，再變?yōu)榇姿?/p>

C.釀造過程中在補(bǔ)充氧氣的同時，要定時釋放氣體以排出細(xì)胞呼吸產(chǎn)生的CO2

D.在加入酒精和CaCO3的固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)醋酸菌，可觀察抑菌圈大小選出高產(chǎn)菌

7、（2012海淀期中）在果酒、果醋和腐乳制作中，都要防止徽生物污染，下列有關(guān)敘述正

確的是（）

A.果醋發(fā)酵階段應(yīng)封閉充氣口，防止雜菌進(jìn)入

B.腌制腐乳的鹵湯應(yīng)含有適當(dāng)濃度的酒精以抑制細(xì)菌的增殖

C.用自然菌種發(fā)酵釀酒時，需將封有葡萄汁的發(fā)酵瓶高壓滅菌

D.將長滿毛霉的豆腐放在瓶中加鹽時，接近瓶口部分的鹽要鋪薄

8、（2012海淀期中）下列有關(guān)泡菜的制作和亞硝酸鹽含量的測定的實驗敘述中，正確的是

（）

A.將新鮮蔬菜與煮沸冷卻的鹽水（鹽和清水的質(zhì)量比為4:1）混勻裝瓶

B.發(fā)酵過程始終要保持密封狀態(tài)，泡菜壇蓋邊緣的水槽中要始終裝滿水

C.在酸化條件下，亞硝酸鹽與對氮基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)形成玫瑰紅色沉淀

D.隨發(fā)酵進(jìn)行，亞硝酸鹽含量逐漸增加，用比色法可進(jìn)行亞硝酸鹽含量的測定

9.（2013海淀期中）用蔗糖、奶粉和經(jīng)蛋白酶水解后的玉米胚芽液，通過乳酸菌發(fā)酵可生

產(chǎn)新型酸奶，下列相關(guān)敘述不正確的是（）

A.蔗糖消耗量與乳酸生成量呈正相關(guān)B.酸奶出現(xiàn)明顯氣泡說明有雜菌污染

C.乳酸菌是異養(yǎng)厭氧菌D.只有奶粉為乳酸發(fā)酵提供氮源

10.（2014海淀期中）某人利用乳酸菌制作泡菜時，因操作不當(dāng)導(dǎo)致泡菜腐爛。下列分析中

正確的是

①罐口密閉缺氧，抑制了乳酸菌的生長繁殖②罐口封閉不嚴(yán)，氧氣抑制了乳酸菌的生長

繁殖③罐口封閉不嚴(yán)，氧氣抑制了其他腐生菌的生長和繁殖④罐口封閉不嚴(yán)，促進(jìn)了

需氧型腐生菌的生長和繁殖

A.①?

B.②④

C.②③

D.Q）?

11.（2013年東城高三期末37）（6分）常見的釀酒酹母只能利用葡萄糖而不能利用木糖來

進(jìn)行酒精發(fā)酵，而自然界中某些酵母菌能分解木糖產(chǎn)生酒精，但是對酒精的耐受能力差。科

學(xué)家利用基因工程培育了能利用這兩種糖進(jìn)行發(fā)酵且對酒精耐受能力強(qiáng)的釀酒酵母。

（1）將自然界中采集到的葡萄帶回實驗室，用無菌水將葡萄皮上的微生物沖洗到無菌的三

角瓶中，然后將瓶中的液體用法接種于固體培養(yǎng)基上，在適宜的條件下培養(yǎng)，獲得

各種菌落。

（2）將培養(yǎng)基上的酵母菌菌株轉(zhuǎn)接到的培養(yǎng)基中，無氧條件下培養(yǎng)一周后，有些

酵母菌死亡，說明這些酵母菌不能利用木糖發(fā)酵。從存活的酵母菌中提取DNA,經(jīng)大量擴(kuò)

增獲得目的基因。

（3）將目的基因連接到質(zhì)粒上，該質(zhì)粒具有尿喘咤合成酶基因作為標(biāo)記基因。將重組質(zhì)粒

導(dǎo)入酵母菌時，應(yīng)選擇缺乏能力的釀酒酵母作為受體菌。

（4）將上述獲得的轉(zhuǎn)基因釀酒酵母接種在以和為碳源的培養(yǎng)基中進(jìn)

行發(fā)酵能力測試。隨著發(fā)酵的持續(xù)進(jìn)行，若該釀酒酵母能夠存活，說明它能,即

說明所需菌株培育成功。

第二十三講微生物培養(yǎng)

爆前檢測

1.（2011年石景山高三期末36）關(guān)于菌落的敘述，不正確的是（）

A.一個菌落往往是一個細(xì)胞在固體培養(yǎng)基上克隆的結(jié)果

B.菌落的特征可作為鑒定菌種的重要依據(jù)

C.只有在人工配制的固體培養(yǎng)基表面才能形成菌落

D.將單菌落接種至固體斜面培養(yǎng)基上，可進(jìn)一步純化菌種

2.（2011年順義高三期末28）下列關(guān)于微生物培養(yǎng)和應(yīng)用知識的敘述，正確的是（）

A.實驗室培養(yǎng)硝化細(xì)菌時，必須用葡萄糖作為碳源

B.培養(yǎng)基中，只有有機(jī)碳源和氮源可以提供能量

C.自養(yǎng)、異養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基的主要區(qū)別是碳源

D.培養(yǎng)分解尿素的細(xì)菌前，需對培養(yǎng)基進(jìn)行消毒

3.（2011年石景山高三期末35）下列有關(guān)平板劃線接種法的操作不正確的是（）

A.將接種環(huán)放在火焰上灼燒B.將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)液

C.蘸取菌液和劃線要在火焰旁進(jìn)行

D.劃線時要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)的劃線相連

4.（2011年東城高三期末28）下列關(guān)于微生物分離和培養(yǎng)的有關(guān)敘述，不生現(xiàn)的是（）

A.分離土壤中不同的微生物，要采用不同的稀釋度

B.測定土壤樣品中的活菌數(shù)目，常用顯微鏡直接計數(shù)法

C.提純和分離嚴(yán)格厭氧型微生物，一般不用稀釋涂布平板法

D.分離能分解尿素的細(xì)菌，要以尿素作為培養(yǎng)基中唯一氮源

5.（2012年東城期末）欲從土壤中分離出能分解尿素的細(xì)菌，下列實驗操作中不氐砸的是

A.將土壤用無菌水進(jìn)行一系列的梯度稀釋

B.同一濃度的土壤稀釋液應(yīng)至少涂布三個平板

C.可將未接種的培養(yǎng)基在相同條件下培養(yǎng)作為對照

D.用加入剛果紅指示劑的培養(yǎng)基可篩選出分解尿素的細(xì)菌

知識機(jī);理

一、重要概念

(一)微生物：微生物是一切肉眼看不見或看不清的微小生物的總稱。

(二):單個或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的,

具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。

單菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。細(xì)菌的菌落特征因種而異。

(三)無菌技術(shù)：

1、無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。無論是隨后

將要學(xué)到的倒平板、平板劃線操作，還是平板稀釋涂布法，其操作中的每一步都需

要做到“無菌”，即防止雜菌污染。

2、定義：利用化學(xué)或物理方法，殺死大部份致病微生物的過程。區(qū)分為高

程度消毒(High-levelDisinfection)、中程度消毒(Intermediate-levelDisinfection)>

低程度消毒(Low-levelDisinfection)三種方式。

消毒的方法：

(1)煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min可以殺死微生物的營養(yǎng)細(xì)胞核一部分芽抱，可

用于培養(yǎng)器皿的消毒。

(2)巴氏消毒法：70-75°C下煮30min或80℃下煮15min,實際生產(chǎn)中常用于

鮮奶的消毒。

(3)化學(xué)藥劑消毒法：用70%-75%酒精進(jìn)行皮膚消毒；氯氣消毒水源。

(4)紫外線消毒：不但能使微生物的蛋白質(zhì)變性，還能破壞它的遺傳物質(zhì)。

3、的定義：以化學(xué)劑或物理方法消滅所有微生物，包括所有細(xì)菌的繁殖體、

芽胞、霉菌及病毒，而達(dá)到完全無菌之過程。

常用滅菌的方法：

(1)灼燒滅菌：適用于操作時試管口及接種環(huán)的滅菌。

(2)干熱滅菌：160-170℃下加熱l-2h,適用于玻璃器皿等耐熱器具的滅菌。

(3)：lOOkPa、121℃下維持15-30min,適用于培養(yǎng)基、無菌

水等的滅菌。

最常用的滅菌方法是,它可以殺滅所有的生物，包括最耐

熱的某些微生物的休眠體，同時可以基本保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被破壞。

(四)培養(yǎng)基

1、定義：培養(yǎng)基是供微生物、植物和動物組織生長所用的人工配制的養(yǎng)料，一般

都含有、、、等，有的還含有某種生物生長所

特需的生長因子。

2、營養(yǎng)物質(zhì)及功能：

(1)水

(2)無機(jī)鹽

(3)碳源：為微生物提供生長繁殖所需的碳元素，包括有機(jī)碳源和無機(jī)碳源。作

用：糖類是最常用的碳源、主要合成微生物的細(xì)胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物、異養(yǎng)微生

物的能源物質(zhì)。

(4)氮源：為微生物的生長提供氮元素的營養(yǎng)物質(zhì)。作用：主要合成氨基酸、核

酸和含氮的有機(jī)物。

3、培養(yǎng)基的分類及作用：

(1)按照物理狀態(tài)來分：固體、半固體、液體

：純化、選擇、鑒定；

半固體：動力檢測、保種；

：擴(kuò)大培養(yǎng)，選擇，獲得代謝產(chǎn)物

(2)按照化學(xué)成分來分：

天然：是指用化學(xué)成分并不十分清楚或化學(xué)成分不恒定的天然有機(jī)物質(zhì)配制而成培

養(yǎng)基。常用的有機(jī)物有牛肉膏、酵母膏、蛋白陳、麥芽汁、豆芽汁、玉米粉、熬皮、

牛奶、血清等。

合成：由化學(xué)成分完全了解的物質(zhì)配制而成的培養(yǎng)基。

半合成：是指一類主要用已知化學(xué)成分的試劑配制，同時又添加某些未知成分的天

然物質(zhì)制備而成的培養(yǎng)基。

(3)按照用途來分：

①基礎(chǔ)培養(yǎng)基：含有一般微生物生長繁殖所需的基本營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基，也稱為基

本培養(yǎng)基。

②:在培養(yǎng)基中加入某種特殊化學(xué)物質(zhì)（指示劑），使其與微生物

代謝產(chǎn)物發(fā)生顯色反應(yīng)，僅憑肉眼觀察即可根據(jù)菌落顏色分辨出其中的微生物類別。

鑒別培養(yǎng)基主要用于微生物的快速分類鑒定、分離和篩選產(chǎn)生某種代謝產(chǎn)物的微生

物菌種。

例如：

令EMB培養(yǎng)基：伊紅美藍(lán)乳糖培養(yǎng)基，一種鑒別大腸菌群（尤其是E.coli）的鑒

別性培養(yǎng)基。因為E.coli能強(qiáng)烈發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸，所以它可在EMB平板上與—

結(jié)合，產(chǎn)生具綠色金屬閃光的菌落。

令在培養(yǎng)分解纖維素的微生物時，在培養(yǎng)基中加入,可出現(xiàn)。

因為剛果紅可與纖維素這種多糖結(jié)合成紅色復(fù)合物，而不和單糖或二糖發(fā)生反

應(yīng)。

令在培養(yǎng)分解尿素的微生物時.，在培養(yǎng)基中加入,可出現(xiàn)。

因為微生物分解尿素的過程中，使培養(yǎng)基呈現(xiàn)堿性。

③：在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，這種化學(xué)物質(zhì)沒有營養(yǎng)作用，

對所需分離的微生物無害，但可以抑制或殺死其它微生物。或者依據(jù)某些微生物的

對某些營養(yǎng)的特殊需求，專門進(jìn)行另外添加的培養(yǎng)基。

令缺一種營養(yǎng)成分。如：在缺乏碳源的培養(yǎng)基上培養(yǎng)微生物。在缺乏

的培養(yǎng)基上培養(yǎng)固氮菌。

令以XX為唯一的XX。如：以為唯一的培養(yǎng)基可篩選分解纖維

素的菌。以為唯一的可篩選分解尿素的菌。

令額外添加一種成分，抑制某種生物的生長。如在在培養(yǎng)基中加入高濃度的鹽，

可篩選出高耐鹽的金黃色葡萄球菌。在動物細(xì)胞培養(yǎng)液中加入可

抑制細(xì)菌的增長。

課堂練習(xí)1.（2012年海淀區(qū)期末）細(xì)菌需要從外界吸收營養(yǎng)物質(zhì)并通過代謝來維持正常的

生長和繁殖。下列與此有關(guān)的說法正確的是

A.乳酸菌與硝化細(xì)菌所利用的碳源物質(zhì)是相同的

B.氮源不可能作為細(xì)菌的能源物質(zhì)

C.瓊脂是細(xì)菌生長和繁殖中不可缺少的一種物質(zhì)

D.以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上長出的不都是尿素分解菌

二、培養(yǎng)基配制

1、配置原則：

①目的明確：根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的

②營養(yǎng)協(xié)調(diào)：各種營養(yǎng)成分的協(xié)調(diào)

③pH適宜

④經(jīng)濟(jì)廉價

2、配置過程：

計算|一》反研士|溶化T滅菌卜T倒平板或分裝

3、倒平板技術(shù)：

待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時，在酒精燈附近倒平板。（倒平板操作見課本）2d后觀察

平板，無雜菌污染才可用來接種。

操作步驟：

（1）將滅菌過的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拔出

棉塞。

（2）右手拿錐形瓶，使瓶口迅速通過火焰。

（3）用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙。右手將錐形瓶中的培

養(yǎng)基（約10-20ml）倒入培養(yǎng)皿。左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。

（4）等待平板冷卻凝固，大約需5-10min。然后，將平板倒過來放置，使皿蓋在下，

皿低在上。

平板培養(yǎng)基的制作是否合格：如果______________________________________________

,說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。

三、微生物的接種、分離、純化

1、平板劃線法

通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作，將聚集的菌鐘逐步分散到

培養(yǎng)基的表面.在數(shù)次畫線后，可以分離到由一個細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體,

這就是。

操作步驟：

(1)將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅。

(2)在火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開棉塞。

(3)將試管口通過火焰。

(4)將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中，沾取一環(huán)菌液。

(5)將試管口通過火焰，并塞上棉塞。

(6)左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三到五

條平行線，蓋上皿蓋。注意不要劃破培養(yǎng)基。

(7)灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線，重復(fù)

以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線，注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。

(8)將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2、稀釋涂布法

制備菌懸液，到合適濃度，平板，獲得

操作步驟：

_________稀釋：

(1)將分別盛有9ml水的6支試管滅菌，并按照101-106的順序編號。

(2)用移液管吸取1ml培養(yǎng)的菌液，注入第二支試管中。用手指輕壓移液管上的橡皮

頭，吹吸三次，使菌液與水充分混勻。

(3)從101倍稀釋的試管中吸取1ml稀釋液，注入102倍稀釋的試管中，重復(fù)第2步

的操作。依此類推，直到完成最后一支試管的稀釋。

注意：移液管需要經(jīng)過滅菌。操作時，試管口和移液管應(yīng)在離火焰l-2cm處。

涂布:

（1）將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。

（2）取少量菌液（步超過0.1ml）,滴加到培養(yǎng)基的表面.

（3）將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，將酒精燃盡后，冷卻8-10s。

（4）用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面，涂布時可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使涂布均勻。

特別說明：平板劃線操作和稀釋涂布操作的注意事項

在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)，在劃線操作結(jié)束時，仍需要灼燒接

種環(huán)。

在灼燒接種環(huán)之后,要等其冷卻后再進(jìn)行劃線，以免接種時接種環(huán)溫度太高,殺死菌種。

在做第二次以及其后的劃線操作時，要從上一次劃線的末端開始劃線。

四、微生物的計數(shù)方法

1、直接計數(shù)法：常用的是。該方法所需設(shè)備簡單（用到的工具

有和）,可迅速獲得結(jié)果，而且在計數(shù)同時能觀察所研究微

生物的形態(tài)特征。但不能,統(tǒng)計結(jié)果比實際活菌數(shù)，且難以

計數(shù)微小的細(xì)菌。

^破片下方格的位置

玻片、I計數(shù)板

(a)細(xì)菌計數(shù)器面積為Imn?,劃分為25個

大方格，每個大方格又分演義個小方

格，計數(shù)區(qū)的深度為

O.OZr^n(c)計數(shù)時使用油鏡,數(shù)5個大方格的菌數(shù)

計算每個大方格的平均菌數(shù)。

蓋玻片

⑷每個大洋格的體積是1/1250000ml

(l/25mm2X0.02mm),用每個大方格

'、計數(shù)板的平均菌數(shù)XI250000,即為每亳升菌

液含菌數(shù)。

(b)在記數(shù)區(qū)滴加菌液，蓋上特制蓋玻

片,利用毛細(xì)作用讓菌液充滿計數(shù)區(qū)。

2、間接計數(shù)法：常用的是。應(yīng)用該種方法可以推算出

。選擇在的平板進(jìn)行計數(shù)。統(tǒng)計的菌落數(shù)比實際

活菌數(shù)。原因：______________________________________________________

注意事項：

為保證計數(shù)的準(zhǔn)確，要設(shè)置空白對照（未接種或者用無菌水涂布的空白培養(yǎng)基，37℃_

培養(yǎng)12-24小時，觀察有無菌落出現(xiàn)）

重復(fù)：至少涂布一個平板，若重復(fù)組結(jié)果不一致（某平板菌落數(shù)和其他有明顯差異），

意味著操作有誤，需要重新實驗。

德后檢測

1.（2011年石景山高三期末36）關(guān)于菌落的敘述，不正確的是

A.一個菌落往往是一個細(xì)胞在固體培養(yǎng)基上克隆的結(jié)果

B.菌落的特征可作為鑒定菌種的重要依據(jù)

C.只有在人工配制的固體培養(yǎng)基表面才能形成菌落

D.將單菌落接種至固體斜面培養(yǎng)基上，可進(jìn)一步純化菌種

2.（2011年順義高三期末28）下列關(guān)于微生物培養(yǎng)和應(yīng)用知識的敘述，正確的是

A.實驗室培養(yǎng)硝化細(xì)菌時，必須用葡萄糖作為碳源

B.培養(yǎng)基中，只有有機(jī)碳源和氮源可以提供能量

C.自養(yǎng)、異養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基的主要區(qū)別是碳源

D.培養(yǎng)分解尿素的細(xì)菌前，需對培養(yǎng)基進(jìn)行消毒

3.（2011年石景山高三期末35）下列有關(guān)平板劃線接種法的操作不正確的是

A.將接種環(huán)放在火焰上灼燒B.將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)液

C.蘸取菌液和劃線要在火焰旁進(jìn)行

D.劃線時要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)的劃線相連

4.（2011年東城高三期末28）下列關(guān)于微生物分離和培養(yǎng)的有關(guān)敘述，不.硬的是

A.分離土壤中不同的微生物，要采用不同的稀釋度

B.測定土壤樣品中的活菌數(shù)目，常用顯微鏡直接計數(shù)法

C.提純和分離嚴(yán)格厭氧型微生物，一般不用稀釋涂布平板法

D.分離能分解尿素的細(xì)菌，要以尿素作為培養(yǎng)基中唯一氮源

5.（2012年東城區(qū)期末）欲從土壤中分離出能分解尿素的細(xì)菌，下列實驗操作中不巧頌的是

A.將土壤用無菌水進(jìn)行一系列的梯度稀釋

B.同一濃度的土壤稀釋液應(yīng)至少涂布三個平板

C.可將未接種的培養(yǎng)基在相同條件下培養(yǎng)作為對照

D.用加入剛果紅指示劑的培養(yǎng)基可篩選出分解尿素的細(xì)菌

德后隹業(yè)

1.（13石景山一模5）現(xiàn)有一種能生產(chǎn)甲硫氨酸的M菌，但產(chǎn)量很低，而且當(dāng)培養(yǎng)液中甲

硫氨酸的含量達(dá)到最大值后，繼續(xù)培養(yǎng)，甲硫氨酸含量會迅速下降。這是由于甲硫氨酸

的積累反過來抑制了其合成。用紫外線照射可選育得到能抗甲硫氨酸抑制的高產(chǎn)新菌株。

下列有關(guān)選育過程的表述，不正確的是

A.這種新菌株的選育方法屬于用物理因素誘導(dǎo)的誘變育種

B.M菌培養(yǎng)液中甲硫氨酸的含量達(dá)到最大值后又不斷減少是反饋調(diào)節(jié)的結(jié)果

C.用紫外線照射M菌的同時，還應(yīng)在其培養(yǎng)基中添加甲硫氨酸

D.該選育過程中采用的培養(yǎng)基是液體培養(yǎng)基

2.（13通州一模5）下列實驗環(huán)節(jié)中，不需要經(jīng)過“篩選”的是

A.用射線照射青霉菌，培育出青霉素高產(chǎn)菌株

B.用含有伊紅-美藍(lán)的培養(yǎng)基檢測水樣中大腸桿菌數(shù)量

C.使用土壤浸出液培養(yǎng)分解纖維素的細(xì)菌

D.用小鼠的骨髓瘤細(xì)胞和經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞制備單克隆抗體

3.（13通州二模1）下列關(guān)于微生物培養(yǎng)和利用的敘述，正確的是

A.以尿素為唯一氮源且含酚紅的培養(yǎng)基可選擇和鑒別尿素分解菌

B.接種前需對培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、操作者雙手等進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌處理

C.平板劃線法和稀釋涂布平板法都適于微生物的純化培養(yǎng)和計數(shù)

D.腌制泡菜的過程中亞硝酸鹽含量變化是先減少后增加

4.（2012西城1模4）組氨酸缺陷型沙門氏菌是由野生菌種突變形成的，自身不能合成組

氨酸。將其接種在缺乏組氨酸的平板培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，有極少量菌落形成。2-氨基笏

是一種致突變劑，將沾有2-氨基笏的濾紙片放到上述平板培養(yǎng)基中，再接種組氨酸缺

陷型沙門氏菌進(jìn)行培養(yǎng)，會有較多菌落出現(xiàn)。以下敘述不正確的是：

A.在接種前，2—氨基笏和濾紙片須進(jìn)行滅菌處理

B.若用劃線法接種可以根據(jù)菌落數(shù)計算活菌數(shù)量

C.基因突變的可逆性與是否存在致突變劑無關(guān)

D.此方法可以用于檢測環(huán)境中的化學(xué)致突變劑

5.（2012東城1模-示范校3）下圖表示從土壤中分離能降解酚類化合物對羥基苯甲酸的微

生物的實驗過程。下列與該實驗相關(guān)內(nèi)容的敘述中不正確的是:

將土堞樣品接種

到含有對舲基笨

A.實驗中所用的培養(yǎng)基①②③④均屬于選擇培養(yǎng)基

B.圖中I、II過程實現(xiàn)了對目標(biāo)微生物的稀釋

C.統(tǒng)計⑤處培養(yǎng)基中的菌落數(shù)并不一定代表接種到④上的活菌數(shù)

D.在⑤處培養(yǎng)基上形成菌落的微生物同化作用類型為異養(yǎng)型

6.（14東城一模）下列關(guān)于高中生物學(xué)實驗的敘述，正確的是

A.在制備果酒和果醋的實驗過程中都要持續(xù)通入氧氣

B.分離土壤中不同種類的微生物需采用相同的稀釋度

C.將DNA粗提取后用二苯胺進(jìn)行鑒定時需要進(jìn)行水浴加熱

D.選擇過氧化氫酶作為探究溫度對酶活性影響實驗的理想材科

7.（14海淀一模）下列生物學(xué)實驗操作，能夠順利達(dá)到實驗?zāi)康牡氖?/p>

A.在固體培養(yǎng)基上涂布稀釋的大腸桿菌培養(yǎng)液獲得單菌落

B.在接種酵母菌的新鮮葡萄汁中通入無菌空氣制作果酒

C.土壤浸出液接種于牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基上篩選分解尿素的細(xì)菌

D.將切下的胡蘿卜外植體直接接種在培養(yǎng)基上獲得愈傷組織

8.（14昌平二模）有關(guān)生命科學(xué)技術(shù)和方法的敘述，錯誤的是

A.PCR技術(shù)可用于染色體的擴(kuò)增

B.植物組培技術(shù)可用于單倍體育種

C.樣方法可用于調(diào)查動物的種群密度

D.遺傳系譜分析可用于研究紅綠色盲的遺傳方式

9.（2015東城期末28）家庭制作果酒、果醋和腐乳三種傳統(tǒng)發(fā)酵食品的共同點(diǎn)是

A.菌種均可來自于自然環(huán)境B.均需在相同溫度下進(jìn)行發(fā)酵

C.保證在無氧環(huán)境下發(fā)酵D.發(fā)酵過程中微生物的種群密度不斷增加

10.（2012朝陽2模2）以下有關(guān)生物技術(shù)實踐的敘述中，不正確的是：

A.用稀釋涂布平板法測定某土壤浸出液中活菌數(shù)目時，測定值可能比實際值小

B.制備果酒過程中，每隔一段時間擰松瓶蓋，目的是向瓶中通氣保證發(fā)酵順利

C.測定發(fā)酵過程中樣品的亞硝酸鹽含量時，需要與標(biāo)準(zhǔn)顯色液進(jìn)行比色

D.以尿素為唯一氮源并加入酚紅指示劑的培養(yǎng)基可分離并鑒定土壤中分解尿素的細(xì)菌

11.（2012西城2模1）下列關(guān)于科學(xué)研究方法與實驗?zāi)康臄⑹稣_的是：

A.用高倍光學(xué)顯微鏡可觀察細(xì)胞膜磷脂雙分子層的結(jié)構(gòu)

B.用紙層析法可以提取和分離植物細(xì)胞中的各種光合色素

C.用放射性同位素標(biāo)記法可以追蹤細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)代謝途徑

D.用含有酚紅的LB培養(yǎng)基可分離出能分解尿素的微生物

12.（2012年西城區(qū)期末）（10分）35-40%的甲醛水溶液（福爾馬林）可作為防腐劑，其防

腐的原理是使蛋白質(zhì)變性。自然界中有能分解甲醛的細(xì)菌和真菌。下圖為分離和純化分解甲

醛細(xì)菌的實驗過程。請分析回答:

挑取不同前取樣測定甲

10mL接種落分別接種酸濃度

活性一

污泥1

①制取菌②LB培養(yǎng)基，③無機(jī)液體培國學(xué)呷￡培

懸液振海培養(yǎng)養(yǎng)基+甲藤，雪懿2M⑤無機(jī)液體培養(yǎng)基+

振落培養(yǎng)恒溫培養(yǎng)甲醒，振蕩培養(yǎng)

（1）②過程的目的是，③過程培養(yǎng)出的是O

（2）上述實驗中，不需要進(jìn)行滅菌處理的是,培養(yǎng)基滅菌的常用方法

為O

（3）由③一④的接種可選用—法，通過培養(yǎng)能獲得。經(jīng)過⑤過程后，取樣測定甲

醛濃度，選出，再分離、培養(yǎng)菌株。此菌種異化作用的類型是一。

（4）為研究甲醛初始濃度對菌株降解甲醛能力的影響，進(jìn)行了相應(yīng)實驗并得到如下結(jié)果。

由圖可知，當(dāng)甲醛的初始濃度小于1200mg/L時，菌株；當(dāng)甲醛的初始濃度增

高至1600mg/L時，48小時后菌株對甲醛的降解能力很弱，甚至失去降解能力，其原因可

能是。

13.（2011年豐臺高三期末60）纖維素酶在洗滌劑、棉織品水洗拋光整理和制漿造紙等行業(yè)

上有巨大的應(yīng)用價值?？蒲腥藛T做了如下實驗，請分析回答：

、\\\\

◎三?自力

二

U

⑤—

⑥⑦⑧⑨

圖

￡

更

霍

12345菌株

圖2

Q）圖1中的①中接種的是造紙廠附近土壤，②培養(yǎng)基中的碳源應(yīng)為o⑤?

⑨中分別培養(yǎng)的是通過染色鑒定法選取透明圈較大的5個菌株。

（2）將這5個菌株進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)生的酶，加入到纖維素溶液中，測定,

由圖2可知3號菌株酶活力最高。

（3）對破壁前后的酶活力進(jìn)行了比較，測得未破壁的酶活力為3540U/ml,已破壁的前活力

為94U/ml。由此可知，該菌所產(chǎn)纖維素酶為酶。

（4）要測定該酶的熱穩(wěn)定性，應(yīng)采取的實驗方案是。

14.（2014海淀期中）為獲得果膠酶高產(chǎn)菌株，科研人員進(jìn)行了下列分離、篩選和鑒定工作。

（1）為分離果膠酶產(chǎn)生菌，科研人員配制了下表所示成分的培養(yǎng)基，該表空白處的兩種成

分是。制備的培養(yǎng)基常用法進(jìn)行滅菌。

K2HPO4MgSO4NaNO3FeSO4瓊脂

0.1g0.5g3go.oig2g15g加至IL

（2）科研人員將采集的果園土壤放入無菌水中，震蕩混勻，制成懸液。為得到分布較均勻

的單菌落，還需要將懸液進(jìn)行,用法接種于固體培養(yǎng)基上。接種后的

培養(yǎng)基狀態(tài)放入培養(yǎng)箱。

（3）選擇單菌落數(shù)目適宜的培養(yǎng)基，加入一定濃度的剛果紅溶液（果膠與剛果紅結(jié)合后顯

紅色），一段時間后洗去培養(yǎng)基表面的剛果紅溶液，觀察并比較菌落和__________圈直徑的

比值，篩選果膠酶高產(chǎn)菌株。

（4）將獲得的菌株進(jìn)行液體培養(yǎng)后，從培養(yǎng)基的（填“上清液''或"沉淀物”）獲

得粗提的果膠酶。將一定量的粗提果膠酶與適量果膠溶液混合，一段時間后測定吸光值來測

定酶活性。進(jìn)行吸光值測定時，需將與等量果膠溶液混合，作為實驗的對照。

第二十四講基因工程

爆前檢測

1.（2014江蘇）下列關(guān)于基因工程技術(shù)的敘述，正確的是（）

A.切割質(zhì)粒的限制性核酸內(nèi)切醐均特異性地識別6個核甘酸序列

B.PCR反應(yīng)中溫度的周期性改變是為了DNA聚合酶催化不同的反應(yīng)

C.載體質(zhì)粒通常采用抗生素合成基因作為篩選標(biāo)記基因

D.抗蟲基因即使成功地插入到植物細(xì)胞染色體上也未必能正常表達(dá)

2.（2014重慶）下圖是利用基因工程培育抗蟲植物的示意圖。以下相關(guān)敘述，正確的是（）

A.②的構(gòu)建需要限制性核酸內(nèi)切酶和DN