全人源抗肝癌基因工程單鏈抗體與阿霉素偶聯(lián)物的制備及其抗腫瘤作用研究的開題報(bào)告

全人源抗肝癌基因工程單鏈抗體與阿霉素偶聯(lián)物的制備及其抗腫瘤作用研究的開題報(bào)告一、研究背景及意義肝癌是一種常見的惡性腫瘤，世界范圍內(nèi)僅次于肺癌成為死亡率最高的腫瘤類型之一?，F(xiàn)階段的治療方式主要包括手術(shù)切除、肝臟移植、化療、放療等方法，但效果并不理想。因此，尋找新的肝癌治療方法及藥物是當(dāng)前亟待解決的問題?；谌嗽椿瘑慰寺】贵w技術(shù)的免疫治療，是近年來受到廣泛關(guān)注的腫瘤治療方法。該技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)在于可以專一識(shí)別腫瘤細(xì)胞表面的特異性抗原，針對(duì)性強(qiáng)且潛在副作用小。尤其是單鏈抗體（scFv）技術(shù)，可通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)將其引入人體使其發(fā)揮治療作用。本研究計(jì)劃通過基因工程技術(shù)制備全人源抗肝癌單鏈抗體，進(jìn)一步將其與阿霉素（doxorubicin）偶聯(lián)制備抗腫瘤復(fù)合物，并考察其對(duì)肝癌細(xì)胞的抑制效果和生物性質(zhì)，為臨床肝癌治療提供新的治療方案。二、研究?jī)?nèi)容和方法2.1研究?jī)?nèi)容（1）構(gòu)建全人源抗肝癌scFv基因，并通過重組工程方法表達(dá)獲得。（2）利用交叉鏈接試劑丁二酰亞胺（DMP）將scFv與阿霉素偶聯(lián)。（3）對(duì)比原始scFv和偶聯(lián)復(fù)合物的生物活性，包括親和力、特異性識(shí)別、抑制效果等屬性。（4）檢測(cè)偶聯(lián)復(fù)合物對(duì)肝癌細(xì)胞的增殖、遷移、凋亡等生物效果，并探究其治療機(jī)制。2.2研究方法（1）基因克隆：PCR擴(kuò)增全人源抗肝癌scFv基因，克隆到表達(dá)載體，構(gòu)建重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)。（2）表達(dá)純化：轉(zhuǎn)染攜帶scFv表達(dá)載體的細(xì)胞，收集培養(yǎng)上清液進(jìn)行純化。（3）流式細(xì)胞術(shù)：流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)偶聯(lián)復(fù)合物對(duì)肝癌細(xì)胞的特異性識(shí)別和親和力。（4）MTT實(shí)驗(yàn)：利用MTT法檢測(cè)偶聯(lián)復(fù)合物對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的抑制效果。（5）細(xì)胞轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)：利用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)偶聯(lián)復(fù)合物對(duì)肝癌細(xì)胞遷移的影響。（6）細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)：利用AnnexinV-FITC/PI染色檢測(cè)偶聯(lián)復(fù)合物對(duì)肝癌細(xì)胞凋亡的影響。三、預(yù)期結(jié)果本研究計(jì)劃將通過構(gòu)建全人源抗肝癌scFv基因，將其與阿霉素偶聯(lián)制備抗腫瘤復(fù)合物，并探究其治療肝癌效果。預(yù)期結(jié)果如下：（1）成功構(gòu)建全人源抗肝癌scFv基因，表達(dá)獲得目標(biāo)重組蛋白。（2）成功利用交叉鏈接試劑DMP將scFv與阿霉素偶聯(lián)，制備抗肝癌復(fù)合物。（3）通過比較偶聯(lián)復(fù)合物和原始scFv的生物學(xué)性質(zhì)，證明其具有優(yōu)良的抗肝癌活性。（4）在對(duì)肝癌細(xì)胞進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)時(shí)能夠體現(xiàn)出制備的偶聯(lián)復(fù)合物對(duì)肝癌的治療效果。四、研究意義本研究擬通過基因工程技術(shù)，制備全人源抗肝癌scFv，并與阿霉素偶聯(lián)制備抗腫瘤復(fù)合物，為肝癌治療提供新的方式。該研究意義在于：（1）尋找肝癌臨床治療的新途徑及新的藥物。（2）探究全人源抗肝癌scFv與阿霉素偶聯(lián)制備抗腫