《DB32T 3762.15-2021新型冠狀病毒檢測技術(shù)規(guī)范 第15部分血清血漿IgM和IgG抗體化學(xué)發(fā)光法檢測程序》

ICS13.100

C50

DB32

江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB32/T3762.15—2021

新型冠狀病毒檢測技術(shù)規(guī)范

第15部分：血清/血漿IgM和IgG抗體磁

微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測程序

TechnicalspecificationsforSARS-CoV-2detection

Part15:Serum/PlasmaIgMandIgGantibodiestestprocedurebyMCLIA

2021-12-09發(fā)布2022-01-09實(shí)施

江蘇省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB32/T3762.15—2021

I

DB32/T3762.15—2021

新型冠狀病毒檢測技術(shù)規(guī)范

第15部分：血清/血漿IgM和IgG抗體磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測程序

1范圍

本文件規(guī)定了新型冠狀病毒血清/血漿IgM和IgG抗體磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法的檢測程序。

本文件適用于新型冠狀病毒確診病例、無癥狀感染者、疑似病例、密切接觸者以及一般人群血清/

血漿樣本中新冠特異性IgM和IgG抗體磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測的實(shí)驗(yàn)操作。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB19489實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求

WS233微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則

DB32/T3762.1新型冠狀病毒檢測技術(shù)規(guī)范第1部分：生物樣本采集、運(yùn)輸和保存

新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室生物安全指南（第二版）

可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定原中華人民共和國衛(wèi)生部

3術(shù)語和定義

本文件沒有界定的術(shù)語和定義。

4縮略語

下列縮略語適用于本文件。

IgG：免疫球蛋白G（ImmunoglobulinG）

IgM：免疫球蛋白M（ImmunoglobulinM）

MCLIA：磁微粒化學(xué)發(fā)光法（MagneticChemiluminescenceEnzymeImmunoassay）

RLU：相對發(fā)光單位（RelativeLightUnit）

5原理

磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法綜合了磁微粒載體技術(shù)和化學(xué)發(fā)光免疫檢測技術(shù)。人血清/血漿中待測的新型冠

狀病毒IgM、IgG抗體與熒光素標(biāo)記的重組抗原結(jié)合，隨后加入包被著抗熒光素抗體的磁微粒，通過

抗熒光素抗體與熒光素的特異性結(jié)合使抗原抗體復(fù)合物連接在磁微粒上。在外加磁場中直接沉淀，去上

清后清洗沉淀的復(fù)合物，加入酶標(biāo)抗體，形成磁微粒－抗原－抗體－酶標(biāo)抗體夾心免疫復(fù)合物。再次清

洗后，加入酶促化學(xué)發(fā)光底物。底物在堿性磷酸酶作用下被催化裂解，形成不穩(wěn)定的激發(fā)態(tài)中間體，當(dāng)

激發(fā)態(tài)中間體回到基態(tài)時便發(fā)出光子，形成發(fā)光反應(yīng)，通過光量子閱讀系統(tǒng)記錄光子能量，并通過計算

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DB32/T3762.15—2021

機(jī)處理系統(tǒng)將光能量強(qiáng)度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上RLU轉(zhuǎn)換為待測抗體的濃度，樣本的RLU與其中的新型冠狀

病毒IgM、IgG抗體濃度呈正相關(guān)，從而檢測人血清/血漿中的新型冠狀病毒IgM、IgG抗體。

6實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)要求

6.1實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)及級別

檢測工作應(yīng)在BSL-2級實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。生物安全應(yīng)遵照GB19489和WS233對生物安全2級

（BSL-2）實(shí)驗(yàn)室的生物安全要求。

6.2操作人員資質(zhì)及防護(hù)

實(shí)驗(yàn)中的個人防護(hù)遵照GB19489和新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室生物安全指南（第二版）。

6.3廢棄物的處理

實(shí)驗(yàn)室使用過的實(shí)驗(yàn)用品應(yīng)遵照GB19489對廢棄物的處理要求進(jìn)行無害化處理。

7準(zhǔn)備

7.1實(shí)驗(yàn)室

生物安全防護(hù)二級（BSL-2）或以上等級實(shí)驗(yàn)室和相應(yīng)的配套設(shè)施。

7.2儀器設(shè)備

常用儀器設(shè)備如下：

——生物安全柜

——化學(xué)發(fā)光免疫分析儀

——離心機(jī)

——移液器

——高壓鍋

——生物安全運(yùn)輸箱

——水浴鍋

7.3試劑

常用試劑如下：

——磁性顆粒-抗熒光素抗體

——熒光素標(biāo)記新型冠狀病毒重組抗原

——堿性磷酸酶標(biāo)記鼠抗人IgM/IgG單克隆抗體

——清洗液

——底物液

——樣本稀釋液

8樣本采集、要求、保存和運(yùn)輸

8.1樣本采集

2

DB32/T3762.15—2021

血清/血漿樣本按照DB32/T3762.1中5.3的要求采集。

8.2樣本要求

出現(xiàn)嚴(yán)重黃疸、溶血、脂血和微生物污染的樣本，均不可進(jìn)行檢測。

8.3樣本保存

血清/血漿樣本可于2℃～8℃條件下保存3d、-20℃及以下條件下可長期保存，并避免反復(fù)凍

融。用于存放樣本的冰箱應(yīng)當(dāng)專用。

8.4樣本運(yùn)輸

按照可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定、DB32/T3762.1中6.1、

6.2的要求。

9檢測方法

9.1血清/血漿IgM抗體磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法

9.1.1試劑制備

將新型冠狀病毒陰陽性對照和底物液在室溫18℃~25℃下平衡30min。用純水將清洗液稀釋到

工作濃度。若清洗液有結(jié)晶，可將清洗液置于室溫或37℃待結(jié)晶溶解后再進(jìn)行稀釋。

9.1.2磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法反應(yīng)體系和反應(yīng)程序

取1mL樣本稀釋液，加入20μL樣本（至少15μL），用漩渦混勻儀混勻5s，靜止15min后

開始實(shí)驗(yàn)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，如質(zhì)量控制，設(shè)置陰性、陽性對照各2管及處理后樣本若干。分別加入50

μL磁性顆粒-抗熒光素抗體、75μL處理后樣本或陰性對照/陽性對照、50μL熒光素標(biāo)記新型冠狀病

毒重組抗原、75μL堿性磷酸酶標(biāo)記鼠抗人IgM單克隆抗體。反應(yīng)時間35min；完成第二次清洗后每

管加入底物液200μL，避光檢測，反應(yīng)5s讀數(shù)。磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法反應(yīng)體系的總體積可根據(jù)不同廠

家、型號的化學(xué)發(fā)光儀做相應(yīng)調(diào)整。

9.1.3結(jié)果分析

根據(jù)RLU自動計算Cutoff值，樣本檢測的結(jié)果以S/CO值進(jìn)行判定：

a)陰性（－）：S/CO＜1.000，待檢樣本未檢出新型冠狀病毒IgM抗體；

b)陽性（＋）：S/CO≥1.000，待檢樣本檢出新型冠狀病毒IgM抗體。

9.1.4質(zhì)量控制

根據(jù)不同廠家、型號的化學(xué)發(fā)光儀和配套試劑的要求，陽性、陰性對照S/CO應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)。

以上要求不符合，應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)，重新進(jìn)行的試驗(yàn)應(yīng)從試劑制備開始。

9.1.5結(jié)果表述

當(dāng)質(zhì)量控制符合要求：

a)S/CO＜1.000，結(jié)果表述為“待檢樣本未檢出新型冠狀病毒IgM抗體”。

b)S/CO≥1.000，結(jié)果表述為“待檢樣本檢出新型冠狀病毒IgM抗體”。

3

DB32/T3762.15—2021

9.2血清/血漿IgG抗體磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法

9.2.1試劑制備

將新型冠狀病毒陰陽性對照和底物液在室溫18℃~25℃下平衡30min。用純水將清洗液稀釋到

工作濃度。若清洗液有結(jié)晶，可將清洗液置于室溫或37℃待結(jié)晶溶解后再進(jìn)行稀釋。

9.2.2磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法反應(yīng)體系和反應(yīng)程序

取1ml樣本稀釋液，加入20μL樣本（至少15μL），用漩渦混勻儀混勻5s，靜止15min后

開始實(shí)驗(yàn)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，在質(zhì)量控制時，設(shè)置陰性、陽性對照各2管及處理后樣本若干。分別加入

50μL磁性顆粒-抗熒光素抗體、75μL處理后樣本或陰性對照/陽性對照、50μL熒光素標(biāo)記新型冠狀

病毒重組抗原、75μL堿性磷酸酶標(biāo)記鼠抗人IgG單克隆抗體。反應(yīng)時間35min；完成第二次清洗后

每管加入底物液200μL，避光檢測，反應(yīng)5s讀數(shù)。磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法反應(yīng)體系的總體積可根據(jù)不同

廠家、型號的化學(xué)發(fā)光儀做相應(yīng)調(diào)整。

9.2.3結(jié)果判讀

根據(jù)RLU自動計算Cutoff值，樣本檢測的結(jié)果以S/CO值進(jìn)行判定

a)陰性（－）：S/CO＜1.000，待檢樣本未檢出新型冠狀病毒IgG抗體；

b)陽性（＋）：S/CO≥1.000，待檢樣本檢出新型冠狀病毒IgG抗體。

9.2.4質(zhì)量控制

根據(jù)不同廠家、型號的化學(xué)發(fā)光儀和配套試劑的要求，陽性、陰性對照S/CO應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)。

以上要求不符合，應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)，重新進(jìn)行的試驗(yàn)應(yīng)從試劑制備開始。

9.2.5結(jié)果表述

當(dāng)質(zhì)量控制符合要求時，