牛瘟病毒的診斷 - 副本

摘要：牛瘟是一種毀滅性的牲畜疾病，造成全大陸的饑荒和貧困。聯(lián)合國(guó)農(nóng)業(yè)組織和世界動(dòng)物衛(wèi)生組織宣布全球消滅牛瘟；這是我們時(shí)代要消滅的第二個(gè)疾病。常規(guī)控制措施，主要是大規(guī)模接種疫苗和動(dòng)物檢疫程序，導(dǎo)致牛瘟發(fā)病率大幅下降。然而，在過去幾十年中，以克服診斷和監(jiān)測(cè)方面的挑戰(zhàn)、病毒致病性的變化、野生動(dòng)物種群中疾病的傳播，以及為經(jīng)常處于不穩(wěn)定狀態(tài)的偏遠(yuǎn)和游牧社區(qū)提供服務(wù)。牛瘟病毒是最早記錄的家畜病原，據(jù)記載很可能早在4世紀(jì)起源于亞洲。在18～19世紀(jì)，歐洲流行毀滅性的牛瘟。在19世紀(jì)末期（1887～1897年），撒哈拉沙漠以南的非洲發(fā)生了牛瘟大流行，造成大量牛群和特定野生動(dòng)物的死亡。1920年牛瘟在歐洲暴發(fā)促成了OIE（OfficeInternationaldesepizootied）的成立?，F(xiàn)在OIE是動(dòng)物傳染性疾病的機(jī)構(gòu)，負(fù)責(zé)全球動(dòng)物疾病的監(jiān)管，促進(jìn)以科學(xué)為基礎(chǔ)的國(guó)際貿(mào)易。1992年Drsgordonscott和AlainProvost這樣描述牛瘟，“最可怕的牛瘟是一個(gè)臭名昭著的傳染病，它改變了歷史的進(jìn)程。從他的家鄉(xiāng)里海盆地，一個(gè)世紀(jì)接一個(gè)世紀(jì)，牛瘟席卷了整個(gè)歐洲和亞洲，由此造成的災(zāi)難、死亡和毀滅比羅馬帝國(guó)衰落，查理曼大帝征服歐洲，法國(guó)大革命，俄羅斯的貧困，非洲殖民地等更嚴(yán)重?！边@很好地總結(jié)了牛瘟的歷史影響。

1902年，牛瘟病毒是第一個(gè)發(fā)現(xiàn)的濾過性病毒。進(jìn)化分析表明牛瘟病毒是原型麻疹病毒，推測(cè)麻疹病毒是早在5000～10000

年前引起犬瘟熱和人類麻疹的病毒。截至2008年，才樂觀地認(rèn)為在世界范圍內(nèi)從家畜中消滅了牛瘟。這是全球努力協(xié)調(diào)合作的結(jié)果，涉及積極監(jiān)測(cè)、動(dòng)物撲殺、限制運(yùn)輸和強(qiáng)制疫苗接種計(jì)劃。1臨床特征和流行病學(xué)牛瘟是牛和其他偶蹄動(dòng)物高度傳染性疾病，宿主范圍包括家牛水牛、牦牛、綿羊和山羊。在亞洲，家養(yǎng)豬也能表現(xiàn)臨床癥狀，而且被認(rèn)為是牛瘟病毒的重要儲(chǔ)存宿主。在野生動(dòng)物中，牛羚、非洲大羚羊、疣豬、大羚羊、條紋羚、長(zhǎng)頸鹿、鹿、不同種類的羚羊、河馬和非洲水牛都易感。盡管在臨床癥狀上感染譜很廣，但表現(xiàn)最嚴(yán)重的是非洲水牛、牛羚和長(zhǎng)頸鹿，一些物種如羚羊和河馬總是表現(xiàn)溫和或亞臨床癥狀。很可能所有偶蹄動(dòng)物易感，但不是所有易感動(dòng)物都表現(xiàn)明顯的臨床癥狀。其他物種，包括嚙齒動(dòng)物，兔子和雪貂均為易感動(dòng)物，但可能不會(huì)影響自然感染的流行病學(xué)。散在暴發(fā)的臨床癥狀與感染病毒的毒力和宿主動(dòng)物的易感性有關(guān)。

在牛和其他易感野生或家養(yǎng)反芻動(dòng)物，牛瘟的典型臨床表現(xiàn)為急性發(fā)熱性疾病，易感宿主的發(fā)病率達(dá)100%，死亡率可能達(dá)到50%（一般25%～90%）。一些非洲固有品種牛對(duì)牛瘟高度易感，而其他品種的牛死亡率較低（低于30%）。在3～5d的潛伏感染期后是疾病的前驅(qū)期，伴隨體溫急劇升高、產(chǎn)奶量下降、呼吸困難和停止采食。然后是結(jié)膜、口腔和鼻黏膜充血，并有大量的漿液和黏液性眼鼻分泌物。急性期典型表現(xiàn)為口腔黏膜上皮形成假膜、腐爛和潰瘍，炎癥部位壞死的上皮細(xì)胞出現(xiàn)干酪樣壞死灶，由于吞咽困難，動(dòng)物通常會(huì)出現(xiàn)流涎。其次是嚴(yán)重的出血性腹瀉及其引起的虛脫。最后是體溫下降的過程，在此期間，感染動(dòng)物可能死于脫水和休克。幼年動(dòng)物易于出現(xiàn)嚴(yán)重臨床癥狀。易感動(dòng)物感染特定的毒株，某些宿主如黑斑羚、河馬的隱性感染不出現(xiàn)明顯的臨床癥狀。

綿羊和山羊感染后的癥狀也不是很明顯。溫和型感染的臨床癥狀較少，一般為黏膜損傷，很少或不出現(xiàn)腹瀉，并且死亡率很低。

牛瘟病毒一旦在種群中定植后，引起的癥狀更加溫和。牛瘟病毒地方性致弱可能與弱毒株的傳播能力更強(qiáng)和易感動(dòng)物的免疫力有關(guān)。由于幼畜母源抗體的減弱，牛瘟在疫區(qū)會(huì)持續(xù)存在。牛瘟病毒也可通過亞臨床感染的野生動(dòng)物作為病毒宿主感染牛而持續(xù)存在。病毒在地方性動(dòng)物疾病疫源地感染易感動(dòng)物后毒力會(huì)迅速增強(qiáng)。牛瘟病毒可通過感染動(dòng)物的分泌物傳播，在急性發(fā)熱期會(huì)大量排毒。病毒在環(huán)境中易失活因此牛瘟在疫源地主要通過易感動(dòng)物與感染動(dòng)物的直接接觸傳播。病毒也可通過空氣和污染物傳播。

病毒可在病死尸體中存活數(shù)天。由于感染牛在臨床癥狀現(xiàn)前的潛伏感染期內(nèi)大量排毒，因此急性感染但未出現(xiàn)臨床癥狀的動(dòng)物可將病毒引入無(wú)病原地區(qū)。通過進(jìn)口亞臨床感染的綿羊、山羊和其他反芻動(dòng)物和野生動(dòng)物也可將病毒引入未感染地區(qū)。亞臨床感染的各品種的豬可作為牛的傳染源，但只有亞洲品種的豬和疣豬感染牛瘟病毒后會(huì)出現(xiàn)臨床癥狀。2診斷牛瘟經(jīng)常與牛病毒性腹瀉、牛惡性卡他熱以及早期的牛傳染性鼻氣管炎、口蹄疫等引起的黏膜充血、腐爛或潰瘍相混淆。特異性PCR檢測(cè)可以解決這些相似疾病的診斷問題。RT-PCR可迅速將牛瘟病毒與其他反芻獸病毒區(qū)別開。多種不同的細(xì)胞系都可用于分離牛瘟病毒，一般是用原代腎細(xì)胞培養(yǎng)。病毒中和試驗(yàn)、ELISA試驗(yàn)可用于評(píng)價(jià)某一特定地區(qū)牛瘟病毒的流行情況，只有未免疫的動(dòng)物對(duì)于評(píng)價(jià)牛瘟根除計(jì)劃是否成功才具有意義。3免疫與防控感染牛瘟病毒后存活的牛對(duì)牛瘟病毒具有終生免疫力。臨床癥狀出現(xiàn)后6～7d產(chǎn)生中和抗體，感染后3～4周抗體滴度達(dá)到最高。隨著分子分型的出現(xiàn)，已確定3種不同基因型的牛瘟病毒，兩種來源于非洲，一種來源于亞洲。所有毒株血清型都相同，因此，可以使用單一毒株的疫苗。目前，3型局限于亞洲，2型在東非和西非，1型僅出現(xiàn)在埃塞俄比亞和蘇丹。自2007年4月起，包括亞洲和非洲等國(guó)家在內(nèi)的所有國(guó)家都沒有向OE報(bào)告過牛瘟感染疫情?？夏醽喪欠侵拮詈笠粋€(gè)宣布成為非疫源地的非洲國(guó)家。這份報(bào)告的依據(jù)是該地區(qū)在過去的兩年沒有出現(xiàn)臨床疾病，并且活疫苗已經(jīng)停止使用。為確保野生儲(chǔ)主不感染家養(yǎng)動(dòng)物，疫病檢測(cè)必須繼續(xù)進(jìn)行。

沒有牛瘟的國(guó)家，為防止引入此病毒制定了獸醫(yī)公共衛(wèi)生法則。禁止從疫源國(guó)家進(jìn)口生肉和肉制品，動(dòng)物園在引入這些國(guó)家的動(dòng)物之前要進(jìn)行檢疫。在牛瘟流行國(guó)家與很可能引入此病毒的國(guó)家可以使用弱毒活疫苗。早期的疫苗是在兔（兔化疫苗）、雞胚（雞胚化疫苗）或山羊（山羊化疫苗）內(nèi)傳代產(chǎn)生的。20世紀(jì)60年代培養(yǎng)出了細(xì)胞培養(yǎng)弱毒疫苗（TCRV），從此在非洲廣泛使用并成功根除非洲的牛瘟。由于這種疫苗具有終生免疫保護(hù)力，并且生產(chǎn)成本低廉，因此該疫苗的應(yīng)用十分有效。事實(shí)上，細(xì)胞苗仍是防控牛瘟的最好疫苗，但它易失活，并且需要維持冷鏈運(yùn)輸，而冷鏈運(yùn)輸在一些發(fā)生過牛瘟的國(guó)家也是一個(gè)棘手的問題。由于感染的動(dòng)物數(shù)量減少為了便于血清學(xué)監(jiān)測(cè)，疫苗已停止使用。由于疫苗感染所引起的免疫反應(yīng)不能與野毒感染相區(qū)分，因此標(biāo)記疫苗的研制是十分必要的，但由于現(xiàn)有技術(shù)的存在，牛瘟似乎已被根除，因此并沒有廣泛應(yīng)用。4開始消滅牛瘟消滅牛瘟始于十八世紀(jì)動(dòng)物檢疫程序的制定。在早期根除的歷史中，很多人更關(guān)心的是通過大規(guī)模疫苗接種來抑制這種疾病，而不是根除。20世紀(jì)40年代，聯(lián)合國(guó)糧食及農(nóng)業(yè)組織（糧農(nóng)組織）在東亞實(shí)施了許多控制方案；然而，第一個(gè)協(xié)調(diào)的國(guó)際牛瘟防治方案僅在1963年至1975年在非洲實(shí)施。非洲流行病局成立于1950年，計(jì)劃在非洲消滅牛瘟。1960年在尼日利亞卡諾舉行的非洲獸醫(yī)服務(wù)負(fù)責(zé)人會(huì)議承諾在非洲統(tǒng)一組織的主持下實(shí)施一個(gè)名為“聯(lián)合項(xiàng)目”的多國(guó)項(xiàng)目，得到許多個(gè)別國(guó)家援助方案的支持，特別是美國(guó)國(guó)際開發(fā)署（美援署）、國(guó)際組織和機(jī)構(gòu)。目的是讓每個(gè)國(guó)家連續(xù)三年每年為所有不同年齡的牛接種疫苗。此后，每個(gè)國(guó)家承諾每年為所有小牛接種疫苗。

最初有22個(gè)國(guó)家參與了，其中17個(gè)國(guó)家發(fā)生了牛瘟。到1979年年底，只有一個(gè)國(guó)家，蘇丹，報(bào)道有這種疾病。許多國(guó)家既未能操作與官方疾病報(bào)告有關(guān)的監(jiān)測(cè)系統(tǒng)，也未能維持對(duì)幼崽的疫苗接種。在1975年接近于從非洲消滅牛瘟。在西非和東非野生有蹄類動(dòng)物中繼續(xù)秘密流通，最重要的是，在西非和東非的塞內(nèi)加爾河流域的廣大牧區(qū)，持續(xù)存在著感染的蓄水池。

直到1994年，一個(gè)致力于全球消滅的方案才被認(rèn)為是可行的；糧農(nóng)組織迎接了這一挑戰(zhàn)，設(shè)立了由設(shè)在羅馬的一個(gè)秘書處支助的全球凈化方案（GREP）。GREP概念的關(guān)鍵在于，與其他早期的牛瘟倡議不同，它是有時(shí)限的，并為其完成設(shè)定了2010年的最后期限。5疫苗的發(fā)展1960年牛瘟疫苗（TCRV）的研制是控制牛瘟的一個(gè)重要里程碑，推動(dòng)了整個(gè)非洲消滅牛瘟。TCRV是人類或獸醫(yī)史上最優(yōu)秀的疫苗之一。它對(duì)牛瘟病毒有保護(hù)作用，為牛提供終身免疫，從來不與任何不良反應(yīng)有關(guān)，單一的組織培養(yǎng)感染劑量具有免疫原性。這種疫苗使數(shù)以億計(jì)的依賴牲畜的人受益。疫苗的主要限制是需要嚴(yán)格的冷鏈—這是對(duì)現(xiàn)場(chǎng)疫苗接種計(jì)劃的重大障礙。

利用原代牛腎細(xì)胞的生產(chǎn)工藝是污染物的潛在來源，也是大規(guī)模生產(chǎn)的制約因素。TCRV的生產(chǎn)是在非洲各地的國(guó)家實(shí)驗(yàn)室建立的，但每年5000萬(wàn)劑的需求以實(shí)現(xiàn)規(guī)模經(jīng)濟(jì)、保持生產(chǎn)質(zhì)量或?qū)ζ湓O(shè)施進(jìn)行資本重組。

塔夫茨大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院和美國(guó)農(nóng)業(yè)部發(fā)起了一項(xiàng)開發(fā)TCRV耐熱配方的研究方案。在兩年內(nèi)，該項(xiàng)目正在生產(chǎn)牛瘟疫苗，該疫苗在37℃下保留了國(guó)際規(guī)定的最低免疫劑量，最長(zhǎng)可達(dá)8個(gè)月