初始污染菌檢測(cè)

初始污染菌檢測(cè)5/6/20241參考標(biāo)準(zhǔn)《中華人民共和國藥典》2005版附錄微生物限度檢查法ISO11737-1:2006Sterilizationofmedicaldevices–Microbiologicalmethods–Part1:DeterminationofapopulationofmicroorganismsonproductsGB/T19973.1/ISO11737-1:1995醫(yī)療器械的滅菌微生物方法第一部分：產(chǎn)品上微生物總數(shù)的估計(jì)GB15980-1995一次性使用醫(yī)療用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)5/6/20242檢測(cè)環(huán)境及檢驗(yàn)量應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000級(jí)下的局部潔凈度100級(jí)的單向空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行一般供試品的檢驗(yàn)量為3~10個(gè)獨(dú)立包裝的同批次供試品。（見ISO11737-1:2006A8.1）5/6/20243實(shí)驗(yàn)材料及設(shè)備營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液濾器、微孔濾膜（孔徑0.45微米，直徑50mm）、量筒、剪刀、鑷子、培養(yǎng)皿過濾裝置、電子天平、壓力蒸汽滅菌器、生化培養(yǎng)箱等5/6/20244主要步驟采樣供試液制備培養(yǎng)菌落計(jì)數(shù)5/6/20245供試液的制備用？ml氯化鈉-蛋白胨緩沖液浸提？小時(shí)（包括最內(nèi)層包裝的內(nèi)壁）-所需供試液的用量和浸提時(shí)間需驗(yàn)證處理方法：振動(dòng)、沖洗、擦拭法、袋蠕動(dòng)、超聲、渦旋混合、攪拌5/6/20246舉例—振動(dòng)小型醫(yī)療器械可以投入無菌的自封袋中，加入緩沖液充分振動(dòng)。另外，用緩沖液沖洗內(nèi)包裝袋的內(nèi)壁。并與產(chǎn)品緩沖液相混。5/6/20247梯度稀釋1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml供試液9mlNacl9mlNacl1:10 1:100 1:1000 5/6/20248轉(zhuǎn)至培養(yǎng)基膜過濾法—適用于微生物濃度較低的懸液平板傾注—適用于微生物濃度較高的懸液平板涂布—適用于微生物濃度較高的懸液螺旋涂布5/6/20249薄膜過濾法5/6/202410培養(yǎng)藥典中的培養(yǎng)條件：細(xì)菌30-35℃48h

霉菌、酵母菌23-28℃72h

必要時(shí)，可適當(dāng)延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間至5-7天5/6/202411菌落計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)方法：將平板置菌落計(jì)數(shù)器或從平板的背面直接以肉眼用標(biāo)記筆點(diǎn)計(jì)，以投射光襯以暗色背景，仔細(xì)觀察，計(jì)數(shù)。必要時(shí)可以借助于放大鏡、菌落計(jì)數(shù)器。菌落特征：

⑴形態(tài)特征：常為白色、灰白色或灰色，亦有淡褐色、淡黃色（如果培養(yǎng)基中加入0.1%TTC(氯化三苯基四氮唑試劑)，菌落為紅色）⑵邊緣整齊或不整齊，表面有光滑、粗糙，皺褶、突起或扁平。⑶大小差異很大。5/6/202412計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證—回收率驗(yàn)證試驗(yàn)至少應(yīng)進(jìn)行3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)，并分別計(jì)算各試驗(yàn)菌每次試驗(yàn)的回收率。A試驗(yàn)組供試液+試驗(yàn)菌（50~100cfu）B菌液組試驗(yàn)菌（50~100cfu）C供試品對(duì)照組D緩沖液對(duì)照組緩沖液+試驗(yàn)菌（50~100cfu）(A-C)/B>70%D/B>70%5/6/202413菌落計(jì)數(shù)報(bào)告規(guī)則—平板法選取細(xì)菌、酵母菌平均菌落數(shù)在30～300之間、霉菌平均菌落數(shù)在30~100之間的稀釋級(jí)作為報(bào)告菌落數(shù)的依據(jù)。1）如只有1個(gè)稀釋級(jí)平均菌落數(shù)符合上述規(guī)定，則將稀釋級(jí)的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告。2）如有兩個(gè)相鄰稀釋級(jí)的平均菌落數(shù)在30～300之間，則先計(jì)算兩稀釋級(jí)菌落數(shù)的比值。高稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)比值=————————————————————

低稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)當(dāng)比值≤2時(shí)，則以2個(gè)稀釋級(jí)的平均菌落數(shù)均值報(bào)告；當(dāng)比值>2但不超過5時(shí)，則以低稀釋級(jí)的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告；當(dāng)比值大于5，或高稀釋級(jí)的菌落數(shù)大于或等于低稀釋級(jí)的菌落數(shù)等異常情況時(shí)，應(yīng)查明原因再進(jìn)行檢查，必要時(shí)，應(yīng)進(jìn)行方法的重新驗(yàn)證。3）如各稀釋級(jí)平均菌落數(shù)均在300以上，則按最高平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告；如各稀釋級(jí)平均菌落數(shù)均在30以下，則按最低平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告。4）如各稀釋級(jí)的平板均無菌落生長(zhǎng)，或僅最低稀釋級(jí)的平板有菌落生長(zhǎng)，但平均菌落數(shù)小于1時(shí)，以＜1乘以最低稀釋倍數(shù)的值報(bào)告菌數(shù)5/6/202414菌落