豬偽狂犬疾病

偽狂犬（PR/AD）2DrAladarAujeszky3概要?dú)v史：1902年在匈牙利由Aujeszky博士首次發(fā)現(xiàn)損失巨大：g/f—12美元隱性感染：病毒與抗體并存常與豬瘟相混淆現(xiàn)狀USA--98年底根除PR計劃未實(shí)現(xiàn)丹麥于88年根除PR國內(nèi)PR發(fā)病率高，損失巨大：1988-1995，廣東26個豬場發(fā)生，感染母豬19750頭，約占100多個集約化豬場母豬總數(shù)的30%4偽狂犬病病毒(PseudorabiesVirus,PRV),或奧葉茲基氏病病毒(Aujeszky’sDiseaseVirus,ADV),或豬皰疹病毒1型(HerpesVirus1)結(jié)構(gòu)核衣殼內(nèi)線形雙鏈DNA有囊膜糖蛋白(Glycoprotein)：14種gB(gII),gC(gIII),gD(gp50),gE(gI),gG(gX),gH,gI(gp63),gK,gL,gM(Mettenleiter,1994)病原學(xué)5復(fù)制：主要在扁桃體及呼吸道增殖、攻擊神經(jīng)組織及白細(xì)胞核內(nèi)復(fù)制，形成包涵體感染特點(diǎn)可終生感染、帶毒，個體或場內(nèi)不易清除潛伏感染：病毒基因組保存于神經(jīng)元細(xì)胞中周期性復(fù)發(fā)潛伏病毒任何時間可被激活，引起發(fā)病引起機(jī)體免疫抑制鼠：感染耐過，散毒期可達(dá)131天病原學(xué)6病原學(xué)抵抗力干凈水泥地面 1-2小時人皮膚 4小時塑料或鋼地板 3天糞或糞池 2天pH6-8 穩(wěn)定7自然宿主：豬，可耐過急性感染而存活，成為病毒天然貯藏庫一些哺乳動物感染：致死性--牛、羊、狗潛伏期：36小時--10天，一般3--6天感染途徑通過飛沫、攝食、創(chuàng)傷感染垂直傳播病毒血癥：白細(xì)胞攜帶病毒突然爆發(fā)，持續(xù)時間短：<2周流行病學(xué)8病毒如何傳入豬群？ 途徑 機(jī)會

豬 ++++ 鼠 +++ 鳥 + 昆蟲 + 人 +

空氣 ++ 車輛 + 排泄物 ±9傳播引進(jìn)病毒攜帶豬空氣/氣溶膠：場--場傳播主要原因(Gloster,1984)精液、胚胎移植污染的飼料、飲水其它（野生）動物人流行病學(xué)10高度免疫性康復(fù)豬具有高度的免疫性：中和抗體可持續(xù)18個月人工接種強(qiáng)毒：不發(fā)病母源抗體：可達(dá)15周，但6-12周具保護(hù)力（攻強(qiáng)毒，無臨床癥狀）母源抗體：阻止病毒復(fù)制，保護(hù)仔豬不感染，切斷病毒傳播（Bouma等，1977）疫苗免疫可減少損失，可縮短散毒時間，減輕臨床癥狀，但不能阻止病毒感染，感染后，不能阻止病毒在體內(nèi)復(fù)制、散毒，免疫特性11免疫特性免疫后，接觸野毒可促進(jìn)潛伏感染主動免疫和被動免疫不能阻止野毒感染免疫可減少損失，但免疫不當(dāng)，會使病毒也因此持續(xù)存在于豬群中某些藥物、化學(xué)物品可激活休眠狀態(tài)的PRV，如地塞米松12

與日齡、毒力、感染劑量、途徑、免疫狀態(tài)、應(yīng)激、其它疾病、環(huán)境、管理等因素有關(guān)全身的神經(jīng)癥狀：腦膜炎、腦炎呼吸綜合征：支氣管炎、間質(zhì)性肺炎、肺水腫病變：肝、脾、扁桃體、皮膚壞死，腸道病變多種形式的繁殖障礙死亡率上升生長速度減慢臨床癥狀皮膚皰疹15哺乳仔豬：高死亡率<15日齡，最急性，病程<72小時，死亡率100%呼吸困難，發(fā)燒（41-42℃），大量流涎，厭食，嘔吐，腹瀉和精神沉郁后軀麻痹而呈犬坐，運(yùn)動失調(diào)，眼球震顫，狂奔，間歇性抽搐，昏迷，24-36小時死亡母豬免疫水平差異：幾窩或同一窩內(nèi)部分仔豬發(fā)病，而其它窩或同窩其它仔豬正常臨床癥狀18斷奶仔豬：與哺乳仔豬相似，但較輕3-4周死亡率近50%感染3-6天，41-42℃，沉郁，厭食呼吸癥狀：打噴嚏，流鼻涕，呼吸困難，咳嗽病程持續(xù)5-10天，消瘦，體重下降

上述仔豬在體溫和厭食癥狀消失后，可恢復(fù)CNS和/或呼吸系統(tǒng)繼發(fā)感染（P.m，APP），?？芍滤?-9周齡，良好治療和管理，死亡率不超過10%存活豬，僵豬，晚上市1-2個月臨床癥狀19育成育肥豬：呼吸癥狀發(fā)病率高，近100%；死亡率低（僅PR），1-2%偶有CNS：肌肉震顫，劇烈抽搐、驚厥41-42℃，沉郁，厭食呼吸癥狀：打噴嚏，流鼻涕，劇烈咳嗽，呼吸困難（尤其驅(qū)趕后）繼發(fā)感染：PRV抑制AM功能，降低防御功能，易引起繼發(fā)感染--APP，P.m，損失更大病毒源臨床癥狀20支原體支原體+偽狂犬病支原體與偽狂犬病的互作肺部病變百分比21種豬：繁殖障礙基礎(chǔ)母豬和公豬：類似育成育肥豬的呼吸癥狀后備母豬：流產(chǎn)妊娠母豬感染在：前30天：吸收，返情40-90天：流產(chǎn)、死胎、弱仔產(chǎn)前：仔豬帶毒，出生1-2天，死亡繁殖失?。?0%死亡率：很少超過2%臨床癥狀22病理變化肝、脾：1-2mm白色壞死點(diǎn)--哺乳和斷奶仔豬壞死性扁桃體炎、咽炎、氣管炎肺水腫腦膜充血，腦脊液增多腎乳頭、皮質(zhì)淤血點(diǎn)23診斷臨床癥狀仔豬高死亡率和神經(jīng)癥狀呼吸癥狀流產(chǎn)病理變化：肝、脾壞死灶，非化膿性腦炎病毒分離PK-15，18-96小時出現(xiàn)CPHE染色，嗜酸性核內(nèi)包涵體動物實(shí)驗：兔或豚鼠，皮內(nèi)注射腦組織勻漿24脾臟和肝臟的白色斑點(diǎn)25診斷血清學(xué)VNIFELISA：區(qū)別gE缺失疫苗和野毒感染產(chǎn)生AbPCR：可檢測潛伏感染乳膠凝集試驗（LA）：快速、可現(xiàn)場操作Dot-ELISA瓊膠免疫擴(kuò)散(Agar-gelimmunodiffusiontest)IHA放射免疫放射免疫擴(kuò)散酶試驗（RIDEA）26診斷組織病理學(xué)腦膜炎：血管套管現(xiàn)象肝細(xì)胞壞死，核內(nèi)包涵體間質(zhì)性肺炎27腦膜炎（血管充血），血管套管現(xiàn)象28肝臟壞死29肝臟壞死，核內(nèi)包涵體30間質(zhì)性肺炎和壞死31預(yù)防管理+免疫管理引進(jìn)無PR種豬：主要感染源----陽性豬引進(jìn)種豬隔離、檢疫防止外界車輛攜帶防止飼料污染鳥類、野生動物、人的攜帶早期斷奶、嚴(yán)格AIAO32預(yù)防管理+免疫免疫：弱毒疫苗（MLV）、滅活疫苗弱毒疫苗：免疫原性好Bartha株：第一個MLV株，雞胚傳100代（Bartha1961）BUK株：Skoda，1964TK（胸腺嘧啶激酶基因）缺失的BUK突變株自然缺失糖蛋白gE（g1）的BUK株、Bartha株Begonia株DNA疫苗滅活疫苗：免疫原性與毒力相關(guān)安全，無整合與返強(qiáng)的可能免疫效力差，劑量大，過敏反應(yīng)33控制與凈化清群和重新擴(kuò)群品種價值本地流行情況資金和人員素質(zhì)擴(kuò)群的難易度隔離仔豬：設(shè)施監(jiān)測與淘汰：豬群內(nèi)流行程度（高低）管理與免疫：病毒來源和存在生產(chǎn)階段34易感豬群中病毒傳播感染周期35傳染性ADV的分離和/或抗原檢測ADV侵入再次激活A(yù)DV抗體水平急性感染潛伏感染3急性感染與潛伏感染36美國 始于90年10月份德國始于91年4月份荷蘭始于93年9月份>1996,所有EU國家開始偽狂犬病凈化使用淘汰方法凈化使用免疫接種方法凈化英國丹麥控制與凈化為什么采用淘汰的方法來凈化偽狂犬？37歐洲偽狂犬病的凈化凈化AD的重要成功因素只使用缺失疫苗：gE優(yōu)質(zhì)高效的疫苗毒株：良好的免疫原性和安全性致弱活毒疫苗密集免疫接種計劃良好的管理后備種豬的嚴(yán)格控制38免疫接種作用病毒感染所需劑量加大：豬易感性降低給哺乳仔豬提供良好的保護(hù)感染后，病程縮短排毒量減少，排毒時間縮短病毒傳播機(jī)會減少減少潛伏感染和反復(fù)感染的機(jī)會39免疫攻毒后排毒情況0123456712345678910天排毒BegoniaUnisolveBegoniaDiluvacF.Phlaxiaw/oemuls.Controls40偽狂犬病毒基因圖RepeatRepeatULUSgBgCgp80TKgGgIgDgE41病毒主要基因gE（gI）：毒力和鑒別基因。缺失后，減少細(xì)胞感染，組織損傷輕微gG（gX）：美國早期用于鑒別TK：毒力基因，病毒能在腦組織內(nèi)復(fù)制，致腦組織損傷。缺失后抑制病毒復(fù)制gI（gp63）：缺失可減弱毒力，對免疫作用不大gB（gII）：保護(hù)性免疫gC（gIII）：保護(hù)性免疫，偶用鑒別gD（gp50）：控制病毒對細(xì)胞的穿透能力、保護(hù)性免疫rr：毒力基因gB、gC、gD產(chǎn)生保護(hù)性抗體WJpathology42AD野毒gE43免疫44標(biāo)記疫苗gBgCgp80tkgGgIgDgE

gE缺失疫苗免疫豬不產(chǎn)生

gE抗體野毒感染產(chǎn)生

gE抗體45標(biāo)記疫苗疫苗 缺失

疫苗毒株 缺失

糖蛋白 TKRepeats活苗 “Natural” Bartha gE,gI + + Marker Norden gE + + BUK gE + + NIA-4 gE + + Aloft26 gI + + rDNA Begonia,783 gE - - deletion Omnimark gC - +

PRV-Marker gG - - Tolvid gG - + Alfort26 gE + + MK35 gE - +滅活 rDNA Phylaxia gE + + deletion Geskypur(Ka) gE n.a. n.a.46疫苗特性>105

TCID50/頭份Begonia株gE、tk基因缺失：人工基因重組可與現(xiàn)場野毒區(qū)分抗體配以敵露威（DiluvacForte）佐劑，可極大地提高免疫力每劑量2ml47Begonia是

NIA-3(2.4-N3A)的一個變異株(Quintc.s.;J.Gen.Virol.,1987)Begonia株的免疫效果NIA-3變異株完全保護(hù)豬只、抵抗野強(qiáng)ADV的攻毒所造成的發(fā)燒及生長緩慢攻毒后病毒的散播也降至最低，特別是用NIA-3變異株免疫本變異株完全阻止攻毒2/5豬的排毒48與DiluvacForte敵露威配合使用dl-.維生素E為基質(zhì)的水溶性佐劑引起短時、輕微的局部組織反應(yīng)疫苗效力保持不變易于注射49表1、注射后發(fā)生組織反應(yīng)的統(tǒng)計50表2、DiluvacForte與不同抗原組合接種后的局部反應(yīng)照片1、使用2頭份劑量DiluvacForte配制的偽狂犬病弱毒疫苗注射后14天的圖象照片2、使用2頭份劑量NIA-783水劑疫苗注射后14天的圖象照片1的顯微組織學(xué)圖象A=Lymphocytic/plasmacellularinfiltration照片2的顯微組織學(xué)圖象B=Lymphocyticandgranulomatousreaction；C=Degenerationofmusclefibers；D=vacuoles照片3、使用2頭份劑量DiluvacForte配制的偽狂犬病弱毒疫苗注射后28天的圖象照片4、使用1頭份劑量油包水乳劑配制的偽狂犬病弱毒疫苗注射后28天的圖象照片3的顯微組織學(xué)圖象A=Lymphocytic/plasmacellularinfiltration；E=slightintramuscularfibrosis照片4的顯微組織學(xué)圖象C=Degenerationofmusclefibers；F=Vacuolessurroundedbygranulomatousreaction；G=Multinucleatedgiantcells59表3、DiluvacForte對繁殖性狀的影響60圖161表4、攻毒前后的平均日增重（克）62圖263表5、使用油包水乳劑(o/w)與磷酸鹽緩沖液(PBS)配制Bartha

株疫苗接種后血清學(xué)陰性育肥豬的百分率（%）64表6、使用DiluvacForte與傳統(tǒng)稀釋液配制Begonia株疫苗接種后血清學(xué)陰性育肥豬的百分率（%）65表7、使用DiluvacForte配制PorcilisBegonia偽狂犬病弱毒疫苗免疫前后的繁殖性狀66綿羊、牛、貓、一日齡雛雞、小鼠安全犬口服時安全安全性：DiluvacForte佐劑的PorcilisBegonia豬接種后不引起生長阻滯不同日齡豬只安全：包括各懷孕階段母豬無垂直傳播其它動物67DiluvacForte佐劑的PorcilisBegonia免疫抗體反應(yīng)不常與保護(hù)力正相關(guān)充分的保護(hù)力需要體液免疫和細(xì)胞免疫的協(xié)同:對T細(xì)胞的基礎(chǔ)免疫,既為誘導(dǎo)充分保護(hù)力所必需,又對免疫豬之凈化感染野毒起關(guān)鍵作用活毒疫苗能誘導(dǎo)比滅活疫苗更高的免疫力所有豬偽狂犬病毒株雖然毒力可能不同,但抗原性相同切除gE和tk基因后的ADV,免疫原性幾乎不變68ADV的凈化：DiluvacForte佐劑的PorcilisBegonia免疫程序(I)：種豬群2次基礎(chǔ)免疫，間隔4周凈化開始時豬場所有種豬所有新引進(jìn)的后備母豬和公豬每隔4個月所有母豬和公豬同天接種1次69ADV的凈化：DiluvacForte佐劑的PorcilisBegonia免疫程序(II)：其它豬肥育豬：2次，間隔4周，首免在10-12周齡自留后備種豬 1、2次，間隔4周，首免在10-12周齡

2、20-26周齡，第3次免疫70鼻腔免疫接種母源抗體半衰期為10天，可維持到16周免疫的母豬，仔豬肌肉注射時，母源抗體干擾明顯豬群發(fā)生偽狂犬時，可采取鼻腔接種方式：快速產(chǎn)生局部免疫避開母源抗體的干擾阻斷潛伏感染免疫力持續(xù)時間短71未接種肌肉注射鼻腔免疫試驗性嚴(yán)重感染后鼻腔接種可減少排病排毒豬百分比72豬場級肥育豬ADV的凈化（荷蘭，Diessen地區(qū)）免疫接種計劃開始73豬場級種豬ADV的凈化（荷蘭，Diessen地區(qū)）12243674（荷蘭，Diessen地區(qū)）肥育豬生產(chǎn)性能比較（凈化前后）75（荷蘭，Diessen地區(qū)）地區(qū)級ADV的凈化7600,511,522,5396-196-296-397-197-297-3母豬肥育豬國家級ADV的凈化（荷蘭，96-97年豬群感染率變化）77只從陰性豬場購買后備公豬/母豬篩選高效疫苗和制定合理免疫程序強(qiáng)化飼養(yǎng)管理,完善生物安全措施全進(jìn)全出早期斷奶(不超過21日齡)將配種至分娩舍，與保育-育成-肥育舍分開強(qiáng)化場內(nèi)豬只轉(zhuǎn)運(yùn)管理等泰國正大種豬公司豬偽狂犬病的凈化78泰國正大種豬公司豬偽狂犬病的凈化

高效疫苗的篩選1977 Dr.BunmebSatyasujaree報道首宗AD爆發(fā)1981-1987

使用Intervet和Rhomeriux滅活苗1987-1996 使用Intervet和Rhomeriux基因缺失弱毒苗1997- 使用Intervet

Begonia株疫苗

PorcilisBegoniainDiluvacForte79 免疫程序 英特威建議懷孕母豬 分娩前4-3周 3次/年公豬 2次/年 3次/年