免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)

檢驗(yàn)技術(shù)－－免疫濁度測定IMMUNOASSAYIA授課教師：鄭軍1免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024免疫測定分類免疫濁度測定

g~ng標(biāo)記免疫測定ng~pg2免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024免疫濁度測定3免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024免疫沉淀反應(yīng)海德堡曲線Heidelberg’sCurve4免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024抗原濃度測定范圍抗體過?？乖^剩Ag*Ab5免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024免疫濁度測定分類透射濁度法散射濁度法6免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024透射濁度法和散射濁度法的光路檢測器A(透射濁度法)檢測器B(散射濁度法)

I0I渾濁樣品光源7免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024反應(yīng)物含量與散射濁度遵守HeidelbergerCurve。內(nèi)容：當(dāng)抗體量恒定時(shí)，抗原與抗體結(jié)合，形成免疫復(fù)合物的反應(yīng)與散射光信號響應(yīng)值的上升成正比。同時(shí)散射信號亦隨抗原抗體結(jié)合時(shí)間的增加而曲線上升。8免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024AnalyteAntibodyOtherstuff

Analyte-antibodycomplexingNowbigenoughtoscatterlightToosmalltodetectopticallyWhathappensinsidetheflowcell?9免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024321TimeScatterScatterSignalVersusTime

Nephelometry1.Bufferaddition2.SampleAddition3.AntibodyadditionFluidinthecellhascauseslittlescatterAddingsampleincreasesscatterslightlyAddingantibodycausesalargeincreaseinlightscattering10免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024免疫濁度測定分類終點(diǎn)法速率法11免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024終點(diǎn)法定時(shí)散射比濁分析Fixedtimenephelometry12免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024基本原理：免疫沉淀反與散射比濁分析相結(jié)合的技術(shù)。沉淀反應(yīng)是在抗原抗體相遇后立即進(jìn)行，到沉淀形成信號變化巨大影響散射的精確度，因此進(jìn)行檢測時(shí)會人為的進(jìn)行幾秒的延遲。13免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024速率散射濁度法基本原理：是一種抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的動(dòng)態(tài)測定法。速率即指在抗原抗體反應(yīng)的測定過程中，每一單位時(shí)間內(nèi)兩者結(jié)合的速度，將各單位時(shí)間內(nèi)抗原與抗體形成復(fù)合物的速率及復(fù)合物顆粒形成的散射信號連接在一起，即形成動(dòng)力學(xué)分析方法。14免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024321TimeScatterMeasuretheRATEAfterAntibodyAddition

RateNephelometry1.Bufferaddition2.SampleAddition3.AntibodyadditionFirstderivative:rateofchangeofscatterovertime;

thisistheSLOPEofthecurveRate15免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024CONCENTRATIONRATE在速率峰基礎(chǔ)上完成的標(biāo)準(zhǔn)曲線16免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024速率法的特點(diǎn)：測定的是抗原抗體反應(yīng)的第一階段?？焖伲`敏度高，可檢測微量樣品。檢測的是速率，因此理論上講不受本底影響。
17免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024抗原過剩的測定18免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/202419免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024RATEofSCATTER抗體過量時(shí)的反應(yīng)抗原過量時(shí)的反應(yīng)60850反應(yīng)時(shí)間(秒)ARRAY抗原過量自動(dòng)檢測加入校正液20免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024透射濁度法檢測器A(透射濁度法)檢測器B(散射濁度法)

I0I渾濁樣品光源21免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024抗體試劑的要求1特異性2親和力3反應(yīng)時(shí)保持抗體過剩測定范圍應(yīng)包括高于及低于正常值的50%5測定的精密度應(yīng)在5%左右22免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024校正曲線：聚乙二醇的增強(qiáng)作用抗原濃度C1C2C3吸光度4%聚乙二醇不加聚乙二醇23免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024NIPIA：近紅外顆粒速率法免疫分析BenefitsAbilitytoexpandthemenuintohighsensitivityassaysincluding:Ferritin,Digoxin,andIgE.NIReliminatestheinterferenceofbiologicalsubstancessuchasbiliribinandhemoglobin.24免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024NIPIA：近紅外顆粒速率法免疫分析優(yōu)點(diǎn)擴(kuò)展檢測菜單，增加高敏項(xiàng)目分析：如鐵蛋白，地高辛

，IgE，超敏CRP等近紅外波長分析消除生物物質(zhì)如膽紅素和血色素的干擾25免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024NIR：940nm波長近0oC檢測角檢測顆粒大?。?00~500nm直徑速率法測定26免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024NIPIA：940nm

LED光源速率散射法：670nm激光光源27免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024免疫濁度

自動(dòng)分析系統(tǒng)28免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024先進(jìn)獨(dú)特的原理·兩種技術(shù)(透射法+散射法)，四種方法：-速率散射比濁法(蛋白檢測)-速率抑制散射比濁法(TDM)-近紅外顆粒速率法免疫分析(RateNIPIA)-速率抑制NIPIA(低分子量TDM)29免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024嚴(yán)密的儀器運(yùn)行系統(tǒng)·真正24小時(shí)待機(jī)·檢測速度達(dá)每小時(shí)180測試·液面探測系統(tǒng)全程監(jiān)控反應(yīng)過程·試劑冷藏系統(tǒng)－增加試劑穩(wěn)定性·自動(dòng)校正光源30免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024簡便的操作系統(tǒng)·四個(gè)緩沖液位－完成1400個(gè)測試·39個(gè)半永久性反應(yīng)杯·靈活的系統(tǒng)界面：觸屏、鼠標(biāo)、鍵盤·每日保養(yǎng)少于1分鐘·穿刺式試劑蓋，不需開關(guān)瓶·一次編程72個(gè)樣本，每個(gè)樣本24個(gè)項(xiàng)目·完善的用戶自定義系統(tǒng)，與原裝試劑同時(shí)運(yùn)行31免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024準(zhǔn)確穩(wěn)定的結(jié)果·真正實(shí)現(xiàn)抗原過量檢測(所有項(xiàng)目)，避免假陰性結(jié)果·NIPIA排除生物活性物質(zhì)非特異性干擾·穩(wěn)定的原裝試劑：開瓶效期18-24個(gè)月·單點(diǎn)定標(biāo)，有效期超過28天·完善的用戶自定義系統(tǒng)，與原裝試劑同時(shí)運(yùn)行32免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024周到的樣本處理系統(tǒng)·原試管上機(jī)·全面條形碼系統(tǒng)·真正的急診插入·樣本檢測項(xiàng)目的隨機(jī)組合33免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024如何正確閱讀自動(dòng)化濁度分析儀的說明書34免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024規(guī)格：

RIgG1×50ml普通瓶型RIgA1×50ml普通瓶型RIgA1×50ml普通瓶型35免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024用途：

本試劑用于測定血清或血漿中免疫球蛋白IgG、IgA及IgM的含量。適用于半/全自動(dòng)生化分析儀。36免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024原理：

人血清或血漿中免疫球蛋白G/A/M與其相應(yīng)抗體（羊抗人免疫球蛋白G/A/M血清）在液相中相遇，立即形成抗原-抗體復(fù)合物，并形成一定濁度。與通過同樣處理的校準(zhǔn)血清比較，即可計(jì)算出樣品中免疫球蛋白G/A/M含量。37免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024試劑盒組成：

R：

IgG試劑：羊抗人IgG血清消脂劑R：

IgA試劑：羊抗人IgA血清消脂劑R：

IgM試劑：羊抗人IgM血清消脂劑STD：免疫球蛋白G/A/M校準(zhǔn)血清

38免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024樣品要求：樣品為空腹血清、血漿（肝素抗凝，0.1mg肝素可抗凝1.0ml血液；EDTA抗凝，1.8mgEDTA可抗1.0ml血液）。樣品應(yīng)在低溫條件下運(yùn)輸保存，樣品中Ig在2～8℃保存可穩(wěn)定7天，冰凍保存可穩(wěn)定3個(gè)月。39免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024基本參數(shù)：方

法：終點(diǎn)法主波長：340nm反應(yīng)溫度：37℃副波長：700nm反應(yīng)時(shí)間：10min40免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024操作具有個(gè)人特征性。41免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024計(jì)算及校準(zhǔn)及質(zhì)控

使用多點(diǎn)非線性/樣條函數(shù)校準(zhǔn)模式由儀器自動(dòng)生成校準(zhǔn)曲線后測定樣品含量或以各標(biāo)準(zhǔn)管濃度值作為橫坐標(biāo)，吸光度變化值作為縱坐標(biāo)，手工繪制校準(zhǔn)曲線圖，查閱該圖即可得樣品含量。1.建議使用四川邁克科技公司提供的Ig校準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)。2.推薦使用衛(wèi)生部臨檢中心提供的免疫質(zhì)控品進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控。42免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024性能指標(biāo)43免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/20241.測定范圍：IgG：0.00～40.00g/L，γ≥0.99IgA：0.00～6.20g/L，γ≥0.99IgM：0.00～5.08g/L，γ≥0.9944免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/20242.精密度：IgG：批內(nèi)、批間平均CV分別為2.5%；4.5%IgA：批內(nèi)、批間平均CV分別為3.5%；7.0%IgM：批內(nèi)、批間平均CV分別為3.5%；7.0%45免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/20243.準(zhǔn)確度：不準(zhǔn)確度≤15%4.空白吸光度：試劑在340nm處，10mm光徑下，吸光度應(yīng)小于0.150。46免疫濁度測定檢驗(yàn)技術(shù)5/8/2024注意事項(xiàng)1.如果樣品中Ig含量超過測定范圍，則用生理鹽水稀釋后測定，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)