乳制品中三聚氰胺的測定（乳制品檢測）

三聚氰胺概述三聚氰胺事件一三聚氰胺的性質(zhì)二三聚氰胺與假蛋白三一、三聚氰胺事件2007年，美國暴發(fā)了貓和狗腎衰竭的大規(guī)模疫情，原因是寵物食品中摻入了三聚氰胺。2008年9月，中國暴發(fā)三鹿嬰幼兒奶粉受污染事件?！稏|方早報》記者簡光洲發(fā)表《甘肅14名嬰兒疑喝“三鹿”奶粉致腎病》，第一次點出三鹿奶粉的名字，引發(fā)巨大輿論跟進(jìn)和問責(zé)風(fēng)暴。2008年9月13日，衛(wèi)生部證實，三鹿牌奶粉中含有的三聚氰胺，是不法分子為增加原奶或奶粉的蛋白含量人為加入的。三聚氰胺概述奶粉行業(yè)的911事件——2008年中國嬰幼兒奶粉污染事件一、三聚氰胺事件2008年9月16日晚，質(zhì)檢總局通報全國嬰幼兒奶粉三聚氰胺含量抽檢結(jié)果，22家491批次嬰幼兒奶粉檢出三聚氰胺；除三鹿外，雅士利、伊利、蒙牛、圣元、熊貓、古城、光明等著名品牌也檢出三聚氰胺，消息經(jīng)中央電視臺新聞聯(lián)播報道后，三鹿奶粉事件正式升級為乳品行業(yè)的“三聚氰胺事件”，整個行業(yè)面臨危機(jī)。2008年10月，國家衛(wèi)生部等五部門公布乳與乳制品中三聚氰胺臨時管理限量值，2011年4月，五部門聯(lián)合發(fā)布公告，嬰兒配方食品中三聚氰胺的限量值。三聚氰胺概述一、三聚氰胺事件該事件亦重創(chuàng)中國制造商品信譽，多個國家禁止了中國乳制品進(jìn)口。2010年9月24日，中國國家質(zhì)檢總局表示，牛奶事件已得到控制，9月14日以后新生產(chǎn)的酸乳、巴氏殺菌乳、滅菌乳等主要品種的液態(tài)奶樣本的三聚氰胺抽樣檢測中均未檢出三聚氰胺。2010年9月，中國多地政府下達(dá)最后通牒：若在2010年9月30日前上繳2008年的問題奶粉，不處罰。2011年中國中央電視臺《每周質(zhì)量報告》調(diào)查發(fā)現(xiàn)，仍有7成中國民眾不敢買國產(chǎn)奶。三聚氰胺概述二、三聚氰胺的性質(zhì)三聚氰胺概述三聚氰胺：別名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。分子式：C3N6H6、C3N3(NH2)3；分子量：126.12物理性能：白色結(jié)晶粉末，無毒，無味；相對密度：1570kg/m3；熔點：在常壓下，354℃分解；升華溫度：300℃；溶解性：能溶于甲醇、甲醛、乙酸、熱乙二醇、甘油、吡啶；微溶于水、乙醇；不溶于乙醚、苯和四氯化碳，水溶液呈弱堿性二、三聚氰胺的性質(zhì)三聚氰胺概述三聚氰胺是一種重要的氮雜環(huán)有機(jī)化工原料，顯弱堿性，能夠與各種酸反應(yīng)生成三聚氰胺鹽；三聚氰胺與醛類反應(yīng)生成加成化合物；三聚氰胺與甲醛反應(yīng)制成樹脂，三聚氰胺樹脂是一種多種用途的材料，防火耐熱且有很高的穩(wěn)定性，用于生產(chǎn)塑料、地板磚，廚房用具，防火纖維，商業(yè)濾膜，膠水和阻燃劑三、三聚氰胺與假蛋白三聚氰胺概述我們知道，食品工業(yè)中常常需要檢查蛋白質(zhì)含量，但是直接測量蛋白質(zhì)含量技術(shù)上比較復(fù)雜，成本也比較高，不適合大范圍推廣，所以業(yè)界常常使用“凱氏定氮法”的方法，通過食品中氮原子的含量來間接推算蛋白質(zhì)的含量。也就是說，食品中氮原子含量越高，這蛋白質(zhì)含量就越高。這樣一來，這名不見經(jīng)傳的三聚氰胺的由于其分子中含氮原子比較多，于是就派上大用場了……三、三聚氰胺與假蛋白三聚氰胺概述三聚氰胺的最大的特點是含氮量很高（66％），加之其生產(chǎn)工藝簡單、成本很低，給了摻假、造假者極大地利益驅(qū)動，有人估算在植物蛋白粉和飼料中使“蛋白質(zhì)”增加一個百分點，用三聚氰胺的花費只有真實蛋白原料的1/5。所以“增加”產(chǎn)品的表觀蛋白質(zhì)含量是添加三聚氰胺的主要原因，三聚氰胺作為一種白色結(jié)晶粉末，沒有什么氣味和味道，摻雜后不易被發(fā)現(xiàn)等也成了摻假、造假者心存僥幸的輔助原因。三聚氰胺試紙條快速測定原理一儀器和設(shè)備二結(jié)果判定四操作方法三注意事項五一、原理

三聚氰胺膠體金速測卡的檢測原理是競爭性免疫層析。將著色標(biāo)記物與待測抗原的特異性抗體(Ab1)相偶聯(lián),沉積在結(jié)合區(qū)。而檢測區(qū)處固相化的是待測抗原或待測抗原的類似物。若樣品中含有待測抗原,則樣品中的抗原和帶有標(biāo)記物的Ab1形成Ag-Ab1復(fù)合物。隨后在通過固相化有待測抗原或其類似物的檢測區(qū)時,由于競爭抑制,不再發(fā)生反應(yīng),檢測線處不顯色;樣品繼續(xù)前移,Ag-Ab1復(fù)合物被固相化在質(zhì)控線處的抗Ab1抗體(Ab2)所結(jié)合,形成Ab1-Ag-Ab2復(fù)合物,使質(zhì)控線顯色。高效液相色譜法二、儀器和設(shè)備三聚氰胺膠體金速測卡等高效液相色譜法三、操作方法高效液相色譜法1．將未開封的試紙卡和檢測樣品恢復(fù)至室溫。2．將試紙卡水平放置，用滴管向試紙卡孔緩慢逐滴加入3滴不含氣泡的待測液3．5分鐘判斷結(jié)果，10分鐘后的結(jié)果僅作參考。四、結(jié)果判斷高效液相色譜法陰性：C線顯色，T線肉眼可見，無論顏色深淺均判為陰性。陽性：C線顯色，T線不顯色，判為陽性。無效：C線不顯色，無論T線是否顯色，該試紙均判為無效。圖1結(jié)果顯示圖五、注意事項高效液相色譜法1．如果購買時發(fā)現(xiàn)過期，破損，污染，無效的產(chǎn)品，請在購買處進(jìn)行更換。2．所有試紙啟封后1小時內(nèi)使用。高效液相色譜法

乳制品中三聚氰胺的測定原理一試劑和材料二分析步驟四儀器和設(shè)備三高效液相色譜測定五一、原理

試樣用三氯乙酸溶液-乙腈提取，經(jīng)陽離子交換固相萃取柱凈化后，用高效液相色譜測定，外標(biāo)法測定。高效液相色譜法二、試劑和材料除非另有說明，所有試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。甲醇：色譜純乙腈：色譜純氨水：含量為25％～28％三氯乙酸檸檬酸辛烷磺酸鈉：色譜純甲醇水溶液：準(zhǔn)確量取50mL甲醇和50mL水，混勻后備用。三氯乙酸溶液（1％）：準(zhǔn)確稱取10g三氯乙酸于1L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混勻后備用。高效液相色譜法二、試劑和材料高效液相色譜法氨化甲醇溶液（5％）：準(zhǔn)確量取5mL氨水和95mL甲醇，混勻后備用。離子對試劑緩沖液：準(zhǔn)確稱取2.10g檸檬酸和2.16g辛烷磺酸鈉，加入約980mL水溶解，調(diào)節(jié)PH至3.0后，定容至1L備用。三聚氰胺標(biāo)品：CAS08-78-01，純度大于99.0％三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液：準(zhǔn)確稱取100mg（精確到0.1mg）三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品與100ml容量瓶中，用甲醇水溶液溶解并定容至刻度配制成濃度為1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，于4℃避光保存。陽離子交換固相萃取柱：基質(zhì)為苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物，填料質(zhì)量為60mg，體積為3mL，或相當(dāng)者。使用前依次用3mL甲醇、5mL水活化。定性濾紙海砂：化學(xué)純，粒度0.65mm～0.85mm，二氧化硅（SiO2）含量為99％微孔濾紙：0.2微米，有機(jī)相氨氣：純度大于等于99.999％三、儀器和設(shè)備高效液相色譜（HPLC）儀：配有紫外線檢測器或二極管陣列檢測器分析天平：感量為0.0001g和0.01g離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于4000r/min超聲波水域固相萃取裝置氨氣吹干儀渦旋混合器具塞塑料離心管：50mL研體高效液相色譜法四、分析步驟高效液相色譜法提取液態(tài)奶、奶粉、酸奶、冰淇淋和奶糖等

稱取2g（精確至0.01g）試樣于50mL具塞塑料離心管，加入15mL三氯乙酸溶液和5mL乙腈，超聲提取10min,在震蕩提取10min后，以不低于4000r/min。上清液經(jīng)三氯乙酸溶液潤濕的濾紙過濾后，用三氯乙酸溶液定容至25mL，移取5mL濾液，加入5mL水混勻后做待凈化液。四、分析步驟高效液相色譜法提取奶酪、奶油和巧克力等

稱取2g（精確至0.01g）試樣于研缽中，加入適量海砂（試樣質(zhì)量的4倍～6倍）研磨成干粉狀，轉(zhuǎn)移至50mL具塞塑料離心管中，用15mL三氯乙酸溶液分?jǐn)?shù)次清洗研缽，清洗液轉(zhuǎn)入離心管中，在往離心管中加入5mL乙腈，余下操作同液態(tài)奶提取“超聲提取10min加入5mL水混勻后做待凈化液”。

注：若樣品中脂肪含量較高，可以利用三氯乙酸溶液飽和的正己烷液-液分配除脂后再用SPE柱凈化。四、分析步驟高效液相色譜法凈化

將提取液轉(zhuǎn)移至固相萃取柱中。一次用3mL水和3mL甲醇洗滌，抽至近干后，用6mL氨化甲醇溶液洗脫。整個固相萃取過程流速不超過1mL/min。洗脫液于50℃下用氨氣吹干，殘留物（相當(dāng)于0.4g樣品）用1mL流動相定容，渦旋混合1min，過微孔濾膜后，供HPLC測定。五、高效液相色譜測定高效液相色譜法HPLC參考條件色譜柱：C8柱，250×4.6[內(nèi)徑（i.d.）]，5μm或相當(dāng)者。C18柱，250×4.6[內(nèi)徑（i.d.）]，5μm或相當(dāng)者。流動相：C8柱，離子對試劑緩沖液-乙腈（85+15，體積比），混合。C18柱，離子對試劑緩沖液-乙腈（90+10，體積比），混合。流速：1.0mL/min柱溫：40℃波長：240nm進(jìn)樣量:20μL五、高效液相色譜測定高效液相色譜法標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制用流動相將三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液逐級稀釋得到的濃度為0.8、2、20、40、80μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)工作液，濃度由低到高進(jìn)樣檢測，以峰面積-濃度作圖，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程?；|(zhì)匹配加標(biāo)三聚氰胺的樣品HPLC色譜圖參見圖A.1五、高效液相色譜測定高效液相色譜法定量測定待測樣液中三聚氰胺的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，超過線性范圍則應(yīng)稀釋后再進(jìn)樣分析。結(jié)果計算試樣中三聚氰胺的含量由色譜數(shù)據(jù)處理軟件或按式（1）計算獲得：

X

試樣中三聚氰胺的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）A

樣液中三聚氰胺的峰面積C

標(biāo)準(zhǔn)溶液中三聚氰胺的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）V

樣液最準(zhǔn)定容體積，單位為