第五節(jié)菌種的衰退、復(fù)壯和保藏

第五節(jié)菌種的衰退、復(fù)壯和保藏

1一、菌種的衰退及其防治

1、衰退：是指由于自發(fā)突變的結(jié)果，而使某種原有一系列生物學(xué)性狀發(fā)生量變或質(zhì)變的現(xiàn)象。如原有形態(tài)性狀變得不典型了，生長速度變慢，代謝產(chǎn)物生產(chǎn)能力下降，致病菌對宿主侵染力的下降，對外界不良條件包括低溫、高溫或噬菌體侵染等抵抗能力的下降等。22、衰退的防止（1）控制傳代次數(shù)（2）創(chuàng)造良好的培養(yǎng)條件（3）利用不易衰退的細胞傳代（4）采用有效的菌種保藏方法3二、菌種的復(fù)壯1、復(fù)壯的定義：狹義復(fù)壯：指的是在菌種已在發(fā)生衰退的情況下，通過純種分離和測定典型性狀，生產(chǎn)性能等指標，從已衰退的群體中篩遷出少數(shù)尚未退化的個體，以達到恢復(fù)原菌株固有的性狀的相應(yīng)措施。廣義的復(fù)壯：是一項積極的措施，即在菌種的典型特征或生產(chǎn)性狀尚未衰退前，主經(jīng)常有意識地采服純種分離和生產(chǎn)性狀的測定工作，以期眾中選擇到自發(fā)的正變個體。42、復(fù)壯的方法1）純種分離通過純種分離,可把退化菌種細胞群體中一部分仍保持原有典型性狀的單細胞分離出來,經(jīng)擴大培養(yǎng),就可恢復(fù)原菌株的典型性狀。常用的分離純化的方法有平板稀釋法、單細胞或單孢子分離法等。

52）通過寄主體進行復(fù)壯

----對于寄生性的退化菌株,可回接到相應(yīng)寄主體上,以恢復(fù)或提高其寄生性能。例如,根瘤菌屬經(jīng)人工移接,結(jié)瘤固氮能力減退,將其回接到相應(yīng)豆科寄主植物上,令其侵染結(jié)瘤,再從根瘤中分離出根瘤菌,其結(jié)瘤固氮性能就可恢復(fù)甚至提高。63）淘汰已衰退的個體

----例如對“5406”放線菌的分生孢子,采用-10～-30℃處理5～7天,其死亡率達80%,在抗低溫的存活個體中,留下了未退化的健壯個體。7三、菌種的保藏1、菌種保藏的原理

首先要挑選典型菌種的優(yōu)良純種,最好采用它們的休眠體(如分生孢子、芽孢等);其次,創(chuàng)造一個最有利休眠的環(huán)境條件,如干燥、低溫、缺氧、避光、缺乏營養(yǎng)以及添加保護劑等。82、菌種保藏方法1）斜面菌種低溫保藏法---利用低溫對微生物生命活動有抑制作用的原理進行保藏。把斜面菌種、固體穿刺培養(yǎng)物或菌懸液等,直接放入4～5℃冰箱中。保藏時間一般不超過3個月,到時必須進行移接傳代,再放回冰箱。92）砂土管保藏法---將干燥砂粒與細土混合后滅菌制成砂土管,然后接種保藏。若把砂土管放在低溫或抽氣后密封,效果更佳。此法適用于產(chǎn)孢子及芽孢菌種的保藏。保藏期1～10年3）石蠟油封藏法---向培養(yǎng)好的菌種斜面上,加入滅菌石蠟油,高出斜面1cm,然后蠟封管口,放入冰箱。該法既可防止培養(yǎng)基水分蒸發(fā),又能使菌種與空氣隔絕。保藏期1～2年104）真空冷凍干燥法---是目前較理想的一種方法。在低于-15℃下,快速將細胞凍結(jié),并保持細胞完整,然后在真空中使水分升華致干。在此環(huán)境中,微生物的生長和代謝都暫時停止,不易發(fā)生變異,故可長時間保存,一般為5～10年,最多可達15年之久。此法兼?zhèn)淞说蜏?、干燥及缺氧幾方面條件,使微生物可以保存較長時間,但手續(xù)較麻煩,需要一定的設(shè)備。113、菌種保藏中心我國由于1979年7月成立了中國微生物菌種保藏管理委員會(CCCCM),----普通微生物菌種保藏管理中心(CCGMC)--中科院微生物所,北京(AS),真菌、細菌;中科院武漢病毒研究所,武漢(AS-IV),病毒。----農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心(ACCC)---中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院土壤肥料研究所,北京(ISF)。

----工業(yè)微生物菌種保藏管理中心(CICC)---輕工業(yè)部12

----工業(yè)微生物菌種保藏管理中心(CICC)---輕工業(yè)部食品發(fā)酵工業(yè)科學(xué)研究所,南京(ID),真菌;衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所,北京(NICPBP),細菌；中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒研究所,北京(IV),病毒。

----抗菌素菌種保藏管理中心(CACC)---中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院抗菌素研究所北京(IA)；四川抗菌素工業(yè)研究所,成都(SIA),新抗菌素菌種;華北制藥廠抗菌素研究所,石家莊(IANP),生產(chǎn)用抗菌素菌種。

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