DB32-T 3104-2016紅掌種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.20

B62

備案號(hào)：51449-2016DB32

江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB32/T3104-2016

紅掌種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程

TechnicalregulationfortissuecultureseedlingsofAnthura

2016-09-20發(fā)布2016-11-20實(shí)施

江蘇省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

DB32/T3104-2016

紅掌種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了紅掌種苗組培快繁的設(shè)施設(shè)備和操作流程。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于紅掌組培苗的生產(chǎn)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

GB/T8321（所有部分）農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則

JB/T10594-2006日光溫室和塑料大棚結(jié)構(gòu)與性能要求

3設(shè)施設(shè)備

3.1場(chǎng)地

選擇交通便捷、地勢(shì)平坦、光照充足、通風(fēng)良好、水電配套、排灌便利的場(chǎng)地進(jìn)行設(shè)施建設(shè)。

3.2主要設(shè)施

3.2.1準(zhǔn)備室

用于玻璃、塑料器皿及其他實(shí)驗(yàn)用具的清洗、干燥和保存，藥品的稱(chēng)量、溶解、配制，培養(yǎng)基的

配制、分裝、包扎和滅菌，以及植物材料的預(yù)處理、培養(yǎng)材料的觀察分析等。

3.2.2接種室

放置超凈工作臺(tái)，開(kāi)展植物材料的無(wú)菌操作，包括外植體的消毒、接種、培養(yǎng)物的轉(zhuǎn)移和試管苗

的擴(kuò)繁、生根等。

3.2.3培養(yǎng)室

用于接種材料的無(wú)菌培養(yǎng)和觀察，一般要求溫度在25±2℃，光照強(qiáng)度1500Lux～3000Lux，光照

周期12h/12h（光/暗）。

3.2.4溫室

1

DB32/T3104-2016

用于試管苗的煉苗、移栽和生長(zhǎng)，根據(jù)實(shí)際情況可選擇玻璃溫室或薄膜溫室，必須具備夏季可調(diào)

節(jié)室內(nèi)溫度至32℃以下，冬季可調(diào)節(jié)室內(nèi)溫度至15℃以上的條件，可以噴水補(bǔ)濕，并且具有良好的防

蟲(chóng)隔離條件。

設(shè)施建造按JB/T10594-2006中規(guī)定執(zhí)行。

3.3主要設(shè)備

3.3.1準(zhǔn)備室設(shè)備

蒸餾水器、冰箱、培養(yǎng)箱、天平、電熱磁攪拌器、酸度計(jì)、高壓蒸汽滅菌鍋、烘箱。

3.3.2接種室設(shè)備

超凈工作臺(tái)（水平送風(fēng)）、雙筒實(shí)體顯微鏡或生物顯微鏡、空調(diào)、紫外燈或空氣凈化裝置。

3.3.3培養(yǎng)室設(shè)備

培養(yǎng)架、紫外燈或空氣凈化裝置、空調(diào)、自動(dòng)記錄溫度、濕度計(jì)。

4操作流程

4.1接種前準(zhǔn)備工作

4.1.1培養(yǎng)基配制和滅菌

以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，添加瓊脂6.0g/L～6.5g/L，蔗糖30g/L，調(diào)節(jié)PH值為5.6～5.8；

誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)基：MS+BA0.2mg/L～0.5mg/L+2.4-D2.0mg/L～3.0mg/L+NAA0.1mg/L～0.2mg/L；

分化培養(yǎng)基：MS+BA0.5mg/L～1.0mg/L+NAA0.2mg/L；

芽增殖培養(yǎng)基：MS+BA0.1mg/L～0.5mg/L+NAA0.1mg/L～0.2mg/L；

生根培養(yǎng)基為：1/2MS+NAA0.1mg/L～0.3mg/L+IBA0.1mg/L～0.3mg/L。

培養(yǎng)基配制完畢后，分裝至組培瓶中。在121℃下高壓滅菌15min～20min，并盡快取出使其冷卻備

用。

4.1.2超凈工作臺(tái)消毒

接種前半小時(shí)用70%酒精噴霧、擦洗超凈工作臺(tái)；然后打開(kāi)用紫外燈照射20min并通風(fēng)。

在點(diǎn)燃酒精燈的情況下嚴(yán)禁用酒精噴霧。

4.1.3接種人員的準(zhǔn)備

①入無(wú)菌室前洗手，洗凈指甲中的污物。

②入室時(shí)穿戴上經(jīng)過(guò)消毒的工作服、帽子、口罩和鞋子等。

③操作前和操作中經(jīng)常用70%酒精棉球擦手。

2

DB32/T3104-2016

4.2外植體接種

4.2.1外植體選取和清洗

選擇生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的植株作為母株，以其幼嫩的葉片為外植體。

外植體在加有適量洗衣粉的自來(lái)水中浸泡后，用自來(lái)水沖洗20min～30min。

4.2.2接種工具的消毒

將刀和鑷子等接種工具浸入95%酒精中，使用之前進(jìn)行燃燒滅菌，然后放涼備用。

燃燒時(shí)應(yīng)注意浸入酒精的一端斜向下進(jìn)行，不可倒置，防止燒傷。

4.2.3外植體的滅菌

將外植體置于已滅菌的超凈工作臺(tái)上，用無(wú)菌的吸水紙吸去水分，放入70%酒精中表面滅菌15秒，

然后再用0.1%的升汞滅菌8min～10min，無(wú)菌水浸洗3次～5次。

消毒時(shí)間應(yīng)根據(jù)生長(zhǎng)季節(jié)和材料的帶菌程度靈活調(diào)整，如果接種后污染嚴(yán)重則相應(yīng)增加滅菌時(shí)間。

4.2.4材料切割

將葉片平放在無(wú)菌濾紙上進(jìn)行切割操作，先用解剖刀沿主脈切開(kāi)葉片，再將兩側(cè)縱切成3mm左右寬

的條形，然后橫切，使外植體保持3mm左右見(jiàn)方塊待用。

4.2.5接種

接種時(shí)以左手拿培養(yǎng)瓶，用右手輕輕取下蓋子；將培養(yǎng)瓶口靠近酒精燈火焰處，保存瓶口傾斜，然

后用鑷子將材料送入瓶中。

接種外植體所用培養(yǎng)基為誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)基。接種時(shí)，使接種塊和培養(yǎng)基緊密接觸，并使其在培養(yǎng)容

器內(nèi)分布均勻。接種完畢立即蓋好瓶蓋并作好標(biāo)記，注明材料名稱(chēng)、接種日期等事項(xiàng)。

接種結(jié)束后將組培瓶整齊、均勻擺放在培養(yǎng)架上。

培養(yǎng)期間定期觀察培養(yǎng)物的生長(zhǎng)情況，并作好記載；如發(fā)現(xiàn)污染物，應(yīng)立即取出，待高壓滅菌后清

洗或丟棄。

4.3培養(yǎng)

4.3.1分化培養(yǎng)

愈傷組織生長(zhǎng)50d左右可將愈傷組織切割成2mm～3mm的小塊，均勻接種于分化培養(yǎng)基表面。

4.3.2增殖培養(yǎng)

將分化的不定芽從愈傷組織上切下，并使芽的基部插入增殖培養(yǎng)基中；一般4周～5周繼代一次。

3

DB32/T3104-2016

4.3.3生根培養(yǎng)

將增殖的芽叢切割成單個(gè)完整的幼芽，并使其基部插入生根培養(yǎng)基中；一般生根培養(yǎng)3周～4周能

發(fā)育出完整的根系，即可用于煉苗和移栽。

4.4煉苗移栽

4.4.1煉苗

移栽前3天，打開(kāi)根系發(fā)育良好組培苗的瓶蓋，加注少量無(wú)菌水（水深0.5cm左右）煉苗。

移栽前1天，將培養(yǎng)瓶移至溫室中接受散射陽(yáng)光的照射。

4.4.2移栽基質(zhì)

使用專(zhuān)用育苗基質(zhì)，提前1天填充穴盤(pán)并噴水備用。

4.4.3移栽

取出試管苗，以一手的拇指和食指輕捏莖葉部，在流水下輕輕洗凈根部附著的瓊脂。一定要盡量

減少對(duì)根系的傷害。移栽時(shí)每穴栽1苗，栽后及時(shí)澆透水。根據(jù)季節(jié)情況，剛出瓶移栽的小苗應(yīng)加遮

陽(yáng)網(wǎng)，光照強(qiáng)度在10000lux～20000lux。

4.4.4消毒

移栽后立即噴施一遍800倍～1000倍的多菌靈、百菌清或托布津等水溶液，以防小苗感病。

_________________________________

4

DB32/T3104-2016

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按GB/T1.1-2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫(xiě)》的規(guī)定編寫(xiě)。

本標(biāo)準(zhǔn)由江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院提出。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：葉曉青、佘建明、梁麗建、賈新平、鄧衍明、孫曉波、湯日圣。

I

DB32/T3104-2016

紅掌種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了紅掌種苗組培快繁的設(shè)施設(shè)備和操作流程。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于紅掌組培苗的生產(chǎn)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

GB/T8321（所有部分）農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則

JB/T10594-2006日光溫室和塑料大棚結(jié)構(gòu)與性能要求

3設(shè)施設(shè)備

3.1場(chǎng)地

選擇交通便捷、地勢(shì)平坦、光照充足、通風(fēng)良好、水電配套、排灌便利的場(chǎng)地進(jìn)行設(shè)施建設(shè)。

3.2主要設(shè)施

3.2.1準(zhǔn)備室

用于玻璃、塑料器皿及其他實(shí)驗(yàn)用具的清洗、干燥和保存，藥品的稱(chēng)量、溶解、配制，培養(yǎng)基的

配制、分裝、包扎和滅菌，以及植物材料的預(yù)處理、培養(yǎng)材料的觀察分析等。

3.2.2接種室

放置超凈工作臺(tái)，開(kāi)展植物材料的無(wú)菌操作，包括外植體的消毒、接種、培養(yǎng)物的轉(zhuǎn)移和試管苗

的擴(kuò)繁、生根等。

3.2.3培養(yǎng)室

用于接種材料的無(wú)菌培養(yǎng)和觀察，一般要求溫度在25±2℃，光照強(qiáng)度1500Lux～3000Lux，光照

周期12h/12h（光/暗）。

3.2.4溫室

1

DB32/T3104-2016

用于試管苗的煉苗、移栽和生長(zhǎng)，根據(jù)實(shí)際情況可選擇玻璃溫室或薄膜溫室，必須具備夏季可調(diào)

節(jié)室內(nèi)溫度至32℃以下，冬季可調(diào)節(jié)室內(nèi)溫度至15℃以上的條件，可以噴水補(bǔ)濕，并且具有良好的防

蟲(chóng)隔離條件。

設(shè)施建造按JB/T10594-2006中規(guī)定執(zhí)行。

3.3主要設(shè)備

3.3.1準(zhǔn)備室設(shè)備

蒸餾水器、冰箱、培養(yǎng)箱、天平、電熱磁攪拌器、酸度計(jì)、高壓蒸汽滅菌鍋、烘箱。

3.3.2接種室設(shè)備

超凈工作臺(tái)（水平送風(fēng)）、雙筒實(shí)體顯微鏡或生物顯微鏡、空調(diào)、紫外燈或空氣凈化裝置。

3.3.3培養(yǎng)室設(shè)備

培養(yǎng)架、紫外燈或空氣凈化裝置、空調(diào)、自動(dòng)記錄溫度、濕度計(jì)。

4操作流程

4.1接種前準(zhǔn)備工作

4.1.1培養(yǎng)基配制和滅菌

以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，添加瓊脂6.0g/L～6.5g/L，蔗糖30g/L，調(diào)節(jié)PH值為5.6～5.8；

誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)基：MS+BA0.2mg/L～0.5mg/L+2.4-D2.0mg/L～3.0mg/L+NAA0.1mg/L～0.2mg/L；

分化培養(yǎng)基：MS+BA0.5mg/L～1.0mg/L+NAA0.2mg/L；

芽增殖培養(yǎng)基：MS+BA0.1mg/L～0.5mg/L+NAA0.1mg/L～0.2mg/L；

生根培養(yǎng)基為：1/2MS+NAA0.1mg/L～0.3mg/L+IBA0.1mg/L～0.3mg/L。

培養(yǎng)基配制完畢后，分裝至組培瓶中。在121℃下高壓滅菌15min～20min，并盡快取出使其冷卻備

用。

4.1.2超凈工作臺(tái)消毒

接種前半小時(shí)用70%酒精噴霧、擦洗超凈工作臺(tái)；然后打開(kāi)用紫外燈照射20min并通風(fēng)。

在點(diǎn)燃酒精燈的情況下嚴(yán)禁用酒精噴霧。

4.1.3接種人員的準(zhǔn)備

①入無(wú)菌室前洗手，洗凈指甲中的污物。

②入室時(shí)穿戴上經(jīng)過(guò)消毒的工作服、帽子、口罩和鞋子等。

③操作前和操作中經(jīng)常用70%酒精棉球擦手。

2

DB32/T3104-2016

4.2外植體接種

4.2.1外植體選取和清洗

選擇生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的植株作為母株，以其幼嫩的葉片為外植體。

外植體在加有適量洗衣粉的自來(lái)水中浸泡后，用自來(lái)水沖洗20min～30min。

4.2.2接種工具的消毒

將刀和鑷子等接種工具浸入95%酒精中，使用之前進(jìn)行燃燒滅菌，然后放涼備用。

燃燒時(shí)應(yīng)注意浸入酒精的一端斜向下進(jìn)行，不可倒置，防止燒傷。

4.2.3外植體的滅菌

將外植體置于已滅菌的超凈工作臺(tái)上，用無(wú)菌的吸水紙吸去水分，放入70%酒精中表面滅菌15秒，

然后再用0.1%的升汞滅菌8min～10min，無(wú)菌水浸洗3次～5次。

消毒時(shí)間應(yīng)根據(jù)生長(zhǎng)季節(jié)和材料的帶菌程度靈活調(diào)整，如果接種后污染嚴(yán)重則相應(yīng)增加滅菌時(shí)間。

4.2.4材料切割

將葉片平放在無(wú)菌濾紙上進(jìn)行切割操作，先用解剖刀沿主脈切開(kāi)葉片，再將兩側(cè)縱切成3mm左右寬

的條形，然后橫切，使外植體保持3mm左右見(jiàn)方塊待用。

4.2.5接種

接種時(shí)以左手拿培養(yǎng)瓶，用右手輕輕取下蓋子；將培養(yǎng)瓶口靠近酒精燈火焰處，保存瓶口傾斜，然

后用鑷子將材料送入瓶中。

接種外植體所用培養(yǎng)基為誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)基。接種時(shí)，使接種塊和培養(yǎng)基緊密接觸，并使其在培養(yǎng)容

器內(nèi)分布均勻。接種完畢立即蓋好瓶蓋并作好標(biāo)記，注明材料名稱(chēng)、接種日期等事項(xiàng)。

接種結(jié)束后將組培瓶整齊、均勻擺放在培養(yǎng)架上。

培養(yǎng)期間定期觀察培養(yǎng)物的生長(zhǎng)情況，并作好記載；如發(fā)現(xiàn)污染物，應(yīng)立即取出，待高壓滅菌后清

洗或丟棄。

4.3培養(yǎng)

4.3.1分化培養(yǎng)

愈傷組織生長(zhǎng)50d左右可將愈傷組織切割成2mm～3mm的小塊，均勻接種于分化培養(yǎng)基表面。

4.3.2增殖培養(yǎng)

將分化的不定芽從愈傷組織上切下，并使芽的基部插入增殖培養(yǎng)基中；一般