驗(yàn)證報(bào)告1-蜂蜜中氯霉素和甲硝唑殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

蜂蜜中氯霉素和甲硝唑殘留量測定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法驗(yàn)證報(bào)告2.材料準(zhǔn)備(1)液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(WatersAcquityUPLC-TQS)(2)分析天平(3)渦旋混合器(4)冷凍離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于10000r/min(5)超聲儀科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)編號(hào)GBW(E)100568;有效期24個(gè)月(定值日期：2022年9月);批號(hào)(3)柱溫：40℃(4)進(jìn)樣量：3μL(6)梯度洗脫條件見表1.表1液相梯度洗脫程序時(shí)間(min)流動(dòng)相B初始55304055模式：噴霧電壓(KV)3錐孔電壓(V)離子源溫度(℃`脫溶劑氣流量(L/Hr)錐孔反吹氣流量(L/Hr)霧化氣壓力(bar)7模式：噴霧電壓(KV)錐孔電壓(V)離子源溫度(℃)脫溶劑氣流量(L/Hr)錐孔反吹氣流量(L/Hr)霧化氣壓力(bar)7檢測方式：MRM(多反應(yīng)監(jiān)測),參數(shù)見表2?；衔镒与x子錐孔電氯霉素氯霉素-D5甲硝唑甲硝唑-D4對(duì)無結(jié)晶的實(shí)驗(yàn)室樣品，將其攪拌均勻。對(duì)有結(jié)晶置于不超過60℃的水浴中溫?zé)?，振蕩，將樣品全部融化后攪勻，冷卻至室溫。稱取蜂蜜5.00g(精確至0.01g)于50mL離心管中，分別加入40μL100ng/mLD5-氯霉素、D4-甲硝唑應(yīng)用液，加水5mL,混勻溶解，再加入10mL乙腈，渦旋混勻，超聲30min,10000rpm離心10min,吸取上層乙腈5mL入10mL試管。將接出的流出液40℃水浴條件下氮吹至近干，用水定容至1mL,過膜，上機(jī)測取樣量按5.00g計(jì)算，以定性離子通道中3倍信噪比(S/N)對(duì)應(yīng)的濃度為方法定性限，10倍信噪比(S/N)對(duì)應(yīng)的濃度為方法定量限。100ng/mL的D5-氯霉素、D4-甲硝唑中間液，加水2.5mL,混勻溶解，再加入10mL乙腈，渦旋混勻，超聲30min,10000rpm離心10min,吸取上層乙腈5mL入10mL試管。將5mL待凈化液直接上樣C18和NH?雙層復(fù)合固相萃取柱，接收全部流出液，濾過液40℃水浴條件下氮吹至近干，用水定容至1mL,過膜，4.4.1加標(biāo)樣品的制備：準(zhǔn)確稱取蜂蜜參考樣2.50g(精確至0.01g)于50mL離2.5mL,混勻溶解，再加入10mL乙腈，渦旋混勻，超聲30min,10000rpm離心10min,吸取上層乙腈5mL入10mL試管。將5mL待凈化液直接上樣C18和NH2雙層復(fù)合固相萃取柱，接收全部流出液，濾過液40℃水浴條件下氮吹至近干，用水定容至1mL,過膜，上機(jī)測定。結(jié)果見附表。實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于蜂蜜中氯霉素附表附表1溶液中甲硝唑、氯霉素的校準(zhǔn)曲線及靈敏度保留時(shí)間線性范圍r定量限甲硝唑氯霉素附表2蜂蜜樣品中準(zhǔn)確度和精密度回收率范圍甲硝唑氯霉素附表3.參考樣測定結(jié)果判定0回收率名稱甲硝唑氯霉素1.溶液中氯霉素、甲硝唑及內(nèi)標(biāo)的色譜圖2.空白基質(zhì)中氯霉素、甲硝唑及內(nèi)標(biāo)的色譜圖4.參考樣色譜圖5.參考樣加標(biāo)樣品色譜圖22“220~:T026o230“220~:T026o230圖2.空白基質(zhì)中氯霉素、甲硝唑及內(nèi)標(biāo)的EIC色譜圖CK-1XEVO-TQS#WAA1014圖4.參考樣中甲硝唑及內(nèi)標(biāo)的EIC色譜圖W2o~”CKJB-1XEVO-CKJB-1