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第第頁人可溶性細(xì)胞間粘附分子1(sICAM—1)ELISA試劑盒說明書產(chǎn)品名稱:人可溶性細(xì)胞間粘附分子1(sICAM1)ELISA試劑盒英文名稱:Human(sICAM1)ELISAKit檢測方法雙抗夾心法/酶聯(lián)免疫方法規(guī)格96T/48T反應(yīng)時間3.5h反應(yīng)性Human樣本體積100μL檢測范圍:12.5ng/mL–400ng/mL。特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)仿佛物交叉反應(yīng)。重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10%,板間變異系數(shù)小于15%。有效期:6個月保管條件:28℃可檢測多種生物樣品,包含:血清、血漿、體液如尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和細(xì)胞/組織裂解液等。本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中人可溶性細(xì)胞間粘附分子1(sICAM1)的含量?!驹囼炘怼勘驹噭┖胁捎秒p抗體夾心ELISA法。用抗人sICAM1抗體包被于酶標(biāo)板上,試驗時樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的人sICAM1會與包被抗體結(jié)合。依次加入生物wu素化的抗人sICAM1抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素??谷藄ICAM1抗體與結(jié)合在包被抗體上的人sICAM1結(jié)合、生物wu素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色,加停止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波優(yōu)點測OD值,sICAM1濃度與OD450值之間呈正比,通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品中sICAM1的濃度。試劑盒的構(gòu)成96/48微孔板(1塊,已包被抗人可溶性細(xì)胞間粘附分子1(sICAM1)ELISA試劑盒單抗)、樣品稀釋液(1瓶)、第一抗體工作液(1瓶)、酶標(biāo)抗體工作液(1瓶)、底物稀釋液(1瓶)、停止液(1瓶)、洗滌液(20×,1瓶)、標(biāo)準(zhǔn)品(2000pg/ml,2管,凍干粉)、OPD片(3片)、坐標(biāo)紙(1張)。試驗準(zhǔn)備工作1、試劑配制:洗滌液按1:20三蒸水稀釋;標(biāo)準(zhǔn)品在用前每管加入200l蒸餾水溶解即可(實在見說明書);底物工作液應(yīng)在顯色前510min將OPD片放入底物稀釋液中溶解,每片加5ml液。2、標(biāo)本收集:手記血清或體液盡早檢測,2~8℃保管一天需更長時間須冷凍(20℃)保管,避開反復(fù)凍融;組織(胎肝、胎腦等)試驗前一天組織勻漿,用90%體積RIPA裂解液(PH8.0,50mMTrisHCl、1%NP40、,0.25%sodiumdeoxycholate、150mMNaCl、1mMEDTA)和10%體積的10mMPMSF進(jìn)行組織勻漿(10%),冰上裂解30min,12000×20min后取上清,4℃待用。3、器材準(zhǔn)備:酶標(biāo)儀、37℃恒溫烤箱、濾紙、托盤、量筒、燒杯、各種規(guī)格的移液器、離心管、管架和廢液缸等。三蒸水自備。操作步驟1、設(shè)立標(biāo)準(zhǔn)孔8孔(依據(jù)樣品蛋白濃度可調(diào)整為6孔),每孔中先各加入樣品稀釋液100ul,第一孔再加標(biāo)準(zhǔn)品100ul,混勻后用移液器吸出100ul,移至第二孔,如此反復(fù)作對倍稀釋至第7孔,最終,從第7孔中吸出100ul棄去,使之體積均為100ul。第8孔為空白對照。2、加樣:待測樣品孔中每孔各加入待測樣品100ul。3、將反應(yīng)板置于37℃×120min。4、洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌46次,向濾紙上扣干。5、每孔中加入第一抗體工作液50ul。6、將反應(yīng)板充分混勻后置37℃×60min。7、洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4~6次,向濾紙上扣干。8、每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。9、將反應(yīng)板置于37℃120min。10、洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4~6次,向濾紙上扣干。11、每孔中加入底物工作液100ul,置于37℃暗處反應(yīng)5~10min。12、每孔中加入50ul停止液混勻。13、用酶標(biāo)儀在492nm處測吸光值。人可溶性細(xì)胞間粘附分子1(sICAM1)ELISA試劑盒計算結(jié)果與推斷1、以標(biāo)準(zhǔn)品1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、0pg/ml之OD值在半對數(shù)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。2、全部OD值都應(yīng)減去空白管值后再計算。依據(jù)樣品OD值在該標(biāo)準(zhǔn)曲線圖上查出或依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線公式換算出相應(yīng)樣品中TNFa含量。注意事項1、以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待查樣品均建議做復(fù)孔,每次測定均要做標(biāo)準(zhǔn)孔。2、本試劑盒宜置20℃冷藏保管。3、本人ELISA試劑盒取出的試劑在室溫(20~25℃)環(huán)境下使用,溶液應(yīng)輕輕搖勻后使用。4、本試劑盒含2M硫酸,不要將它與含疊氮dan化鈉的廢物混在一起。5、板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。6、避開交叉污染。如洗滌時向樣品待測蛋白含量可能高的一側(cè)傾倒。7、提前24h打開烤箱預(yù)熱。8、底物工作液應(yīng)在顯色前5~10min配制。若配制時間過長,會變質(zhì)。9、甩盡孔內(nèi)液體,每孔加350ul左右洗滌液,靜止30s后甩盡。尤其加抗體工作
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