常用病毒性疫苗的制備

常用病毒性疫苗的制備

-以雞新城疫Ⅰ系弱毒疫苗為例

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆针u新城疫Ⅰ系弱毒疫苗的制備程序。二、實(shí)驗(yàn)器材雞新城疫Ⅰ系苗毒種、受精蛋、孵化箱、無菌生理鹽水、5%碘酊、75%酒精、滅菌鑷子、無菌吸管、滅菌瓶、青霉素、鏈霉素、無菌注射器、酒精燈、超凈工作臺(tái)等。常用病毒性疫苗的制備

-以雞新城疫Ⅰ系弱毒疫苗為例

三、實(shí)驗(yàn)方法1.毒種由中國(guó)獸藥監(jiān)察所負(fù)責(zé)鑒定、保管和供給。對(duì)雞胚的最小致死量不低于10-6、0.1毫升。雞胚于接種后24～72h內(nèi)死亡，胚體病變明顯。對(duì)紅細(xì)胞凝集價(jià)在1:80以上。毒種對(duì)雞的最小免疫量不低于10-6、0.1毫升。安全無菌。常用病毒性疫苗的制備

-以雞新城疫Ⅰ系弱毒疫苗為例

2.Ⅰ系苗濕苗的制造（1）雞胚選擇與孵化健康種雞所產(chǎn)的新鮮卵。38.5～39℃、相對(duì)濕度60%～70%、孵化9～11日齡。雞胚接種前，應(yīng)照蛋挑選活力強(qiáng)的發(fā)育胚，并劃好氣室部位和接種部位。常用病毒性疫苗的制備

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（2）病毒的雞胚培養(yǎng)無菌生理鹽水將毒種作1:100倍稀釋，接種9～11日齡雞胚的尿囊腔內(nèi)，每胚0.1ml，接種后繼續(xù)置孵化箱內(nèi)孵化。以后每日上下午各照蛋1用石蠟將接種孔封閉，次。胚胎應(yīng)于接種后24～48h內(nèi)死亡（一般多在36h前后死亡）。將死胚立即取出，氣室向上，置0～10℃冷卻4～24h，凡在24h內(nèi)和48h后死亡的胚均棄去不用。常用病毒性疫苗的制備

-以雞新城疫Ⅰ系弱毒疫苗為例

（3）病毒的收獲將冷卻后的死胚取出，氣室部向上并涂擦5%碘酊，用滅菌鑷子敲破氣室部位的卵殼并剔除之，揭出卵殼膜，剪破絨毛尿囊膜和羊膜，以無菌吸管吸取尿囊液，裝入滅菌瓶?jī)?nèi)，若干胚的胚液混合為一組。常用病毒性疫苗的制備

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（4）收毒后處理每毫升病毒液加入青霉素和鏈霉素各500單位，放入冰箱保存，經(jīng)檢驗(yàn)合格后即成疫苗。收獲的雞胚液應(yīng)逐瓶進(jìn)行無菌檢驗(yàn)，即每瓶抽疫苗0.2ml，分別接種于鮮血瓊脂斜面和厭氣肉肝湯培養(yǎng)基內(nèi)，在37℃培養(yǎng)72h，應(yīng)無細(xì)菌生長(zhǎng)。然后將無菌生長(zhǎng)之疫苗混合后，分別裝小瓶或安瓿內(nèi)，0.5～1ml/瓶。瓶上注明疫苗名稱、批號(hào)及收獲日期。以上各項(xiàng)操作均要在無菌室或無菌罩內(nèi)無菌操作進(jìn)行，要嚴(yán)防雞新城疫強(qiáng)毒污染。常用病毒性疫苗的制備

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3.疫苗檢驗(yàn)（1）無菌檢驗(yàn)每批疫苗任抽5瓶作為樣品，供作無菌檢驗(yàn)，方法同上，應(yīng)無細(xì)菌生長(zhǎng)。在做細(xì)菌培養(yǎng)的同時(shí)，亦可注射小鼠若干，每只皮下注射0.2ml，觀察10d，應(yīng)全部健活。若有細(xì)菌生長(zhǎng)或小鼠死亡者，此苗廢棄。常用病毒性疫苗的制備

-以雞新城疫Ⅰ系弱毒疫苗為例

（2）安全試驗(yàn)用4～12月齡未經(jīng)雞新城疫疫苗免疫的健康雞3只，每只雞肌注100倍稀釋疫苗1ml，觀察10～14d，應(yīng)無任何反應(yīng)，或有輕度反應(yīng)，且在14日內(nèi)恢復(fù)者，認(rèn)為合格。有嚴(yán)重反應(yīng)不能康復(fù)者，應(yīng)重復(fù)檢測(cè)一次。常用病毒性疫苗的制備

-以雞新城疫Ⅰ系弱毒疫苗為例

（3）效力試驗(yàn)方法一每批疫苗抽樣1瓶，用無菌生理鹽水將疫苗按其含毒量稀釋成10-5，接種10日齡的雞胚5個(gè)，每胚尿囊內(nèi)接種0.1毫升。雞胚應(yīng)在24-72h全部死亡。胎兒有明顯的病變?；旌想u胚液對(duì)1%雞紅細(xì)胞的凝集價(jià)在1:80以上者為合格。常用病毒性疫苗的制備

-以雞新城疫Ⅰ系弱毒疫苗為例

方法二選4～12月齡的健康雞若干只，分為試驗(yàn)組和對(duì)照組。試驗(yàn)組每只雞以105倍稀釋疫苗肌肉注射1毫升，或用鋼筆尖蘸取1000倍稀釋的疫苗于翅膀內(nèi)側(cè)無血管處皮下刺種2次。觀察14天，與對(duì)照組一起以雞新城疫強(qiáng)毒攻擊。劑量為每只雞肌注1000倍稀釋的新鮮雞胚強(qiáng)毒液1毫升，觀察10～14天，試驗(yàn)組