保健食品衛(wèi)生學(xué)理化檢驗(yàn)規(guī)范

保健食品衛(wèi)生學(xué)

理化檢驗(yàn)規(guī)范

（征求意見稿）

StandardsforHygienicPhysicaland

ChemicalExaminationofHealthFood

目錄

第一部分總則....................................................................3

一、主題內(nèi)容和適用范圍........................................................4

二、基本要求...................................................................5

第二部分二十五種功效成分和標(biāo)志性成分檢驗(yàn)方法..................................8

一、保健食品中紅景天昔的測定.................................................9

二、保健食品中大蒜素的測定....................................................14

三、保健食品中蘆薈甘的測定....................................................18

四、保健食品中肉堿的測定......................................................22

五、保健食品中a-亞麻酸、Y-亞麻酸的測定.....................................28

六、保健食品中人參皂昔的測定..................................................33

七、保健食品中原花青素的測定..................................................38

八、保健食品中核昔酸的測定...................................................40

九、保健食品中洛伐他汀的含量測定.............................................42

十、保健食品中植物類功效成分鑒別試驗(yàn)方法.....................................47

十一、保健食品中柳皮素、山奈素、異鼠李素的含量測定...........................57

十二、保健食品中茶氨酸的測定.................................................62

十三、保健食品中五味子醇甲、五味子甲素和乙素的測定...........................65

十四、保健食品中腺昔的測定...................................................67

十五、保健食品中總皂音的測定..................................................72

十六、保健食品中總黃酮的測定..................................................76

十七、保健食品中殼聚糖脫乙酰度的測定.........................................79

十八、蚓激酶活性的測定方法...................................................81

十九、保健食品中總蔥酸的測定.................................................84

二十、保健食品中10-羥基癸烯酸的測定..........................................87

二H■?一、保健食品中絞股藍(lán)皂普XLIX的測定.....................................92

二十二、保健食品中氨基葡萄糖的測定...........................................96

二十三、保健食品中總?cè)降臏y定...............................................103

二十四、保健食品中蟲草素的測定...............................................106

二十五、保健食品中蟲草酸的測定...............................................110

第三部分十一種溶劑殘留的測定.................................................114

第四部分興奮劑及違禁成分測定.................................................120

第五部分不同劑型及特定原料類別產(chǎn)品的衛(wèi)生學(xué)檢測項(xiàng)目..........................124

第六部分特定原料類別產(chǎn)品的功效成分和標(biāo)志性成分檢測項(xiàng)目......................126

附錄...........................................................................128

附錄1部分功效成分/標(biāo)志性成分檢測方法國家標(biāo)準(zhǔn)..............................128

附錄2常用衛(wèi)生指標(biāo)檢測方法..................................................129

第一部分

總則

GeneralPrinciples

一、主題內(nèi)容和適用范圍

ContentandScopeofApplication

1.本規(guī)范規(guī)定了保健食品和原料的衛(wèi)生學(xué)技術(shù)要求的檢驗(yàn)項(xiàng)目及方法。

2.本規(guī)范適用于保健食品的注冊、復(fù)核和備案檢驗(yàn)、監(jiān)督抽驗(yàn)、風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測及常規(guī)

檢驗(yàn)項(xiàng)目的確定和方法的選擇。

二、基本要求

BasicRequirements

1.凡保健食品，應(yīng)符合GB16740《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)保健食品》的各項(xiàng)要求。

附表1所列檢測項(xiàng)目是對(duì)該標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)充規(guī)定。

2.保健食品中食品添加劑的使用應(yīng)符合GB2760的規(guī)定和（或）有關(guān)規(guī)定。檢

測機(jī)構(gòu)可根據(jù)實(shí)際需要，按產(chǎn)品配方檢測合成色素、防腐劑、甜味劑及抗氧化劑

的含量。

3.保健食品的包裝材料應(yīng)符合GB4806.1《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品接觸材料及

制品通用安全要求》的要求。

4.進(jìn)行輻照滅菌的產(chǎn)品，其輻照源、輻照劑量等均應(yīng)符合相應(yīng)的國家標(biāo)準(zhǔn)、行

業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或有關(guān)要求。

5.檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)受理保健食品檢測時(shí)，申報(bào)單位應(yīng)提供該產(chǎn)品的配方、工藝、產(chǎn)品

技術(shù)要求及功效成分/標(biāo)志性成分檢測方法研究驗(yàn)證等相關(guān)資料。

6.申請(qǐng)單位在對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行功效成分/標(biāo)志性成分檢測時(shí)，如國家標(biāo)準(zhǔn)中所提供的

檢測方法不適用于該產(chǎn)品檢驗(yàn)時(shí)，可優(yōu)先選擇本規(guī)范第二部分提供的檢測方法，

并進(jìn)行必要的方法學(xué)適用性研究；如規(guī)范中所提供的檢測方法不適用于該產(chǎn)品檢

驗(yàn)時(shí)，申請(qǐng)單位可選擇行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、國際上權(quán)威分析方法進(jìn)行測定，并進(jìn)行必要的

方法適用性研究。注冊檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)對(duì)所附材料進(jìn)行審核，必要時(shí)進(jìn)行有關(guān)驗(yàn)證和方

法確認(rèn)，如申報(bào)單位提供的方法不適合送檢的樣品時(shí)，注冊檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)不得擅自修

改，應(yīng)將有關(guān)情況反饋申報(bào)單位，由其進(jìn)行研究并提供方法后，再對(duì)送檢樣品進(jìn)

行試驗(yàn)，確保試驗(yàn)方法與送檢產(chǎn)品技術(shù)要求中規(guī)定的方法一致。復(fù)核檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)

按照申報(bào)單位提交的檢驗(yàn)方法進(jìn)行檢驗(yàn)并出具復(fù)核檢驗(yàn)報(bào)告。

7.保健食品中原料和輔料應(yīng)符合《保健食品注冊與備案管理辦法》中原、輔料

質(zhì)量要求的規(guī)定，并符合相應(yīng)的食品國家標(biāo)準(zhǔn)。原料若為植物提取物或者原料及

輔料加工過程中使用、間接引入有機(jī)溶劑時(shí)，涉及的有機(jī)溶劑應(yīng)符合GB2760《食

品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》附錄C中食品工業(yè)用加工助劑使用名單

規(guī)定，或其他相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的要求。企業(yè)可根據(jù)產(chǎn)品質(zhì)量控制需要，采用本規(guī)范中第

三部分保健食品中十一種溶劑殘留的測定方法將溶劑殘留檢測列入原料及產(chǎn)品

的技術(shù)要求。

8.針對(duì)各類功效的保健食品，需參照本規(guī)范第四部分興奮劑及違禁成分測定方

法進(jìn)行非法添加篩查。同時(shí)，需進(jìn)行配方分析，如明確存在原料帶入情況的指標(biāo),

應(yīng)檢測相關(guān)項(xiàng)目，報(bào)出檢測結(jié)果，但不作為非法添加結(jié)果報(bào)送，除結(jié)果異常外。

9.不同劑型及特定原料類別產(chǎn)品的衛(wèi)生學(xué)理化檢驗(yàn)應(yīng)包括本規(guī)范第五部分中規(guī)

定的相應(yīng)檢測項(xiàng)目。

10.保健食品應(yīng)具有與產(chǎn)品配方和申報(bào)的保健功能相適應(yīng)的功效成分或標(biāo)志性

成分，申報(bào)時(shí)須提供配方中主要原料所含的功效成分或標(biāo)志性成分的檢測結(jié)果、

檢方法及方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果。第六部分列出了原料類型及相應(yīng)檢測項(xiàng)目，以所列原

料為主的產(chǎn)品須檢測表中規(guī)定的項(xiàng)目。

11.普通食品形態(tài)產(chǎn)品應(yīng)檢測并制定凈含量及允許負(fù)偏差指標(biāo)，需要按照產(chǎn)品質(zhì)

量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定規(guī)格的最小包裝確定檢測依據(jù)，指標(biāo)應(yīng)符合《定量包裝商品凈含量計(jì)

量檢驗(yàn)規(guī)則》（JJF1070）規(guī)定；《中國藥典》“制劑通則”項(xiàng)下有相應(yīng)要求的

產(chǎn)品劑型，應(yīng)檢測并制定裝量差異或重量差異指標(biāo)，指標(biāo)應(yīng)符合規(guī)定。裝量或凈

含量只檢測內(nèi)容物，不包括隔離材料，如膠囊殼等。

12.最小服用單元含有惰性隔離材料填充的產(chǎn)品，如膠囊，其功效成分或者指標(biāo)

成分、農(nóng)藥殘留、水分、灰分等指標(biāo)以去除隔離材料（膠囊殼）的內(nèi)容物為檢測

單元，對(duì)于非法添加藥物、重金屬、格、色素（如材料帶顏色）等則需要進(jìn)行整

體檢測，或者檢測結(jié)果明確標(biāo)識(shí)相關(guān)檢測部位。

13.標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定不得檢出的項(xiàng)目結(jié)果，方法定量限以上檢測結(jié)果，按照具體檢出值

報(bào)送結(jié)果；方法檢出限以下檢測結(jié)果，注明“未檢出，檢出限值”；方法檢出限

以上、定量限以下檢測結(jié)果，注明“檢出且小于定量限，定量限值，檢出限值”。

14.注冊檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)按照國家相關(guān)規(guī)定和標(biāo)準(zhǔn)等要求，根據(jù)樣品具體情況，合理

地進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)設(shè)計(jì)和研究。通過穩(wěn)定性試驗(yàn),考察樣品在不同環(huán)境條件下（如

溫度、相對(duì)濕度等）的感官、化學(xué)、物理及生物學(xué)特征隨時(shí)間增加其變化程度和

規(guī)律，從而判斷樣品包裝、貯存條件和保質(zhì)期內(nèi)的穩(wěn)定性。產(chǎn)品穩(wěn)定性重點(diǎn)考察

指標(biāo)，主要包括鑒別、感官、微生物、崩解時(shí)限（溶散時(shí)限、溶化性等）、水分、

pH值、酸價(jià)、過氧化值、真菌毒素、列入理化指標(biāo)中的功效成分/標(biāo)志性成分等

隨儲(chǔ)存條件和儲(chǔ)存時(shí)間容易發(fā)生變化的指標(biāo)。產(chǎn)品非穩(wěn)定性重點(diǎn)考察指標(biāo)，主要

包括灰分、污染物（如鉛、總碑、總汞等）、農(nóng)殘（如六六六、滴滴涕等）、國

家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)及現(xiàn)行規(guī)定有用量限制的合成色素和甜味劑等隨儲(chǔ)存條件和貯存時(shí)

間不易發(fā)生變化的指標(biāo)，以及國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)及現(xiàn)行規(guī)定有用量限制的抗氧化劑指

標(biāo)。

第二部分

二十五種功效成分和標(biāo)志性成分

檢驗(yàn)方法

TestingMethodsfor25kindsofFunctional

andIconicComponents

一、保健食品中紅景天昔的測定

DeterminationofsaIidrosideinheaIthfood

1范圍

本方法規(guī)定了以紅景天為主要原料的保健食品中紅景天昔的液相色譜測定

方法。

本方法適用于保健品食品中紅景天昔的測定，也適用于保健食品中酪醇的測

定。

2原理

試樣經(jīng)甲醇超聲提取，以0.01mol/L乙酸筱-甲醇為流動(dòng)相(80+20),采用

高效液相色譜法，紫外檢測器檢測，根據(jù)保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。

3試劑和材料

注：除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的

一級(jí)水。

3.1試劑

3.1.1乙酸鏤(CH3COONH4)□

3.1.2甲醇(CH3OH)：色譜純。

3.1.3甲醇(CH3OH)。

3.2試劑配制

乙酸鏤溶液(0.01mol/L)：稱取0.77g乙酸鏤，加入適量水溶解，用水定容

至1000mL,經(jīng)0.45ptm水相微孔濾膜過濾后備用。

3.3標(biāo)準(zhǔn)品

紅景天昔(G4H20。7)：純度N98%。

酪醇(C8H10O2)：純度N98%。

3.4標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

3.4.1紅景天音標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(2.0mg/mL)：準(zhǔn)確稱取紅景天昔標(biāo)準(zhǔn)品0.02g于

10mL容量瓶中，用甲醇(3.1.2)溶解并定容至刻度，搖勻。

3.4.2紅景天昔標(biāo)準(zhǔn)工作液：將紅景天昔標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(3.4.1)用甲醇(3.1.2)

稀釋制備一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，標(biāo)準(zhǔn)系列濃度為Omg/mL、O.O1mg/mL、0.02mg/mL>

0.05mg/mL>0.20mg/mL、0.50mg/mL,臨用時(shí)配制。

3.4.3酪醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(2.0mg/mL)：準(zhǔn)確稱取酪醇標(biāo)準(zhǔn)品0.02g于10mL容

量瓶中，用甲醇(3.1.2)溶解并定容至刻度，搖勻。

3.4.4系統(tǒng)適用性溶液：準(zhǔn)確吸取紅景天昔標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(341)和酪醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)

備液(3.4.3)各0.5mL于10mL容量瓶中，用甲醇(3.1.2)稀釋至刻度,搖

勻。

4儀器設(shè)備

4.1高效液相色譜儀：配有紫外檢測器(UV)。

4.2超聲波清洗器。

4.3分析天平：感量為0.01mg,0.1mgo

5分析步驟

5.1試樣制備

5.1.1固體樣品：取20粒以上片劑或膠囊試樣進(jìn)行粉碎、混勻，準(zhǔn)確稱取適量

試樣(約含紅景天昔2.5mg)于25mL容量瓶中，加入甲醇(3.1.3)約20mL,

超聲提取30min,放冷至室溫，用甲醇(3.1.3)定容至刻度。混勻后經(jīng)0.45ptm

濾膜過濾，供液相色譜分析用。

5.1.2液體樣品：準(zhǔn)確吸取適量搖勻后的試樣(約含紅景天昔2.5mg)于25mL

容量瓶中，用甲醇(3.1.3)定容至刻度?；靹蚝蠼?jīng)0.45pim濾膜過濾，供液相色

譜分析用。

5.2色譜參考條件

5.2.1色譜柱：C18柱，柱長250mm,內(nèi)徑4.6mm,填料粒徑5pim,或同等性

能色譜柱；

5.2.2流動(dòng)相:乙酸2溶液(O.Olmol/L)-甲醇(80+20)；

5.2.3流速：L0mL/min；

5.2.4柱溫：25°C；

5.2.5檢測波長：215nm；

5.2.6進(jìn)樣量：lOgLo

5.2.7系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：取系統(tǒng)適用性溶液（3.4.4）10HL,注入液相色譜儀,

記錄色譜圖，紅景天昔峰與酪醇峰的分離度應(yīng)大于1.5o

5.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液（3.4.2）分別注入高效液相色譜儀中，測定相應(yīng)的色譜峰

高或峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積或峰高為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)

準(zhǔn)曲線（標(biāo)準(zhǔn)溶液液相色譜圖見附錄A中圖A.1）。

5.4試樣溶液的測定

將試樣待測液（5.1.1或5.1.2）注入液相色譜儀中，以保留時(shí)間定性，測得峰

面積或峰高，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測液紅景天昔的濃度（樣品溶液液相色譜圖見

附錄A中圖A.2）o

6分析結(jié)果的表述

試樣中紅景天昔含量按式（1）計(jì)算：

CxV

X=--------------x100...................（1）

m

式中：

X一試樣中紅景天昔的含量，單位為毫克每百克或毫克每百毫升（mg/100g

或mg/100mL）；

C—由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得待測樣液中紅景天昔的濃度，單位為毫克每毫升

（mg/mL）；

—樣品的定容體積，單位為毫升（mL）；

加一樣品量，單位為克或毫升（g或mL）；

100—單位轉(zhuǎn)換。

計(jì)算結(jié)果以重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，保留三

位有效數(shù)字。

7精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對(duì)差值不超過算術(shù)平均值的

10%。

8其他

當(dāng)稱樣量為1g，定容體積為25mL時(shí)，紅景天昔的檢出限為50Rg/g。

附錄A

標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液典型液相色譜圖

A.1紅景天昔和酪醇標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖，見圖A.lo

3oo

uo

eu

jq

so2oo

q

0.0'''2'0''4.0'''6.0'"8"0'''10.0'''12.0'''14.0'''16.0'''18.0

時(shí)間［mini

圖A.1紅景天苔和酪醇標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.Img/mL)色譜圖

A.2含有紅景天昔和酪醇的試樣溶液色譜圖，見圖A.2o

-3oo

wr

-E

jo

eu

jq

so2OO

a

圖A.2含有紅景天昔和酪醇的試樣溶液色譜圖

二'保健食品中大蒜素的測定

DeterminationofallicininheaIthfood

1范圍

本方法規(guī)定了保健食品中大蒜素的測定方法。

本方法適用于以大蒜及其加工品為主要原料制成的保健食品中大蒜素的測

定。

2原理

試樣經(jīng)有機(jī)溶劑提取，通過氣相色譜檢測，以保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定

量。

3試劑和材料

注：除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純。

3.1試劑

3.1.1無水乙醇（C2H5（DH）。

3.1.2正己烷（CH3（CH2）4CH3）。

3.1.3無水硫酸鈉（Na2so4）。

3.2標(biāo)準(zhǔn)品

大蒜素（C6H10S3）：純度之99.0%。

3.3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

3.3.1大蒜素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（10.0mg/mL）：稱取lOO.Omg大蒜素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于10mL容

量瓶中，用正己烷定容至刻度，搖勻。此溶液可在冰箱中保存七天。

3.3.2大蒜素標(biāo)準(zhǔn)工作液（1.0mg/mL）：吸取大蒜素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.0mL于10mL

容量瓶中，用正己烷定容至刻度，搖勻，得濃度為1.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，臨

用時(shí)配制。

4儀器

4.1氣相色譜儀：配有氫火焰離子化檢測器（FID）。

4.2天平：感量為0.1mg和0.01mgo

4.3超聲清洗器。

5分析步驟

5.1試樣制備

5.1.1固體試樣

稱取已粉碎混合均勻的固體待測試樣適量（含待測組分約5mg,精確到

0.0001g）于5mL容量瓶中，加無水乙醇2.5mL,密塞，超聲20min,取出冷卻

至室溫，加正己烷定容，搖勻，過0.45Rm微孔濾膜過濾，待上機(jī)測試用。

5.1.2油狀試樣

稱取已混合均勻的油狀待測試樣適量（含待測組分約5mg,精確到0.0001g）

于5mL容量瓶中，加正己烷溶解并定容，搖勻，待上機(jī)測試用。

5.1.3含水液體試樣

精密吸取已混合均勻的待測試樣適量（含待測組分約10mg）,置于分液漏斗

中，加5mL正己烷振搖提取Imin,靜置分層，取上層清液過無水硫酸鈉，提取

兩次。用適量正己烷沖洗無水硫酸鈉，合并至同一10mL容量瓶中，正己烷定容,

搖勻。待上機(jī)測試用。

5.2色譜參考條件

5.2.1色譜柱：（5%-苯基）-甲基聚硅氧烷固定相，柱長30m,內(nèi)徑0.25mm,膜

厚0.25^m或其他同等性能色譜柱。

5.2.2柱溫箱溫度：起始溫度100℃保持3分鐘，10℃/min速度升至150℃,

再以20℃/min速度升至200℃,保持20min。

5.2.3進(jìn)樣口溫度：220℃；進(jìn)樣量1j.iL=

5.2.4檢測器溫度：250℃。

5.2.5載氣：高純氮?dú)?，流?.0mL/min。

5.2.6氫氣：40mL/min；空氣：400mL/min。

5.3測定

將1gL的標(biāo)準(zhǔn)溶液（332）和試樣待測液（5.1）注入氣相色譜儀中，以保留時(shí)

間定性，測得峰面積或峰高，外標(biāo)峰面積或峰高法定量。（標(biāo)準(zhǔn)溶液圖譜及試樣

圖譜見附錄A)

6分析結(jié)果的表述

試樣中大蒜素含量按式(1)計(jì)算

v

W=%X,**100.........................(1)

A2xmx1000

式中：

W-大蒜素的含量，單位為克每百克或克每百毫升(g/100g或g/lOOmL)；

Ai—試樣使用液色譜峰面積或峰高；

A2—標(biāo)準(zhǔn)使用液峰面積或峰高；

C—標(biāo)準(zhǔn)使用液濃度，單位為毫克每毫升(mg/mL)；

V—試樣定容體積，單位為毫升(mL)；

m—試樣的質(zhì)量或體積，單位為克或毫升(g或mL)；

100—單位轉(zhuǎn)換；

1000—單位轉(zhuǎn)換。

計(jì)算結(jié)果以重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，保留三

位有效數(shù)字。

7精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對(duì)差值不超過算術(shù)平均值的

10%O

8其他

當(dāng)固體試樣和油狀試樣稱樣量為0.1g,定容體積為5.0mL時(shí)，大蒜素的檢

出限為0.20g/100g。當(dāng)液體取樣量為0.2mL,定容體積為10mL時(shí)，大蒜素的檢

出限為0.22g/100mL。

附錄A

標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液典型氣相色譜圖

A.1大蒜素標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖，見圖A.1。

pA

2500

2000

1500

大蒜素

1000

02468101214mm

圖A.1大蒜素標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

A.2含有大蒜素的試樣溶液色譜圖，見圖A.2。

PA

2500

2000

-L-在.

人標(biāo)系

1500

1000

500

0__________________________________________________j____________________________________________

02468101214rrir

圖A.2含有大蒜素的試樣溶液色譜圖

三'保健食品中蘆薈昔的測定

DeterminationofaloininheaIthfood

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了保健食品中蘆薈昔的液相色譜測定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于以蘆薈及其加工品為原料的保健食品中蘆薈昔含量的測定。

2原理

樣品用甲醇+水(55+45)作為溶劑，提取試樣中的蘆薈背，經(jīng)液相色譜儀

G8柱分離，在293nm波長處檢測，以蘆薈昔保留時(shí)間定性，峰面積定量。

3試劑和材料

注：除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的

一級(jí)水。

3.1試劑

3.1.1甲醇(CH3OH)：色譜純。

3.1.2石油酸：沸程30℃?60℃。

3.2標(biāo)準(zhǔn)品

蘆薈昔標(biāo)準(zhǔn)品(C21H22O9)。

3.3標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

3.3.1蘆薈昔標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：稱取10.00mg蘆薈昔標(biāo)準(zhǔn)品于25mL容量瓶中，

加流動(dòng)相溶解并定容至刻度，搖勻。

3.3.2蘆薈昔標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別吸取蘆薈昔標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液0.5mL、1.0mL、2.0

mL、4.0mL>6.0mL至10mL容量瓶中，用流動(dòng)相定容，得濃度為20jig/mL、

40|ig/mL、80pg/rnL^160gg/mL>240|ig/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

4儀器設(shè)備

4.1高效液相色譜儀：配紫外檢測器或二極管陣列檢測器。

4.2超聲波清洗器。

4.3分析天平：感量1mg,0.1mgo

4.4離心機(jī)：轉(zhuǎn)速23000r/min。

4.5微孔濾膜：0.45jim。

5分析步驟

5.1試樣制備

5.1.1固體試樣

稱取已粉碎混合均勻的待測試樣1g（精確到0.001g）,置具塞錐形瓶中，加

入50.0mL流動(dòng)相，稱重，超聲處理10min,放冷，用流動(dòng)相補(bǔ)足減失的重量，

搖勻，經(jīng)0.45pm微孔濾膜過濾，濾液待測。必要時(shí)可進(jìn)行適當(dāng)稀釋。

5.1.2含油基質(zhì)試樣

稱取混合均勻的待測試樣1g（精確到0.001g）,置具塞錐形瓶中，力口入25.0

mL石油酸，渦旋使充分混勻，過濾，棄去石油酸液，再用少量石油酸洗滌錐形

瓶及濾紙，揮干，將濾紙和殘?jiān)糜谠呷F形瓶中，加入50.0mL流動(dòng)相，稱

重，超聲處理10min,放冷，用流動(dòng)相補(bǔ)足減失的重量，搖勻，經(jīng)0.45pim微孔

濾膜過濾，濾液待測。必要時(shí)可進(jìn)行適當(dāng)稀釋。

5.1.3水性液體試樣

吸取待測試樣，必要時(shí)以流動(dòng)相適當(dāng)稀釋，離心，取上清液經(jīng)0.45pim微孔

濾膜過濾。

5.2色譜參考條件

5.2.1色譜柱：C18柱，柱長250mm,內(nèi)徑4.6mm,粒徑5jim,或同等性能的

色譜柱。

5.2.2流動(dòng)相：甲醇+水=55+45。

5.2.3流速：1mL/mino

5.2,4柱溫:40℃?

5.2.5檢測波長:293nm。

5.2.6進(jìn)樣量：JOgLo

5.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

將標(biāo)準(zhǔn)系列各濃度溶液（3.3.2）,注入液相色譜儀中，測得相應(yīng)的峰面積，以

標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（標(biāo)準(zhǔn)溶液液相

色譜圖見附錄A中圖A.1）。

5.4試樣溶液的測定

將試樣溶液（5.1.1、5.1.2、5.1.3）注入液相色譜儀中，以保留時(shí)間定性，同時(shí)

記錄峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測液中蘆薈音的濃度（樣品溶液液相色譜圖見

附錄A中圖A.2）o

6結(jié)果計(jì)算

試樣中蘆薈昔含量按式（1）計(jì)算：

C,xVxlOO

X尸.............（I）

mxlOOO

式中：

X,——試樣中蘆薈甘的含量，單位為克每百克（g/100g）或克每百毫升（g/100

mL）；

C—由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得測定樣液中蘆薈昔的濃度，單位為毫克每毫升

（mg/mL）；

V——被測定樣液的最終定容體積，單位為毫升（mL）；

m——試樣的稱樣質(zhì)量，單位為克（g）或毫升（mL）；

100——單位轉(zhuǎn)換；

1000——單位轉(zhuǎn)換。

計(jì)算結(jié)果以重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，保留三

位有效數(shù)字。

7精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對(duì)差值不超過算術(shù)平均值的

10%O

8其他

當(dāng)稱樣量為1g，定容體積為50mL時(shí)，蘆薈昔的定量限為0.0046g/100g。

附錄A

標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液典型液相色譜圖

A.1蘆薈音標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖，見圖A.E

圖A.1蘆薈昔標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

A.2含有蘆薈昔的試樣溶液色譜圖，見圖A.2O

圖A.2含有蘆薈昔的試樣溶液色譜圖

四'保健食品中肉堿的測定

DeterminationofearnitineinheaIthfood

1范圍

本方法規(guī)定了保健食品中肉堿的液相色譜測定方法。

本方法適用于以肉堿為主要原料的保健食品中肉堿的測定。

2原理

試樣中的肉堿以0.5mmol/L的鹽酸溶液經(jīng)超聲提取，反相色譜分離，以標(biāo)準(zhǔn)

品的保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。

3試劑和材料

注：除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一

級(jí)水。

3.1試劑

3.1.1磷酸氫二鉀(K2HPO4)。

3.1.2辛烷磺酸鈉(C8HigNaChS)。

3.1.3鹽酸(HC1)。

3.1.4磷酸(H3Po4)。

3.1.5硅藻土(SiCh)：化學(xué)純。

3.1.6乙盾(C2H3N)：色譜純。

3.2試劑配制

3.2.1鹽酸溶液(0.50mmol/L)：吸取4.2mL鹽酸，用水稀釋并定容至100mL。

再吸取上述溶液1mL,用水稀釋并定容至ILo

3.2.2緩沖鹽溶液：分別稱取8.7g磷酸氫二鉀和0.4325g辛烷磺酸鈉，用水溶

解并稀釋至1L,用磷酸調(diào)至pH2.5。

3.3標(biāo)準(zhǔn)品

肉堿(C7HL5NO3)：純度298%,或經(jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物

質(zhì)。

3.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

3.4.1肉堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1.0mg/mL)：精密稱取肉堿標(biāo)準(zhǔn)品25mg(精確到O.lmg)

于25mL容量瓶中，用鹽酸溶液溶解并定容至刻度，搖勻。

3.4.2肉堿標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別準(zhǔn)確吸取肉堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.50mL、1.0mL,2.0mL、

3.0mL、4.0mL、5.0mL于5mL容量瓶中，用鹽酸溶液稀釋至刻度，得濃度為

0.10mg/mL^0.20mg/mL>0.40mg/mL、0.60mg/mL^0.80mg/mL>1.0mg/mL

的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

4儀器

4.1高效液相色譜儀：配有紫外（UV）檢測器或二極管陣列（DAD）檢測器。

4.2天平:感量O.lmg和O.Olmg

4.3超聲波提取器。

5分析步驟

5.1試樣制備

5.1.1試樣處理

5.1.1.1固體試樣

稱取粉碎并混合均勻的試樣01g~2g（精確到0.001g）（含待測組分約5

mg~50mg）,于50mL容量瓶中，加入鹽酸溶液約35mL,超聲提取lOmin,放冷,

用鹽酸溶液稀釋至刻度，混勻，過濾，棄初濾液數(shù)毫升，收集濾液，過0.45.m

水相濾膜，取續(xù)濾液待測。

5.1.1.2軟膠囊試樣

取試樣剪開，擠出內(nèi)容物并混勻，稱取0.1g~2g（精確到0.001g）,加入等量

硅藻土，研至分散均勻，稱取其中部分（精確到0.001g,含待測組分約5mg~50

mg）,轉(zhuǎn)移至250mL具塞三角瓶中，并吸取鹽酸溶液50mL,并入三角瓶中，稱

重，加塞超聲提取lOmin,放冷，用鹽酸溶液補(bǔ)足重量，混勻，過濾，棄初濾液

數(shù)毫升，收集濾液，過0.45Rm水相濾膜，取續(xù)濾液待測。

5.1.1.3液體試樣

精密量取混勻后的試樣1.0mL~5.0mL（含待測組分約5mg~50mg）,于50mL

容量瓶中，加入鹽酸溶液約35mL,超聲提取10min,放冷，用鹽酸溶液稀釋至

刻度，混勻，過濾，棄初濾液數(shù)毫升，收集濾液，過0.45pm水相濾膜，取續(xù)濾

液待測。

5.1.2稀釋

根據(jù)試樣中肉堿含量用鹽酸溶液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂?尸)，使待測溶液中肉堿

的濃度在0.10mg/mL~1.0mg/mL0

5.2色譜參考條件

5.2.1色譜柱：C18柱：4.6x250mm,5卜im或同等性能的色譜柱。

5.2.2流動(dòng)相:緩沖鹽溶液+乙睛=90+10。

5.2.3流速：0.8mL/min。

5.2.4檢測波長:210nmo

5.2.5進(jìn)樣量：20NL。

5.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

將肉堿標(biāo)準(zhǔn)工作液(3.4.2)從低濃度到高濃度分別注入高效液相色譜儀中，測

定相應(yīng)的峰面積。以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)

曲線(標(biāo)準(zhǔn)溶液液相色譜圖見附錄A中圖A.l)o

5.4待測溶液的測定

在相同色譜條件下，將待測溶液(5.1.1.1、5.1.1.2,5.1.1.3、5.2.1)注入高效液

相色譜儀中，以保留時(shí)間定性，測得峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測溶液中肉堿

的濃度(待測溶液液相色譜圖見附錄A中圖A.2)。

6分析結(jié)果的表述

試樣中肉堿含量按式(1)計(jì)算:

VPXVXF、/100

A=X.(1)

m1000

式中：

X——試樣中肉堿的含量，固態(tài)試樣單位為克每百克(g/100g),液態(tài)試樣單

位為克每百毫升(g/100mL)；

P一—根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測溶液中肉堿的濃度，單位為毫克每毫升

(mg/mL)；

V——試樣稀釋體積，單位為毫升(mL)；

m——試樣取樣質(zhì)量，單位為克(g)；試樣取樣體積，單位為毫升(mL)；

F一一稀釋倍數(shù)；

100——單位轉(zhuǎn)換;

1000—單位轉(zhuǎn)換。

計(jì)算結(jié)果以重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，保留三

位有效數(shù)字。

7精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值

的5%o

8其他

當(dāng)稱樣量為2.0g,定容體積為50mL時(shí)，肉堿的定量限為0.10g/100g。

當(dāng)取樣量為5.0mL,定容體積為50mL時(shí)，肉堿的定量限為0.040g/100mL。

附錄A

標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測溶液典型液相色譜圖

A.1肉堿標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖，見圖A.k

22.5:檢測器A:210nm

20.0

17.5

15.0

12.5

10.0

肉堿

0.0

I.....................................................................................................................................................................I,,,....................I

0.02.55.07.510.012.515.017.520.022.525.027.5min

圖A.1肉堿標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

A.2含有肉堿的待測溶液色譜圖，見圖A.2。

mV

檢測器A:210nm

70

60

50

40

30

§肉堿

in?

0.02.55.07.510.012.515.017.520.022525.027.5min

圖A.2含有肉堿的待測溶液色譜圖

附錄A

標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測溶液典型液相色譜圖

A.1肉堿標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖，見圖A.k

mV

22.5:檢測器A:210nm

20.0

17.5

15.0

12.5-

10.0-

75肉堿

50

25

0.0

0.02.55.07.510.012515.017.520.022.525.027.5min

圖A.1肉堿標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

A.2含有肉堿的待測溶液色譜圖，見圖A.2。

mV

檢測器A:210nm

70-

60

40

30-

20肉堿

10

0

0.0

圖A.2含有肉堿的待測溶液色譜圖

五、保健食品中a-亞麻酸'丫-亞麻酸的測定

Determinationofa,y-IinolenicacidsinheaIthfood

1范圍

本方法規(guī)定了保健食品中a-及y-亞麻酸的測定方法。

本方法適用于油脂類保健食品中a-及1亞麻酸含量的測定。

本方法還適用于油脂類保健食品中C|6~C22不飽和脂肪酸和角鯊烯含量的測

2原理

將油脂試樣(或試樣提取的脂肪)，經(jīng)氫氧化鉀皂化，在三氟化硼存在下甲醇

酯化，然后用氣相色譜儀分析，采用外標(biāo)法定量。

3試劑和材料

注：除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的

一級(jí)水。

3.1試劑

3.1.1正己烷(C6Hl4)。

3.1.2氫氧化鉀(KOH)o

3.1.3三氟化硼乙醛溶液。

3.1.4甲醇(CH3OH)：色譜純。

3.1.5氯化鈉(NaCl)。

3.2試劑配制

321氫氧化鉀甲醇溶液(0.5mol/L):稱取2.8g氫氧化鉀，用甲醇溶解并定容至

100mL,混勻。

3.2.2三氟化硼甲醇溶液(1+4)：取40%三氟化硼乙醛溶液1份，加甲醇4份，混

勻即可。

3.2.3飽和氯化鈉：飽和氯化鈉溶液:稱取360g氯化鈉溶解于1.0L水中,攪拌溶

解,澄清備用。

3.3.1a-亞麻酸甲酯＞99.0%。

3.3.2y-亞麻酸甲酯＞99.0%。

3.3標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

3.4.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1.0mg/mL)：分別稱取25.0mga-亞麻酸甲酯及25.0mgy-亞麻

酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品，于25mL容量瓶中，用正己烷溶解并定容至刻度，搖勻。此溶液

應(yīng)貯存于-18%：冰箱中。

3.4.2標(biāo)準(zhǔn)使用液(0.5mg/mL)：分別吸取a-亞麻酸甲酯及y-亞麻酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)

備液各5.0mL于10mL的容量瓶中，混勻，臨用時(shí)配制。

4儀器設(shè)備

4.1氣相色譜儀，附氫火焰(FID)檢測器。

4.2分析天平：感量O.lmg、Img。

4.3加熱式磁力攪拌器。

4.4標(biāo)準(zhǔn)磨口燒瓶(50mL)和直形冷凝管。

5分析步驟

5.1試樣制備

5.1.1脂肪的提取按GB5009.6中規(guī)定的方法提取。

5.1.2皂化

稱取0.100g油脂(或脂肪)和磁力攪拌子一并放入50mL磨口燒瓶中(見圖1),

加入4mL0.5moi/L氫氧化鉀甲醇溶液，上部連接回流冷凝管，并固定于磁力攪拌

器上，由冷凝管上口向溶液中導(dǎo)入氮?dú)?；使反?yīng)瓶中始終充滿氮?dú)?。開啟磁力攪

拌器，并加熱使反應(yīng)液保持65±5K,攪拌回流約15min。

5.1.3甲脂化

從冷凝管上部加入4mL三氟化硼甲醇溶液，攪拌(65±5。(2),回流約2min,

冷至室溫，從冷凝管上部加入5mL正己烷繼續(xù)攪拌5min,移去冷凝管，加入

5mL飽和氯化鈉水溶液，搖動(dòng)數(shù)分鐘，轉(zhuǎn)移至25mL分液漏斗中分離水與有機(jī)

相，再加3mL正己烷洗水相，分離，棄水相，合并有機(jī)相并用正己烷定容至

10.0mL(濃度低時(shí)吹氮濃縮至1.0mL)。供測定用。

5.2氣相色譜參考條件

5.2.1色譜柱：FFAP(改性聚乙二醇20M,30mx0.25mmi.d.0.25gm)

5.2.2柱箱溫度:215℃o

5.2.3進(jìn)樣口溫度:250℃o

5.2.4檢測器溫度：260℃o

5.2.5氮?dú)?50mL/min,30：1分流;氫氣：45mL/min；空氣:500mL/mino

5.3定性分析

在上述儀器條件下，分別取標(biāo)準(zhǔn)使用液和試樣測定液LONL,注入氣相色譜

儀，以保留時(shí)間來確定a-及Y-亞麻酸甲酯。

5.4定量分析

試樣中a-亞麻酸甲酯或y-亞麻酸甲酯色譜峰面積或峰高與標(biāo)準(zhǔn)的比較定量。

6分析結(jié)果的表述

試樣中a-亞麻酸甲酯或r亞麻酸測定結(jié)果按(1)式計(jì)算

6.1計(jì)算

A

X=-----------X0.952X100%

mx1000

.........(1)

式中：

X—a-亞麻酸或上亞麻酸含量，%；

A1—試樣中a-亞麻酸甲酯或「亞麻酸甲酯色譜峰面積或峰高；

A2—標(biāo)準(zhǔn)使用液色譜峰面積或峰高；

p一標(biāo)準(zhǔn)使用液濃度，mg/mL；

v—正己烷定容體積，mL；

m一試樣質(zhì)量，g；

0.952—亞麻酸換算系數(shù)。

脂肪試樣再換算原保健食品試樣中r?亞麻酸和a-亞麻酸的量。

計(jì)算結(jié)果以重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，保留三位有

效數(shù)字。

7精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對(duì)差值不超過算術(shù)平均值的

10%O

8其他

本方法最低檢出量：Y-亞麻酸為0.050陽、a-亞麻酸為0.030度。

圖1皂化酯化裝置圖

附錄A

標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液典型氣相色譜圖

A.la-亞麻酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖，見圖A.lo

15

圖A.IY-亞麻酸甲酯a-亞麻酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

A.2含有a-亞麻酸甲酯的試樣溶液色譜圖，見圖A.2。

圖A.2含有a-亞麻酸甲酯的試樣溶液色譜圖

六、保健食品中人參皂昔的測定

DeterminationofginsenosidesinheaIthfood

1范圍

本方法規(guī)定了保健食品中人參皂甘的高效液相色譜測定方法。

本方法適用于以人參及其加工品為主要原料的保健食品中人參皂昔Re、

Rgi、Rbi、Rc、Rb2>Rd含量的測定。

2原理

將試樣中的人參皂甘溶解、提取，經(jīng)凈化處理后，使用梯度洗脫反相高效液

相色譜進(jìn)行分離，紫外檢測器檢測，根據(jù)色譜峰的保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。

3試劑和材料

注：除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一

級(jí)水。

3.1試劑

3.1.1乙盾(CH3CN)：色譜純。

3.1.2甲醇(CH3OH)。

3.1.3DK)I大孔吸附樹脂。

3.2標(biāo)準(zhǔn)品

人參皂昔Re、Rgi、Rbi、Rc、Rb2.Rd：純度298%,或經(jīng)國家認(rèn)證并授予

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

3.3標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

3.3.1人參皂背Re、Rgi、Rbi、Rc、Rb2>Rd標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(lOmg/mL)：分別稱取

人參皂昔Re、Rgi、Rbi、Rc、Rb?、Rd標(biāo)準(zhǔn)品lOOmg于6個(gè)10.0mL容量瓶中，

用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻