植物生物技術(shù)導(dǎo)論復(fù)習(xí)思考題201606

植物生物技術(shù)導(dǎo)論復(fù)習(xí)思考題201606PAGEPAGE7《植物生物技術(shù)導(dǎo)論》復(fù)習(xí)思考題名詞解釋名詞解釋答案植物生物技術(shù)（廣義概念）提高和改良農(nóng)作物產(chǎn)量、品質(zhì)的所有技術(shù)。（狹義概念）利用植物器官、組織、細(xì)胞和通過分子水平的操作、促進(jìn)植物繁殖、有用物質(zhì)生產(chǎn)和植物品種遺傳改良的技術(shù)。離體授粉植物的離體授粉也叫離體受精或試管受精，就是在人工控制條件下使離體的胚珠或子房完成授粉、受精形成種子的過程。植物的離體授粉技術(shù)一般包括“胚珠試管受精”、“離體子房授粉”和“雌蕊離體授粉”3個(gè)方面。T-DNA轉(zhuǎn)移-DNA區(qū)。長度大約在15～30kb，是根癌農(nóng)桿菌侵染植物細(xì)胞時(shí)從Ti質(zhì)粒上切割下來轉(zhuǎn)移并整合到植物基因組的一段DNA。植物細(xì)胞組織培養(yǎng)在離體條件下利用人工配制的培養(yǎng)基對植物器官、組織、細(xì)胞、原生質(zhì)體等進(jìn)行培養(yǎng)，在適宜的培養(yǎng)條件下，長成完整植株的過程。同工酶是功能相同的酶的多重分子形態(tài)，它們是特異的基因產(chǎn)物。體細(xì)胞胚在愈傷組織表面或內(nèi)部形成類似于合子胚的結(jié)構(gòu)，稱其為體細(xì)胞胚，或不定胚，或胚狀體。植物細(xì)胞全能性一個(gè)完整的植物細(xì)胞擁有形成一個(gè)完整植株所必需的全部遺傳信息。在適宜的條件下能夠形成完整植株的能力。細(xì)胞培養(yǎng)是指將植物單細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)直接在培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)的一種培養(yǎng)方式。細(xì)胞懸浮培養(yǎng)是指將游離的單細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)按照一定的細(xì)胞密度懸浮在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)的方法。脫分化脫分化是在植物組織和細(xì)胞培養(yǎng)中，一個(gè)成熟細(xì)胞或分化細(xì)胞轉(zhuǎn)變成為分生狀態(tài)的過程，即形成愈傷組織的過程。植物細(xì)胞培養(yǎng)中，震蕩的主要作用有__________、__________、__________等。使愈傷組織破碎成小細(xì)胞團(tuán)或單細(xì)胞、使細(xì)胞團(tuán)和單細(xì)胞均勻分布于培養(yǎng)基中、促進(jìn)氣體交換培養(yǎng)細(xì)胞活力的測定方法主要有：、、等。四唑鹽還原法(TTC)、熒光素二乙酸法(FDA)、噻唑藍(lán)法（MTT法)花粉（小孢子）培養(yǎng)的方法主要有：__________、__________、__________等。液體淺層培養(yǎng)、平板培養(yǎng)法、微室懸滴培養(yǎng)法植物細(xì)胞組織培養(yǎng)的基本設(shè)備有、、等。準(zhǔn)備室、無菌操作室、培養(yǎng)室植物組織培養(yǎng)中，外植體的種類有、、、、等。根、莖、葉、花、果實(shí)植物組織培養(yǎng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)主要有、、等。脫分化、再分化、試管苗的馴化影響植物組織培養(yǎng)的因素主要有__________、__________、__________、__________等。光照、溫度、濕度、氣體植物基因克隆的方法有__________、__________、__________、__________等?；瘜W(xué)法合成、從基因文庫中釣取、PCR擴(kuò)增、圖位克隆方法愈傷組織形成經(jīng)歷三個(gè)階段：__________、__________和__________。誘導(dǎo)、細(xì)胞分裂、細(xì)胞分化植物生物技術(shù)常用的滅菌方法有__________、__________、__________等。高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌或表面消毒滅菌、過濾滅菌植物細(xì)胞培養(yǎng)的方法有__________、__________等?？醋o(hù)培養(yǎng)、懸浮培養(yǎng)外源基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有__________、__________、__________、__________等?；驑尫?、農(nóng)桿菌介導(dǎo)法、聚乙二醇法、電擊法由花粉培養(yǎng)獲得的再生植株是。單倍體植株DNA分子標(biāo)記主要有、、等。RFLP、ALFP、SSR人工種子包括：__________、__________、__________等部分。人造種皮、人造胚乳、發(fā)芽材料體細(xì)胞雜種的鑒定方法有、、、等。形態(tài)學(xué)、細(xì)胞學(xué)、同工酶、分子生物學(xué)離體授粉的類型主要有：、、等。離體雌蕊授粉、離體子房授粉、離體胚珠授粉無性系是。用植物體細(xì)胞繁殖所獲得的后代植物遺傳轉(zhuǎn)化的方法主要有、、、等?；驑尫?、農(nóng)桿菌介導(dǎo)法、花粉管通道法、電擊法植物細(xì)胞增殖的測定指標(biāo)主要有__________、__________、__________、__________等。細(xì)胞鮮重、細(xì)胞干重、細(xì)胞密實(shí)體積、細(xì)胞植板率等。（其他答案：細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞有絲分裂指數(shù)）脫去植物病毒常用的方法有：__________、__________、__________等。熱處理脫毒、莖尖培養(yǎng)脫毒、微體嫁接脫毒（其他供選擇的答案有：熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)脫毒、抗病毒藥劑脫毒等）植物組織培養(yǎng)中，愈傷組織誘導(dǎo)的三個(gè)階段是、、。啟動期、分裂期、分化期植物種質(zhì)資源離體保存的方法主要有：、、等超低溫保存、低溫保存、干燥脫水法保存（備選答案有：包埋脫水法保存、玻璃化法保存、常溫保存等）植物小孢子在離體培養(yǎng)條件下的發(fā)育途徑主要有：、、等。營養(yǎng)細(xì)胞發(fā)育途徑、生殖細(xì)胞發(fā)育途徑、營養(yǎng)細(xì)胞和生殖細(xì)胞并進(jìn)發(fā)育途徑（還可以填花粉均等分裂途徑）植物組織培養(yǎng)中，脫毒苗的檢測方法有、、等。指示植物法、顯微鏡鑒定法、抗血清鑒定法簡答題簡答題答案簡述植物組織培養(yǎng)過程中的影響因素?？蓮模?）培養(yǎng)基的成分；（2）外植體；（3）培養(yǎng)條件三個(gè)方面分析。簡述離體培養(yǎng)條件下小孢子的發(fā)育?？蓮模?）營養(yǎng)細(xì)胞發(fā)育途徑；（2）生殖細(xì)胞發(fā)育途徑；（3）營養(yǎng)細(xì)胞和生殖細(xì)胞并進(jìn)發(fā)育途徑；（4）細(xì)胞均等分裂途徑等方面闡述。簡述被微生物污染后的玻璃器皿應(yīng)該如何清洗。被真菌等微生物污染的玻璃器皿，必須在121C高壓蒸汽滅菌30min后，倒去殘?jiān)?，用毛刷刷去瓶壁上的培養(yǎng)液和菌斑后，用水沖液干凈后，浸泡在洗滌液中，洗刷后，再用自來水沖液，蒸餾水沖淋一遍后，晾干備用。非PCR依賴的分子標(biāo)記主要有幾種？主要有限制性片段長度多態(tài)性標(biāo)記（AFLP）和染色體原位雜交兩種?？烧归_闡述。簡述體細(xì)胞雜交的意義。體細(xì)胞雜交(somatichybridization)，在植物中亦即原生質(zhì)體融合(protoplastfusion)，利用適當(dāng)?shù)奈锢砘蚧瘜W(xué)方法，可以將任何兩種原生質(zhì)體融合在一起；利用適宜的培養(yǎng)方法，可以由融合原生質(zhì)體再生出雜種植株即體細(xì)胞雜種。克服植物有性雜交不親和性、打破物種之間的生殖隔離、擴(kuò)大遺傳變異等（適當(dāng)展開論述）。植物組織培養(yǎng)中，滅菌方法主要有哪些？滅菌方法主要有蒸汽滅菌、高溫空氣滅菌、過濾滅菌、灼燒滅菌、輻照滅菌等?？珊喴獙⒚糠N方法闡述。簡述原生質(zhì)體分離培養(yǎng)的主要過程。從植物材料的選擇—分離原生質(zhì)體—原生質(zhì)體純化—原生質(zhì)體培養(yǎng)這幾個(gè)環(huán)節(jié)加以簡述影響細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的因素?？蓮模?）培養(yǎng)基的成分；（2）外植體的選擇；（3）植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)；（4）培養(yǎng)條件等方面進(jìn)行闡述。簡述花藥培養(yǎng)和花粉培養(yǎng)的異同。（1）花粉培養(yǎng)屬細(xì)胞培養(yǎng)；花藥培養(yǎng)為器官培養(yǎng)。（2）花粉培養(yǎng)排除了藥壁、藥隔和花絲的干擾，從小孢子中獲得的材料是純合的；花藥培養(yǎng)存在藥壁等二倍體細(xì)胞對小孢子發(fā)育的的干擾，獲得的材料可能是雜合的。（3）花粉培養(yǎng)中小孢子能均勻地接觸化學(xué)和物理誘變因素，是研究吸收、轉(zhuǎn)化和誘變的理想材料；花藥培養(yǎng)中小孢子接觸的誘變因素不均勻。（4）花粉培養(yǎng)可觀察到雄核發(fā)育的全過程，是研究遺傳和發(fā)育的很好材料體系；花藥培養(yǎng)對雄核發(fā)育的全過程難于觀察。（5）花粉培養(yǎng)可以從每個(gè)花藥中獲得更多的單倍體；花藥培養(yǎng)獲得的單倍體少。簡述花粉管通道法導(dǎo)入外源基因的原理?？蓮模?）花粉管通道法概念（又名子房注射法，花蘗注射法，柱頭涂抹法，蘸花法。它是利用開花植物授粉后形成的花粉管通道，直接將外源目的基因?qū)肷胁痪邆湔＜?xì)胞壁的卵、合子或早期胚細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)目的基因遺傳轉(zhuǎn)化的一種方法）；（2）花粉管通道法導(dǎo)入外源基因的步驟進(jìn)行闡述。簡述RAPD的基本實(shí)驗(yàn)步驟。從以下方面敘述： DNA的提取 模板DNA濃度和質(zhì)量的檢測 PCR擴(kuò)增 電泳檢測：PCR結(jié)束后每個(gè)樣品加4ul凝膠上樣緩沖液，每個(gè)泳道點(diǎn)樣20ul。 將凝膠浸于1ug/ml的EB中30min~60min，用水清洗約10min，觀察、拍照。 統(tǒng)計(jì)分析：記錄條帶清晰的RAPD條帶，計(jì)算帶紋相似率；計(jì)算帶頻率、群內(nèi)遺傳純度；DNA片段大小。簡述幾種轉(zhuǎn)基因植物材料的檢測方法。對轉(zhuǎn)基因植物材料中目的基因的表達(dá)主要采用分子生物學(xué)方法和生物化學(xué)方法檢測。主要有：報(bào)告基因檢測法、Southern雜交法、Northern雜交法、Western雜交法、PCR方法、生物學(xué)鑒定等。（1）報(bào)告基因檢測法：利用報(bào)告基因能快速報(bào)告細(xì)胞是否被轉(zhuǎn)化的特點(diǎn)，來檢測轉(zhuǎn)基因植物材料的方法。（2）Southern雜交法：主要是利用兩條單鏈DNA互補(bǔ)性，來檢測外源DNA的轉(zhuǎn)化結(jié)果，該方法Southern于1975年發(fā)明的。該方法只能驗(yàn)證轉(zhuǎn)化基因是否存在于被檢測植株中，但不能得到基因是否表達(dá)的信息。（3）Northern雜交法：用于檢測外源基因轉(zhuǎn)錄出來的mRNA，該方法是Alwine于1977年發(fā)明的。該方法能檢測轉(zhuǎn)化基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA，在轉(zhuǎn)錄水平上基因的表達(dá)和調(diào)控。（4）Western雜交法：是將外源基因轉(zhuǎn)錄并翻譯的蛋白質(zhì)從SDS聚丙烯酰胺凝膠中轉(zhuǎn)移到固相支持體上，然后對固定化蛋白質(zhì)進(jìn)行免疫學(xué)測定。該方法只能驗(yàn)證轉(zhuǎn)化基因是否存在在蛋白質(zhì)水平上的正常表達(dá)。（5）PCR方法：在一種耐高溫的DNA聚合酶作用下，通過引物和模板DNA進(jìn)行多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）來擴(kuò)增DNA。該方法只能驗(yàn)證轉(zhuǎn)化基因是否存在于被檢測植株中，但不能得到基因是否表達(dá)的信息。該方法比Southern雜交法簡單。（6）生物學(xué)鑒定：對轉(zhuǎn)基因植物的生物學(xué)性狀進(jìn)行觀察，鑒定基因的功能和表型，是否穩(wěn)定地遺傳給后代。該方法能驗(yàn)證基因是否能正常地表達(dá)，是否穩(wěn)定遺傳給后代。論述題論述題答案簡述DNA分子標(biāo)記在植物研究中的應(yīng)用。(1)比較生物的遺傳變異性，從而研究親緣、進(jìn)化關(guān)系。(2)構(gòu)建遺傳連鎖圖，進(jìn)行分子標(biāo)記輔助選擇。(3)構(gòu)建遺傳圖譜，進(jìn)行基因定位、克隆。例如：RFLP-（restrictionfragmentlengthpolymorphism）限制性片段長度多態(tài)性標(biāo)記。特定生物類型的基因組DNA經(jīng)某一種限制性內(nèi)切酶完全酶解后，會產(chǎn)生分子量不同的同源等位片段，或稱限制性等位片段，通過電泳的方法分離和檢測這些片段。凡是可以引起酶解位點(diǎn)變異的突變，如點(diǎn)突變（新產(chǎn)生和去除酶切位點(diǎn)）和一段DNA的重新組織（如插入和缺失造成酶切位點(diǎn)間的長度發(fā)生變化）等均可導(dǎo)致限制性等位片段的變化，從而產(chǎn)生RFLP。植物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用有哪些？可從（1）篩選突變體；（2）生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物；（3）其他應(yīng)用（克服遠(yuǎn)緣雜種的不育性，用于植物代謝生理學(xué)、生物化學(xué)等的研究）等方面展開闡述。在培養(yǎng)室中發(fā)現(xiàn)部分培養(yǎng)材料被污染，試分析原因。培養(yǎng)室中發(fā)現(xiàn)部分培養(yǎng)材料被污染，可能的原因主要如下：（需要展開討論，根據(jù)情況加分或扣分）（1）植物材料本身內(nèi)生菌的生長；（2）培養(yǎng)基滅菌不徹底；（3）培養(yǎng)基滅菌后，微生物從器皿的封口處進(jìn)入；（4）培養(yǎng)材料表面消毒不徹底；（5）無菌接種操作不規(guī)范；（6）接種室或超凈工作臺空氣不潔凈；（7）培養(yǎng)室空氣不潔凈或濕度較大。夏季，在培養(yǎng)室中發(fā)現(xiàn)大量培養(yǎng)物進(jìn)菌，試分析可能的原因?？蓮耐庵搀w、培養(yǎng)基、無菌操作、培養(yǎng)環(huán)境等方面進(jìn)行闡述。（要詳細(xì)展開）將一個(gè)抗病基因?qū)肓烁牧嫉哪康闹参铮ㄈ缢净蛴衩祝?，如何分析基因的功能？?）對導(dǎo)入抗病基因的目的植物進(jìn)行DNA水平分析（PCR或雜交分析）（3分）（2）對導(dǎo)入抗病基因的目的植物進(jìn)行RNA水平分析（RT-PCR）（3分）（3）對導(dǎo)入抗病基因的目的植物進(jìn)行蛋白質(zhì)水平分析（雜交分析）（3分）（4）對導(dǎo)入抗病基因的目的植物進(jìn)行抗病性鑒定。（6分）每一點(diǎn)要做適當(dāng)展開論述。種質(zhì)離體保存的意義?？蓮模?）種質(zhì)離體保存概念；（2）種質(zhì)離體保存同常規(guī)保存方法的異同（較小的空間保存大量的種