蔬菜水果中克百威的檢測 量子點(diǎn)微球熒光免疫層析法

蔬菜水果中克百威的檢測量子點(diǎn)微球熒光免疫層析法范圍本文件規(guī)定了蔬菜水果中克百威的量子點(diǎn)微球熒光免疫層析快速檢測方法。本文件適用于辣椒、青菜、豇豆、芹菜、韭菜、黃瓜、蘋果、柑橘和梨中克百威的快速檢測。本方法檢測克百威的檢出限為0.0035mg/kg，定量限為0.0085mg/kg。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB2763食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T27417合格評定化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南NY/T788-2018農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。原理本方法以量子點(diǎn)微球?yàn)闊晒鈽?biāo)記物，基于競爭抑制免疫層析技術(shù)原理，通過熒光信號讀取儀進(jìn)行數(shù)據(jù)讀取和分析，根據(jù)已設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物質(zhì)的含量，對蔬菜水果中的克百威進(jìn)行半定量或定量檢測。試劑和材料除另有說明外，所用試劑均為分析純水：應(yīng)符合GB/T6682，二級水。克百威標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度≥99%，或經(jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。乙腈（C2H3N）。磷酸氫二鉀（K2HPO4）。磷酸二氫鉀（KH2PO4）。樣品提取液配置：準(zhǔn)確稱取5.6g磷酸氫二鉀（5.4）、0.41g磷酸二氫鉀（5.5），乙腈（5.3）100mL用水溶解并定容至1L。樣本凈化管：不同廠家材料可能不一致，本方法不做規(guī)定，目的為樣本基質(zhì)凈化。樣品稀釋液配置（0.01mol/L磷酸鹽緩沖液）：準(zhǔn)確稱取5.6g磷酸氫二鉀（5.4）、0.41g磷酸二氫鉀（5.5），用水溶解并定容至1L克百威標(biāo)準(zhǔn)品儲存液（100mg/L）：準(zhǔn)確稱取克百威標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（5.2）10mg（精確至0.01mg），置于100mL容量瓶中，用乙腈（5.3）溶解并定容至刻度，搖勻后-20°C冷凍避光保存，有效期6個月。儀器和設(shè)備分析天平：感量分別為0.01g和0.01mg。微量移液器：20～200μL、100～1000μL和1～10mL。旋渦混合器：轉(zhuǎn)速≥2500r/min。恒溫孵育器：設(shè)定溫度誤差不超過±1度。熒光免疫分析儀：激發(fā)波長為365±5nm，發(fā)射波長為610±5nm。離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥4000r/min。攪碎機(jī)：轉(zhuǎn)速≥5000r/min。離心管：1.5mL和50mL?？税偻孔狱c(diǎn)微球熒光免疫層析快速檢測卡（含ID卡，內(nèi)設(shè)對應(yīng)批次標(biāo)準(zhǔn)曲線）。試樣制備分樣和粉碎取不少于100g具有代表性的蔬菜水果樣品，充分均質(zhì)混勻，分別裝入潔凈容器作為試樣和留樣，密封，標(biāo)記，留樣置于-20°C避光保存。蔬菜水果取樣部位參考NY/T788-2018《農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》。試樣前處理準(zhǔn)確稱取2g±0.1g樣本于50mL離心管中。向上述離心管中依次加入樣本提取劑3mL（5.6），蓋上蓋子漩渦混勻2min。取1mL提取后上清液到一支樣本凈化管（5.7）中，在漩渦振蕩器上震蕩混勻1min，4000rpm離心2min。取50μL離心后上清液加入700μL克百威樣本稀釋液（5.8），混勻后用于檢測。注：不同廠家檢測卡所用的樣品前處理方法可能不同，應(yīng)按照產(chǎn)品使用說明中規(guī)定方法進(jìn)行操作。檢測步驟測試前打開熒光免疫分析儀（6.5），確認(rèn)試劑盒中的ID卡與試劑盒的批號是否匹配后插入ID卡，在儀器測試界面點(diǎn)擊“讀ID卡/讀項(xiàng)目”，界面出現(xiàn)“讀取完成”，點(diǎn)擊“確認(rèn)”即可使用。將恒溫孵育器（6.4）開機(jī)，待溫度升至37℃即可使用。從包裝鋁箔袋中取出檢測卡，在半小時(shí)內(nèi)使用。將檢測卡平放，用微量移液器吸取90μL稀釋后的待測液于檢測卡的加樣孔（S）中，在恒溫孵育器中37℃孵育反應(yīng)10min。反應(yīng)時(shí)間結(jié)束后立即將檢測卡插入讀取儀中，點(diǎn)擊儀器界面的“測試”，儀器會自動給出定量測試結(jié)果，15min后測試無效。注：不同廠家讀卡儀所用儀器界面設(shè)置可能不同，應(yīng)按照儀器使用說明中規(guī)定方法進(jìn)行。9結(jié)果表述樣品中克百威的含量由熒光分析儀自動計(jì)算并顯示，單位為毫克/千克（mg/kg）。10其他本方法參比標(biāo)準(zhǔn)為GB23200.112《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)植物源性食品中9種氨基甲酸酯類農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測定液相色譜-柱后衍生法》。注：性能指標(biāo)計(jì)算方法見附錄A。附錄A（資料性）產(chǎn)品性能指標(biāo)計(jì)算A.1檢出限和定量限通過對20個獨(dú)立的空白樣品進(jìn)行測定，檢出限以空白樣品20次測定結(jié)果的均值加3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差計(jì)算；定量限以空白樣品20次測定結(jié)果的均值加10倍標(biāo)準(zhǔn)偏差計(jì)算。A.2準(zhǔn)確度綜合考慮目標(biāo)分析物國家標(biāo)準(zhǔn)限量值或禁用目標(biāo)分析物的參比方法定量限，制備低、中、高三個濃度水平的盲樣，每個濃度水平進(jìn)行至少6次重復(fù)實(shí)驗(yàn)。三個濃度水平的平均加標(biāo)回收率應(yīng)在70-130%（需討論確定）。A.3重復(fù)性采用三批驗(yàn)證產(chǎn)品進(jìn)行檢測，每批至少6次重復(fù)測定中等濃度水平的樣品，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）應(yīng)小于15%。A.4特異性目標(biāo)分析物及其結(jié)構(gòu)類似物的標(biāo)準(zhǔn)品用緩沖液配制成系列梯度濃度，做出標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出IC50（半抑制濃度）后按照式（1）計(jì)算交叉反應(yīng)率。（1）A.5假陰性率在實(shí)驗(yàn)條件下達(dá)到的實(shí)際最低檢