化妝品中地氯雷他定等51種原料的檢驗方法

附件17化妝品中地氯雷他定等51種原料的檢驗方法Determinationofdesloratadineandother50kindsofcomponentsincosmetics1范圍本方法規(guī)定了采用高效液相色譜-質(zhì)譜法測定化妝品中的地氯雷他定等51種原料，包括定性與定量。本方法適用于膏霜乳液類、液態(tài)水基類、液態(tài)油基類、凝膠類、面膜類、粉類、蠟基類等化妝品中地氯雷他定等51種原料的定性與定量。2方法提要樣品以10mmol/L乙酸銨甲醇為溶劑提取，采用高效液相色譜儀分離，質(zhì)譜檢測器檢測，根據(jù)保留時間和特征離子對的相對豐度比定性，定量離子對峰面積定量，以標準曲線法計算含量。本方法對地氯雷他定等51種原料的檢出限均為1ng/mL，定量下限均為2ng/mL，如以取樣品0.2g，定容體積50mL計，檢出濃度均為0.250μg/g，最低定量濃度均為0.500μg/g。3試劑和材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純或以上規(guī)格，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。3.1甲醇，色譜純。3.2乙酸銨，色譜純。3.310mmol/L乙酸銨溶液：稱取乙酸銨（3.2）0.77g，加水1000mL溶解，用0.22μm濾膜過濾。3.410mmol/L乙酸銨甲醇溶液：稱取乙酸銨（3.2）0.77g，加甲醇（3.1）1000mL溶解，搖勻。3.5標準儲備溶液分別稱取地氯雷他定等51種原料的標準品（附表1）10mg（精確到0.00001g）置于10mL棕色容量瓶中，加甲醇（3.1）使溶解并定容至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為1.0mg/mL的標準儲備溶液。置于-18℃冰箱中貯存。3.6混合標準儲備溶液分別精密移取各待測組分標準儲備溶液（3.5）1.0mL于100mL棕色容量瓶中，用甲醇（3.1）稀釋并定容至刻度，作為混合標準儲備液。置于-18℃冰箱中貯存。4儀器和設(shè)備4.1液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀。4.2分析天平。4.3離心機。4.4超聲波清洗儀。4.5渦旋混合儀。注：①由于部分吩噻嗪類原料在個別液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀上有殘留現(xiàn)象，這可能與其中的管道種類和儀器清洗有關(guān)，因此在實驗時應確認儀器沒有影響實驗結(jié)果的殘留存在。②異丙嗪、羅沙替丁醋酸酯等不穩(wěn)定，儲備溶液避光-18℃保存。僅作定性判定時，可根據(jù)實驗室具體儲存條件，在不影響定性判定前提下制定儲存時間。在定量測定時，臨用新制標準儲備溶液（3.5）。5分析步驟5.1篩查用混合標準系列溶液的制備分別取混合標準儲備液（3.6）適量，用10mmol/L乙酸銨甲醇溶液（3.4）進行稀釋，配制成各待測組分濃度依次為2、4、10、20、50ng/mL的篩查用混合標準系列溶液。5.2基質(zhì)標準工作溶液的制備取與待測化妝品配方相同或相近的基質(zhì)空白樣品5份于50mL具塞比色管中（0.2g/份），分別加入混合標準品儲備溶液（3.6）適量，按樣品處理操作步驟處理，配制成各待測組分濃度為2、4、10、20、50ng/mL的系列溶液（濃度范圍可根據(jù)實際情況進行調(diào)整）。5.3樣品處理準確稱取化妝品樣品（實際樣品或基質(zhì)空白樣品）0.2g（精確到0.0001g），置于50mL具塞比色管中，加入10mmol/L乙酸銨甲醇溶液（3.4）20mL（蠟基、油基等樣品先加入1~2mL四氫呋喃，渦旋分散樣品）渦旋30s，使樣品分散，冰浴超聲20min，用10mmol/L乙酸銨甲醇溶液（3.4）定容至刻度，搖勻。必要時以10000r/min離心5min。取上清液經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾，續(xù)濾液作為待測溶液。待測溶液需在4℃條件下24h內(nèi)完成測定。5.4儀器參考條件5.4.1色譜條件色譜柱：C18柱（3.0mm×100mm，1.8μm），或等效色譜柱；流動相：溶液A：10mmol/L乙酸銨溶液(3.3)，溶液B：甲醇（3.1），梯度洗脫程序見表1；表1流動相的梯度洗脫程序時間/minV（流動相A）/%V（流動相B）/%09010450506356514010020010020.19010259010流速：0.3mL/min；柱溫：30℃；進樣量：2μL;樣品盤溫度：4℃。5.4.2質(zhì)譜參考條件離子源：電噴霧離子源（ESI源）；監(jiān)測模式：正離子、負離子多離子反應監(jiān)測模式，監(jiān)測離子對及相關(guān)參數(shù)設(shè)定見表2（可根據(jù)儀器情況調(diào)整）；0~4min：不進入質(zhì)譜儀分析，4~18min：進入質(zhì)譜儀分析，18~25min：不進入質(zhì)譜儀分析。表2地氯雷他定等51種原料的監(jiān)測離子對及相關(guān)參數(shù)設(shè)定表序號組分母離子（m/z）子離子（m/z）Frag（V）CE（V）1法莫替丁338.1189.1*9015259.182雷尼替丁315.2176.0*10515130.0253西咪替丁253.1159.2*9510117.0134尼扎替丁332.1155.0*11518232.1155羅沙替丁醋酸酯349.2222.1*13523107.0456非尼拉敏241.2196.1*10010167.0507多西拉敏271.1182.2*9512167.1368依匹斯汀250.1193.0*16538131.0359阿伐斯汀349.2278.0*11013260.02810美沙吡林262.2217.1*9510119.32211曲尼司特326.1266.0*-125-20282.0-1312奧洛他定338.2165.0*13025247.12513二氧丙嗪317.286.2*13525272.12014貝托斯汀389.1202.0*12518167.05015依美斯汀303.3246.0*14525174.03516曲吡那敏256.2211.1*951091.13817氯苯那敏275.1230.1*10014167.14518非索非那定502.3466.0*12528171.04219溴苯那敏319.1273.9*10515167.04920曲普利啶279.2208.0*9510193.03521苯海拉明256.2167.1*859165.04722地氯雷他定311.1259.1*13522294.11823酮替芬310.296.1*1352582.04424拉呋替丁432.2351.2*11515193.12825西替利嗪389.1201.0*11520166.15026氮卓斯汀382.1112.0*1002558.26027二苯拉林282.2167.1*9525152.15028美喹他嗪323.283.1*13528212.03029咪唑斯汀433.2109.0*11050308.02230去氯羥嗪341.2167.0*10515165.06031賽克利嗪267.1167.1*8512152.14532氯苯沙明304.2215.1*8010179.13033異丙嗪285.186.2*10015198.02534賽庚啶288.296.2*14025191.03035氯馬斯汀344.2215.0*10014130.0836羥嗪375.2201.0*11520166.14537阿司咪唑459.3135.1*16042218.12638司他斯汀358.2215.0*10015144.1839氯丙嗪319.186.2*1201758.04540特非那定472.3436.3*16526454.32041氯環(huán)利嗪301.2201.0*8010166.03542奮乃靜404.2171.1*15024143.23043氯雷他定383.1337.0*15025267.03644克立咪唑326.284.1*12525255.01545盧帕他定416.2309.0*12515282.02046氟奮乃靜438.2171.1*16025143.13547洛美利嗪469.2181.0*12515166.04548氟桂利嗪405.2405.2*1000203.01249桂利嗪369.2167.0*10020152.06250依巴斯汀470.3167.0*13528203.03151美克洛嗪391.2201.0*8012165.060注：*定量離子對。曲尼司特為負離子模式。5.5定性判定取樣品溶液與篩查用混合標準系列溶液（5.1），在相同試驗條件下測定，樣品中如呈現(xiàn)定量離子對和定性離子對的色譜峰，被測組分的特征離子峰保留時間與標準溶液對應的保留時間一致，且選擇的定性離子的相對豐度比與相當濃度標準品溶液的定性離子的相對豐度比的最大偏差不超過表3的規(guī)定，則可以判定樣品中存在對應的地氯雷他定等51種原料。表3定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度（k）k>50%50%≥k>20%20%≥k>10%k≤10%允許的最大偏差±20%±25%±30%±50%5.6定量測定對5.5篩查結(jié)果為陽性的樣品，需測定含量。取基質(zhì)標準工作溶液（5.2）依次測定，以待測成分的系列濃度為橫坐標，待測成分的峰面積為縱坐標，進行線性回歸，建立基質(zhì)標準曲線，其線性相關(guān)系數(shù)（r）應不小于0.99。取樣品溶液測定，將對應的定量離子色譜峰面積代入線性回歸方程，按“6.1計算”項下公式，計算樣品中各成分的含量。注：采用基質(zhì)標準曲線定量測定陽性樣品時，可通過加標回收試驗等方法來選擇合適的基質(zhì)制備基質(zhì)標準工作溶液。如沒有合適的基質(zhì)，可采用標準加入法測定待測組分的含量。如無明顯基質(zhì)效應，可不用制備基質(zhì)標準工作溶液，采用溶液標準曲線測定待測組分的含量。6分析結(jié)果的表述6.1計算QUOTEQUOTEQUOTE式中：ω——化妝品中的地氯雷他定等51種原料質(zhì)量分數(shù)，μg/g；ρ——樣品溶液中地氯雷他定等51種原料的質(zhì)量濃度，μg/mL；V——樣品定容體積，mL；m——樣品取樣量，g；D——稀釋倍數(shù)（不稀釋則為1）。相同條件下獲得的兩次獨立測試結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的15%。6.2回收率和精密度多家實驗室驗證回收率為80.1～114.1%，相對標準偏差小于11%。7圖譜圖1混合標準溶液HPLC-MS/MS色譜圖1.法莫替?。?.28min）；2.雷尼替?。?.60min）；3.西咪替?。?.23min）；4.尼扎替?。?.55min）；5.羅沙替丁醋酸酯（7.47min）；6.非尼拉敏（7.92min）；7.多西拉敏（8.09min）；8.依匹斯?。?.23min）；9.阿伐斯汀（8.66min）；10.美沙吡林（8.67min）；11.曲尼司特（8.69min）；12.奧洛他定（8.73min）；13.二氧丙嗪（8.99min）；14.貝托斯?。?.13min）；15.依美斯?。?.15min）；16.曲吡那敏（9.17min）；17.氯苯那敏（9.42min）；18.非索非那定（9.63min）；19.溴苯那敏（9.74min）；20.曲普利啶（9.94min）；21.苯海拉明（10.04min）；22.地氯雷他定（10.05min）；23.酮替芬（10.19min）；24.拉呋替丁（10.33min）；25.西替利嗪（10.90min）；26.氮卓斯?。?1.00min）；27.二苯拉林（11.10min）；28.美喹他嗪（11.36min）；29.咪唑斯?。?1.53min）；30.去氯羥嗪（11.55min）；31.賽克利嗪（12.04min）；32.氯苯沙明（12.36min）；33.異丙嗪（12.57min）；34.賽庚啶（12.91min）；35.氯馬斯汀（12.97min）；36.羥嗪（13.07min）；37.阿司咪唑（13.26min）；38.司他斯?。?3.30min）；39.氯丙嗪（13.44min）；40.特非那定（13.54min）；41.氯環(huán)利嗪（13.72min）；42.奮乃靜（13.77min）；43.氯雷他定（13.87min）；44.克立咪唑（13.94min）；45.盧帕他定（13.95min）；46.氟奮乃靜（13.96min）；47.洛美利嗪（14.92min）；48.氟桂利嗪（15.69min）；49.桂利嗪（15.78min）；50.依巴斯?。?5.81min）；51.美克洛嗪（16.84min）附錄A附表1地氯雷他定等51種原料標準品信息表序號中文名稱英文名稱CAS號分子式相對分子質(zhì)量1法莫替丁Famotidine76824-35-6C8H15N7O2S3337.452雷尼替丁Ranitidine66357-35-5C13H22N4O3S314.403西咪替丁Cimetidine51481-61-9C10H16N6S252.344尼扎替丁Nizatidine76963-41-2C12H21N5O2S2331.465羅沙替丁醋酸酯RoxatidineAcetate78628-28-1C19H28N2O4348.446非尼拉敏Pheniramine86-21-5C16H20N2240.347多西拉敏Doxylamine469-21-6C17H22N2O270.378依匹斯汀Epinastine80012-43-7C16H15N3249.319阿伐斯汀Acrivastine87848-99-5C22H24N2O2348.4410美沙吡林Methapyrilene91-80-5C14H19N3S261.3911曲尼司特Tranilast53902-12-8C18H17NO5327.3412奧洛他定Olopatadine113806-05-6C21H23NO3337.4113二氧丙嗪Dioxopromethazine13754-56-8C17H20N2O2S316.4214貝托斯汀Bepotastine125602-71-3C21H25ClN2O3388.8915依美斯汀Emedastine87233-61-2C17H26N4O302.4116曲吡那敏Tripelennamine91-81-6C16H21N3255.3617氯苯那敏Chlorpheniramine132-22-9C16H19ClN2274.7918非索非那定Fexofenadine83799-24-0C32H39NO4501.6619溴苯那敏Brompheniramine86-22-6C16H19BrN2319.2420曲普利啶Triprolidine486-12-4C19H22N2278.3921苯海拉明Diphenhydramine58-73-1C17H21NO255.3522地氯雷他定Desloratadine100643-71-8C19H19ClN2310.8323酮替芬Ketotifen34580-13-7C19H19NOS309.4224拉呋替丁Lafutidine118288-08-7C22H29N3O4S431.5525西替利嗪Cetirizine83881-51-0C21H25ClN2O3388.8926氮卓斯汀Azelastine58581-89-8C22H24ClN3O381.9027二苯拉林Diphenylpyraline147-20-6C19H23NO281.3928美喹他嗪Mequitazine29216-28-2C20H22N2S322.4729咪唑斯汀Mizolastine108612-45-9C24H25FN6O432.4930去氯羥嗪Decloxizine3733-63-9C21H28N2O2340.4631賽克利嗪Cyclizine82-92-8C18H22N2266.3832氯苯沙明Chlorphenoxamine77-38-3C18H22ClNO303.8333異丙嗪Promethazine60-87-7C17H20N2S284.4234賽庚啶Cyproheptadine129-03-3C21H21N287.4035氯馬斯汀Cl