全國艾滋病檢測技術規(guī)范2015版

全國艾滋病檢測技術規(guī)范2015版內容抗體篩查方法及策略確證檢測方法及策略確證結果判讀及報告123一HIV篩查方法及策略1樣本的采集和處理23實驗室檢測方法HIV抗體篩查策略樣本的采集和處理2009版2015版全血、血清、血漿、唾液、尿液以及DBS樣品可用于HIV抗體檢測。全血、血清、血漿、口腔黏膜滲出液、尿液以及干血斑樣品可用于HIV抗體檢測。樣品的采集和處理尿液和口腔黏膜滲出液1.尿液：推薦使用專用采尿管，保持尿液穩(wěn)定。尿液樣品可采集隨機尿，女性經期應取中段尿。2.口腔黏膜滲出液：使用試劑盒提供的容器收集樣品。存放時間和是否凍存以試劑盒說明書為準?？谇火つB出液應采集口腔滲出液,不是唾液。樣本的采集和處理1.用于抗體和抗原檢測的血清或血漿樣品，短期（1周）內進行檢測的可存放于2～8℃，

一周以上應存放于-20℃以下。2.口腔黏膜滲出液樣品應即刻使用，需要保存應以產品說明書為準。.尿液樣品，使用專用采尿管，室溫下可保存2周，一年之內存放宜在2～8℃。長期保存（一年以上）的樣本凍存條件、是否添加防腐劑等以產品說明書為準。34.篩查陽性樣品應及時進行補充試驗，篩查陰性樣品，可根據(jù)具體需要決定保存時間，建議至少保存1個月。特殊用途或專項項目的樣品根據(jù)具體要求確定保存時間。補充試驗陽性樣品按照國家生物樣品管理的有關規(guī)定執(zhí)行。樣本的采集和處理12.應符合生物安全要求；要獲得相應部門批準并由具

有資質的人員專程護送。.全血、血漿的運送應符合生物安全要求，參照《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規(guī)定》(衛(wèi)生部第45號令,2006年2月1日執(zhí)行)。樣本的采集和處理第三條

本規(guī)定適用于可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理工作。第四條

運輸高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本，應當經省級以上衛(wèi)生行政部門批準。未經批準，不得運輸。樣本的采集和處理第九條

申請在省、自治區(qū)、直轄市行政區(qū)域內運輸高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本的，由省、自治區(qū)、直轄市衛(wèi)生行政部門審批。第十條

申請跨省、自治區(qū)、直轄市運輸高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本的，應當將申請材料提交運輸出發(fā)地省級衛(wèi)生行政部門進行初審；對符合要求的，省級衛(wèi)生行政部門應當在3個工作日內出具初審意見，并將初審意見和申報材料上報衛(wèi)生部審批。樣本的采集和處理運輸高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本的交通工具：1、民航托運：由民航主管部門批準的航空承運人(國航、東方）和機場實施運輸。2、第十三條

專車運輸：要求兩人以上護送樣本的采集和處理?對于違反本規(guī)定的行為，依照《病原微生物實驗室生物安全管理條例》第六十二條、六十七條的有關規(guī)定予以處罰。?第六十二條

未經批準運輸高致病性病原微生物菌（毒種或者樣本，或者承運單位經批準運輸高致病性病原微）生物菌（毒）種或者樣本未履行保護義務，導致高致病性病原微生物菌（毒）種或者樣本被盜、被搶、丟失、泄漏的，由縣級以上地方人民政府衛(wèi)生主管部門、獸醫(yī)主管部門依照各自職責，責令采取措施，消除隱患，給予警告；造成傳染病傳播、流行或者其他嚴重后果的，由托運單位和承運單位的主管部門對主要負責人、直接負責的主管人員和其他直接責任人員，依法給予撤職、開除的處分；構成犯罪的，依法追究刑事責任。12?第六十七

條發(fā)生病原微生物被盜、被搶、丟失、泄漏，承運單位、護送人、保藏機構和實驗室的設立單位未依照本條例的規(guī)定報告的，由所在地的縣級人民政府衛(wèi)生主管部門或者獸醫(yī)主管部門給予警告；造成傳染病傳播、流行或者其他嚴重后果的，由實驗室的設立單位或者承運單位、保藏機構的上級主管部門對主要負責人、直接負責的主管人員和其他直接責任人員，依法給予撤職、開除的處分構成犯罪的，依法追究刑事責任。；13樣本的采集和處理1.樣品種類由唾液變?yōu)榭谇徽衬B出液，專門介紹了口腔黏膜滲出液和尿液樣本；23.篩查陰性樣品由建議保存1-2月變?yōu)榻ㄗh至少保存1個月；.確證樣本由至少保存10年，變?yōu)榘凑諊疑飿悠饭芾淼南嚓P規(guī)定執(zhí)行。4.《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規(guī)定》(衛(wèi)生部第45號令,2006年2月1日執(zhí)行)篩查方法1.酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）這類試驗可使用血液（包含血清、血漿和濾紙干血斑）、尿液樣品

，HIV抗原抗體聯(lián)合檢測試劑可同時檢測血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗體。.快速檢測（RT）這類試驗可使用血液、口腔黏膜滲出液，操作簡便快速，2適用于應急檢測、門診急診檢測。一般可在10～30分鐘內得出結果。明膠顆粒凝集試驗（PA），免疫滲濾試驗，免疫層析試驗。大家熟悉的HIV抗體篩查檢測流程樣

品選用篩查試劑初篩試驗陽性反應陰性反應原有試劑＋另一不同原理（或廠家）試劑或另外兩種不同原理（或廠家）試劑復檢試驗一陰一陽報告陰性均陽性反應均陰性反應報告陰性確證試驗16HIV抗體檢測策略通過檢測樣本中是否存在艾滋病病毒抗體、抗原或者核酸而確定艾滋病病毒感染的檢測方法。補充試驗包括抗體確證試驗（免疫印跡試驗，條帶/線性免疫試驗，特定條件下的替代檢測，免疫層析或免疫滲濾試驗）和核酸試驗（核酸定性和核酸定量試驗）補充實驗HIV抗體檢測策略試劑-1有反應無反應試劑1雙份或雙孔檢測或兩種試劑*均有反應一有反應

,一無反應均無反應報告HIV抗體陰性補充實驗圖2使用抗體檢測試劑的檢測流程HIV抗體檢測策略不區(qū)分抗原抗體的檢測試劑有反應無反應抗體檢測有反應無反應報告HIV抗體陰性P24抗原陰性補充試驗HIV-1核酸試驗或P24抗原試驗或2-4周后隨訪圖3使用不區(qū)分抗原抗體聯(lián)合檢測試劑的檢測*雙份或雙孔區(qū)分抗原抗體檢測試劑抗體有反應抗原有反應抗體有反應抗原無反應抗體無反應抗原有反應抗體無反應抗原無反應抗體檢測*有反應無反應抗體確證試驗HIV-1核酸試驗或2~4周后隨訪報告HIV抗體陰性，HIVP24抗原陰性圖4區(qū)分抗原抗體檢測試劑檢測流程*雙份或雙孔附表1HIV抗體篩查檢測報告編號送檢日期送檢單位年月日全血□

血漿□

血清□口腔黏膜滲出液□

尿□

其它：送檢人群送檢樣品姓名性別民族年齡職業(yè)婚姻狀況國籍文化程度身份證現(xiàn)住址□□□□□□□□□□□□□□□□□□聯(lián)系電話_____省_____市_____縣_____鄉(xiāng)（鎮(zhèn)、街道）_____村_____（門牌號）戶籍地址_____省_____市_____縣_____鄉(xiāng)（鎮(zhèn)、街道）_____村_____（門牌號）篩查復檢（第一次）復檢（第二次）ELISA□

PA□化學發(fā)光□

RT□其它實驗：______ELISA□

PA□化ELISA□

PA□化學發(fā)光□

RT□檢測方法學發(fā)光□

RT□實驗：______其它其它實驗：______檢測日期試劑廠家年

月

日年

月

日年

月

日批

號有效日期檢測結果有反應□

無反應□ＨＩＶ抗體

陰性□有反應□

無反應□有反應□

無反應□篩查結論檢測者HIV感染待確定□審核者檢測單位（公章）：備注：電話:郵編:二一確證檢測方法及策略12實驗方法確證策略3結果判讀及報告抗體確證方法123.免疫印跡試驗（WB）.條帶/線性免疫試驗（RIBA/LIA）.其他方法：可用于確證的特定條件下的三種酶聯(lián)免疫、三種快速實驗或酶聯(lián)加快速試驗，免疫層析和免疫滲濾試驗。HIV抗體確證策略篩查試驗陽性反應樣品確證試劑陰性反應報告陰性HIV-1陽性反應

不確定反應報告HIV-1陽性出現(xiàn)HIV-2指示條帶根據(jù)具體情況進一步檢測HIV-2組合流行病學資料，可以在4周后隨訪檢測，如帶型沒有進展或呈陰性反應則報告陰性；如隨訪期間出現(xiàn)陽性反應，則報告陽性；如隨訪期間帶型有進展但不滿足陽性標準，應繼續(xù)隨訪直8周。如帶型沒有進展或呈陰性反應，則報告陰性；滿足HIV陽性抗體判斷標準則報告陽性，不滿足陽性判斷標準可根據(jù)具體情況決定是否繼續(xù)隨訪。HIV抗體檢測策略免疫印跡試驗(WB/RIBA)不確定陰性陽性出現(xiàn)HIV-2指示帶核酸試驗或2~4周后隨訪報告HIV-1抗體陰性報告HIV-1抗體陽性根據(jù)情況進一步檢測HIV-2圖5免疫印跡試驗流程三一確證結果判讀及報告在進行WB條帶判讀及結果解釋前，回顧一下HIV病毒的主要結構蛋白HIV病毒主要結構蛋白?ENV(包膜蛋白)：GP160、GP120、GP41??GAG(組抗原蛋白):P55、P24、P17POL(聚合酶蛋白)：P66、P51、P31完整帶型

-HIVBlot2.2EarlyHIVInfection11142086420p24antigengp160p24windowgp120gp4-101030507090110Days典型帶型

–

早期感染

有ENV和GAG印跡，沒有POLgp160gp120

感染后前30天,p24和gp160強度比例大約相等gp160/p24=1)p55(gp41

在非常早期有抗原沒有抗體時ENV(gp160)或GAG(p24)任何一個可以單獨出現(xiàn)p24p17IgGControlLateHIVInfection11142086420p24gp160gp120gp41P66p550200400600800100012001400160018002000days典型帶型

-感染晚期gp160?強

ENV印跡和弱的或陰性GAG和/或

POL印跡gp120p66–gp41p31p24IgGControl不典型血清圖譜-只有GAG條帶不典型血清圖譜-只有ENV條帶不典型血清圖譜-只有POL條帶結果判讀?按照試劑盒說明書判定標準，判斷待測樣品為陽性、陰性或不確定。國際組織推薦的判定標準組織機構WB檢測陽性判定標準美國ASTPHLD和CDC，1989p24,gp41,gp120/gp160之中任何二條法國全國輸血中心世界衛(wèi)生組織二條ENV（2）帶和GAG或POL帶二條ENV（2）帶，有或無GAG或POL帶美國泛美逆轉錄病毒血清標準協(xié)

一條ENV帶和p24或p31帶會（CRSS），1988美國紅十字會（ARC），1988中國CDC，2004GAG、POL和ENV各一條帶2條ENV帶（gp41和gp160/gp120）或1條ENV帶和p24帶澳大利亞國家參比實驗室（NRL）

一條ENV帶和任何三個GAG和POL1987帶德國病毒疾控協(xié)會（DVV）DIN58969，第41部分一條ENV帶和至少一條GAG和POL帶結果判讀我們（MP）推薦使用下列標準對MPDHIVBLOT2.2檢測結果進行分析。對顯現(xiàn)的每條條帶均應記錄，并將結果分析為陰性、陽性或不確定。顯現(xiàn)條帶分析結果陰性沒有病毒的特異性條帶只檢測出p17抗體，沒有其它條帶陰性檢測出2條ENV（gp160/gp41和gp120）及GAG（p17、p24、p55）或POL（p31、p51、p66）HIV-1陽性檢測出2條ENV（gp160/gp41和gp120）及GAG（p17、p24、p55