(高清版)GB 19192-2003 隱形眼鏡護(hù)理液衛(wèi)生要求

idtISO/DIS11980:1996隱形眼鏡護(hù)理液衛(wèi)生要求2003-06-13發(fā)布隱形眼鏡護(hù)理液的衛(wèi)生質(zhì)量直接關(guān)系到配戴者的眼睛健康。根據(jù)《中華人民共和國(guó)傳染病防治本標(biāo)準(zhǔn)等同采用ISO/DIS11981:1996與ISO/DIS11980:1996,并根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的基本原理、試驗(yàn)方法與評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，選擇適應(yīng)我國(guó)具體情況的技術(shù)要求、試驗(yàn)菌株與培養(yǎng)方法，參照采用ISO/CD14729:本標(biāo)準(zhǔn)第四章(對(duì)茄科鐮刀霉菌的消毒效果除外)為強(qiáng)制性，其余各章為推薦性。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)由上海市疾病預(yù)防控制中心負(fù)責(zé)起草，蘇州中化藥品工業(yè)有限公司、北京博士倫眼鏡護(hù)理產(chǎn)品有限公司、眼力健制藥有限公司參加起草。I1隱形眼鏡護(hù)理液衛(wèi)生要求lenscaresolutionISO/DIS11981:19961范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了隱形眼鏡(硬性鏡和/或軟性鏡)護(hù)理液的定義、技術(shù)要求、試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則以及包裝、標(biāo)志與使用說(shuō)明等要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于隱形眼鏡專用護(hù)理液產(chǎn)品。2引用標(biāo)準(zhǔn)下列標(biāo)準(zhǔn)所包含的條文，通過(guò)在本標(biāo)準(zhǔn)中引用而構(gòu)成為本標(biāo)準(zhǔn)的條文。本標(biāo)準(zhǔn)出版時(shí)，所示版本均為有效。所有標(biāo)準(zhǔn)都會(huì)被修訂，使用本標(biāo)準(zhǔn)的各方應(yīng)探討使用下列標(biāo)準(zhǔn)最新版本的可能性。GB15979—2002一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)ISO/DIS11980:1996光學(xué)儀器與光學(xué)器材——隱形眼鏡及其護(hù)理產(chǎn)品——臨床研究指導(dǎo)ISO/DIS11981:1996光學(xué)儀器與光學(xué)器材——隱形眼鏡和隱形眼鏡護(hù)理產(chǎn)品——隱形眼鏡及其護(hù)理產(chǎn)品物理相容性試驗(yàn)方法中華人民共和國(guó)藥典1995年版二部“澄清度檢查法”與“無(wú)菌檢查法”中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部《消毒技術(shù)規(guī)范》(第三版)第一分冊(cè)《實(shí)驗(yàn)技術(shù)規(guī)范》(1999)“消毒劑毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)”本標(biāo)準(zhǔn)采用下列定義。3.1隱形眼鏡護(hù)理液contactlenscaresolution專用于隱形眼鏡護(hù)理的，具有清潔、消毒、沖洗或保存鏡片，中和清潔劑或消毒劑，物理緩解(如潤(rùn)滑)隱形眼鏡引起的眼部不適等功能的溶液或可配制成溶液使用的可溶性固態(tài)制劑，包括使用時(shí)可直接或非直接接觸眼球的產(chǎn)品。隱形眼鏡護(hù)理液可分單一功能型與多功能型。單一功能型隱形眼鏡護(hù)理液系僅具有上述一種功能的產(chǎn)品；多功能型隱形眼鏡護(hù)理液系同時(shí)具有清潔、消毒、沖洗、保存四種功能的產(chǎn)品。3.2多次量產(chǎn)品multidoseproducts最小包裝容器內(nèi)的護(hù)理液容量能使用一次以上的產(chǎn)品。3.3一次量產(chǎn)品singledoseproducts最小包裝容器內(nèi)的護(hù)理液容量只能使用一次的產(chǎn)品。3.4清潔cleaning去除蛋白質(zhì)、有機(jī)物、污物等的處理。中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局2003-06-13批準(zhǔn)2004-02-01實(shí)施2殺滅或清除病原微生物使其達(dá)到無(wú)害化的處理。消除消毒劑和/或抗微生物劑抑/殺菌活性的處理。3.7有效成分activeingredient產(chǎn)品中具有清潔、消毒、中和等功能的組分。3.8拋棄日期discarddate多次量產(chǎn)品開封后的最長(zhǎng)使用期限。3.9有效期validdate自生產(chǎn)之日起，未開封的具有清潔、消毒、中和等功能的產(chǎn)品保持其上述功能的最長(zhǎng)有效使用期限。3.10保質(zhì)期guaranteedate自生產(chǎn)之日起，未開封的無(wú)上述功能的產(chǎn)品維持其最低有效成分含量的最長(zhǎng)使用期限。4技術(shù)要求隱形眼鏡護(hù)理液技術(shù)要求應(yīng)符合表1中的要求。表1隱形眼鏡護(hù)理液技術(shù)要求項(xiàng)目名稱理化性能外觀澄清液體液態(tài)成品原液與固態(tài)成品使用液直接與眼接觸的產(chǎn)品原液或使用液滲透壓(mosm/kg·H?O)*260～340直接與眼接觸的產(chǎn)品原液或使用液有效成分含量在標(biāo)示含量范圍內(nèi)所有產(chǎn)品過(guò)氧化氫殘留量/(mg/kg·H?O)*以過(guò)氧化氫為有效成分的產(chǎn)品與鏡片的物理相容性用護(hù)理液處理前后，鏡片的物理參數(shù)應(yīng)一致直接與鏡片接觸的產(chǎn)品原液或使用液微生物活菌計(jì)數(shù)/(cfu/g)不直接接觸眼睛的固態(tài)產(chǎn)品致病菌不得檢出不直接接觸眼睛的固態(tài)產(chǎn)品無(wú)菌檢查無(wú)菌生長(zhǎng)直接接觸眼睛的液態(tài)產(chǎn)品消毒效果〔殺滅率/(%)〕大腸桿菌具有消毒功能的產(chǎn)品金黃色葡萄球菌綠膿桿菌白色念珠菌茄科鐮刀霉菌安全性急性經(jīng)口毒性所有產(chǎn)品致突變?cè)囼?yàn)無(wú)致突變性或遺傳毒性3表1(完)項(xiàng)目名稱皮膚刺激無(wú)刺激性直接與眼接觸的產(chǎn)品原液或使用液眼刺激無(wú)刺激性皮膚變態(tài)反應(yīng)*極輕細(xì)胞毒性無(wú)細(xì)胞毒性穩(wěn)定性成品穩(wěn)定性符合產(chǎn)品標(biāo)識(shí)有效期或保質(zhì)期所有產(chǎn)品開封產(chǎn)品拋棄日期符合產(chǎn)品標(biāo)識(shí)拋棄日期多次量產(chǎn)品臨床試驗(yàn)無(wú)不良反應(yīng)含有新成分的各種產(chǎn)品；或有效成分與已上市產(chǎn)品濃度不一致的產(chǎn)品*有效成分為過(guò)氧化氫的護(hù)理液，用中和后產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)定。5試驗(yàn)方法隨機(jī)抽取三個(gè)批號(hào)的最小容量包裝產(chǎn)品進(jìn)行測(cè)試，每個(gè)批號(hào)至少抽取三件，三分之一用于檢測(cè)，三分之一必要時(shí)復(fù)測(cè)，三分之一留樣。5.1理化指標(biāo)5.1.1外觀按中華人民共和國(guó)藥典(1995年版二部)“澄清度檢查法”測(cè)試，應(yīng)符合表1中的相應(yīng)要求。取試樣20mL,在溫度(25±1)℃時(shí)用已校正的酸度計(jì)進(jìn)行測(cè)定，應(yīng)符合表1中的相應(yīng)要求。5.1.3滲透壓取0.5mL試樣，用滲透壓計(jì)測(cè)定。以蒸餾水或已知校正值的溶液做校正，以三次讀數(shù)的平均值為測(cè)定結(jié)果，應(yīng)符合表1中的相應(yīng)要求。5.1.4有效成分含量按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、中華人民共和國(guó)藥典、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的順序選擇測(cè)定方法。每份試樣平均測(cè)三次，取其平均值，應(yīng)符合表1中的相應(yīng)要求。5.1.5過(guò)氧化氫殘留量將護(hù)理液按說(shuō)明書規(guī)定的方法和最短作用時(shí)間進(jìn)行中和，取中和后樣液5.0mL至150mL錐形瓶?jī)?nèi)，加入10%硫酸5mL及蒸餾水10mL,以0.002mol/L高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，穩(wěn)定搖動(dòng)，滴定至粉紅色并至少保持15s為終點(diǎn)。同時(shí)作空白對(duì)照。按式(1)計(jì)算過(guò)氧化氫殘留量，應(yīng)符合表1中的相應(yīng)要求。式中：V——樣品消耗0.002mol/L高錳酸鉀溶液的體積，mL;V?——空白消耗0.002mol/L高錳酸鉀溶液的體積，mL;c——高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液的摩爾濃度。5.1.6與鏡片的物理相容性按ISO/DIS11981方法測(cè)試，應(yīng)符合表1中的相應(yīng)要求。5.2微生物指標(biāo)5.2.1固態(tài)樣品處理4精確稱取2.000g試樣，放入20.0mL0.03mol/L磷酸鹽緩沖液(PBS)內(nèi)(如產(chǎn)品中含有抑菌成分，則用中和劑代替PBS),完全溶解后取樣按下述方法進(jìn)行檢測(cè)。5.2.2活菌計(jì)數(shù)取1.0mL樣液接種營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，每管平行接種兩個(gè)平皿，于35℃~37℃培養(yǎng)48h,按式(2)計(jì)算平板上平均菌落數(shù)，應(yīng)符合表1中的相應(yīng)要求。活菌計(jì)數(shù)(cfu/g)=平板上平均菌落數(shù)×10 (2)5.2.3致病菌按GB15979—1995《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》附錄A中的方法進(jìn)行金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌檢測(cè)，應(yīng)符合表1中的相應(yīng)要求。注1:本試驗(yàn)用中和劑必須通過(guò)附錄D(標(biāo)準(zhǔn)的附錄)中規(guī)定的懸液定量中和劑鑒定試驗(yàn)。注2:如找不到合適中和劑，可按中華人民共和國(guó)藥典(1995年版二部)“無(wú)菌檢查法”中“薄膜過(guò)濾法”處理樣液，將薄膜直接接種相應(yīng)的培養(yǎng)基進(jìn)行檢測(cè)。5.2.4無(wú)菌檢查按中華人民共和國(guó)藥典(1995年版二部)“無(wú)菌檢查法”測(cè)試(如產(chǎn)品中含有抑菌成分，須先用薄膜過(guò)濾法處理),應(yīng)符合表1中的相應(yīng)要求。5.3消毒效果指標(biāo)見附錄A(標(biāo)準(zhǔn)的附錄),應(yīng)符合表1中的相應(yīng)要求。5.4安全性指標(biāo)5.4.1急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)、致突變?cè)囼?yàn)、皮膚刺激試驗(yàn)、眼刺激試驗(yàn)、皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)按中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部《消毒技術(shù)規(guī)范》(第三版)第一分冊(cè)《實(shí)驗(yàn)技術(shù)規(guī)范》(1999)“消毒劑毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)”測(cè)試，應(yīng)符合表1中的相應(yīng)要求。5.4.2細(xì)胞毒性試驗(yàn)見附錄B(標(biāo)準(zhǔn)的附錄),應(yīng)符合表1中的相應(yīng)要求。5.5穩(wěn)定性指標(biāo)見附錄C(標(biāo)準(zhǔn)的附錄),應(yīng)符合表1中的相應(yīng)要求。5.6臨床試驗(yàn)5.6.1須進(jìn)行臨床試驗(yàn)的產(chǎn)品：a)含有新成分的各種護(hù)理液：須進(jìn)行60位受試者3個(gè)月的臨床試驗(yàn)；b)有效成分高于已上市產(chǎn)品濃度的各種護(hù)理液：須進(jìn)行30位受試者1個(gè)月的臨床試驗(yàn)；c)有效成分低于已上市產(chǎn)品濃度的眼內(nèi)溶液以及具有清潔、消毒或中和作用的護(hù)理液：須進(jìn)行30位受試者1個(gè)月的臨床試驗(yàn)。5.6.2試驗(yàn)對(duì)照：必須設(shè)與受試者等量的配對(duì)對(duì)照。5.6.3試驗(yàn)方法：按ISO/DIS11980方法進(jìn)行，應(yīng)符合表1中的相應(yīng)要求。6檢驗(yàn)規(guī)則6.1出廠檢驗(yàn)6.2定期檢驗(yàn)定期檢驗(yàn)項(xiàng)目，過(guò)氧化氫殘留量、消毒效果每半年檢驗(yàn)一次；安全性、穩(wěn)定性每?jī)赡隀z驗(yàn)一次。6.3型式檢驗(yàn)型式檢驗(yàn)項(xiàng)目，包括本標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)要求的全部?jī)?nèi)容。在下列情形之一時(shí)，應(yīng)進(jìn)行型式檢驗(yàn)，——新產(chǎn)品；5——停產(chǎn)六個(gè)月以上重新恢復(fù)生產(chǎn)時(shí)；——衛(wèi)生主管部門提出進(jìn)行型式檢驗(yàn)時(shí)。6.4致突變?cè)囼?yàn)規(guī)定6.4.1我國(guó)首創(chuàng)或根據(jù)國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道首次進(jìn)行生產(chǎn)的新護(hù)理液：必須做三項(xiàng)致突變?cè)囼?yàn)。6.4.2從國(guó)外進(jìn)口在我國(guó)銷售、或國(guó)外已批準(zhǔn)生產(chǎn)現(xiàn)由我國(guó)生產(chǎn)的護(hù)理液：至少做兩項(xiàng)致突變?cè)囼?yàn)(基因水平和染色體水平)。6.4.3與國(guó)內(nèi)已獲準(zhǔn)生產(chǎn)的護(hù)理液屬同一類的產(chǎn)品：至少做一項(xiàng)致突變?cè)囼?yàn)。6.4.4定期檢驗(yàn)與型式檢驗(yàn)：至少做一項(xiàng)致突變?cè)囼?yàn)。7.1包裝7.1.1與隱形眼鏡護(hù)理液直接接觸的包裝材料：應(yīng)安全無(wú)害，不影響產(chǎn)品在有效期內(nèi)的衛(wèi)生質(zhì)量。7.1.2隱形眼鏡護(hù)理產(chǎn)品的運(yùn)輸包裝：應(yīng)能保護(hù)產(chǎn)品在運(yùn)輸、貯存過(guò)程中不受損壞。7.2標(biāo)志7.2.1銷售包裝標(biāo)志：應(yīng)用中文標(biāo)明產(chǎn)品名稱、主要有效成分、凈含量、生產(chǎn)批號(hào)、有效期或保質(zhì)期、制造商名稱與地址、批準(zhǔn)文號(hào)、執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)號(hào)，以及必要的使用說(shuō)明與注意事項(xiàng)。進(jìn)口產(chǎn)品還應(yīng)標(biāo)明經(jīng)銷商名稱與地址。7.2.2運(yùn)輸包裝標(biāo)志：應(yīng)用中文標(biāo)明產(chǎn)品名稱、規(guī)格與數(shù)量、生產(chǎn)批號(hào)、有效期或保質(zhì)期、制造商名稱與地址、批準(zhǔn)文號(hào)、執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)號(hào)，以及必要的注意事項(xiàng)。進(jìn)口產(chǎn)品還應(yīng)標(biāo)明經(jīng)銷商名稱與地址。7.3使用說(shuō)明7.3.1每一銷售包裝內(nèi)均應(yīng)附有使用說(shuō)明。7.3.2使用說(shuō)明必須用明確的中文標(biāo)明如下內(nèi)容：產(chǎn)品名稱與劑型、主要有效成分與含量、性能、適用范圍與禁忌、詳細(xì)使用方法與步驟、不良反應(yīng)或副作用、貯存條件、有效期或保質(zhì)期，以及注意事項(xiàng)。7.3.3一次量產(chǎn)品的使用說(shuō)明應(yīng)寫明“只能使用一次”;多次量產(chǎn)品說(shuō)明應(yīng)寫明“每次使用后必須立即6(標(biāo)準(zhǔn)的附錄)消毒效果試驗(yàn)方法用于確定隱形眼鏡護(hù)理液是否具有消毒功能。A2測(cè)試方法A2.1懸液定量殺菌試驗(yàn)A2.1.1試驗(yàn)微生物a)細(xì)菌：大腸桿菌(ATCC8739或8099)金黃色葡萄球菌(ATCC6538)綠膿桿菌(ATCC9027)A2.1.2操作程序A2.1.2.1取菌種3～14代營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面新鮮培養(yǎng)物(18h～24h),用0.03mol/L磷酸鹽緩沖液(PBS)洗下，稀釋成含菌量為1×10?cfu/mL～1×10?cfu/mL的菌懸液。A2.1.2.2從三批試樣中分別吸取10.0mL加入三支滅菌試管中，置20℃~25℃水浴5min。A2.1.2.3在試管中分別加入0.1mL菌懸液，使最終含菌量為1×10?cfu/mL～1×10°cfu/mL,混A2.1.2.4分別于四個(gè)不同作用時(shí)間(推薦最短消毒時(shí)間的25%、50%、75%、100%),各取1.0mL菌藥混合液移入9.0mL中和劑中，混勻。A2.1.2.5中和10min后，吸取其原液或10倍系列稀釋液1.0mL分別接種營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(細(xì)菌)、沙堡氏瓊脂培養(yǎng)基(酵母菌)或馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(霉菌),每管接種兩塊平板，細(xì)菌與酵母菌分別于35℃~37℃培養(yǎng)48h(細(xì)菌)或72h(酵母菌),霉菌于20℃~25℃培養(yǎng)10d～14d,作活菌計(jì)數(shù)，取其A2.1.2.6以0.03mol/LPBS代替樣品，按上述同樣方法加菌進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)作為陽(yáng)性對(duì)照。取PBS、中和劑各1.0mL分別接種營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或沙堡氏瓊脂培養(yǎng)基以及未接種的上述培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照。A2.1.2.7按式(A1)計(jì)算每種菌每個(gè)作用時(shí)間點(diǎn)的殺滅率：A2.1.2.8試驗(yàn)所選中和劑必須通過(guò)附錄D中規(guī)定的懸液定量中和劑鑒定試驗(yàn)，并且陰性對(duì)照必須無(wú)A2.2有機(jī)物對(duì)消毒效果影響試驗(yàn)A2.2.1試驗(yàn)微生物任選A2.1.1中的一種細(xì)菌進(jìn)行測(cè)試。A2.2.2操作程序A2.2.2.1取菌種3～14代營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面新鮮培養(yǎng)物(18h～24h),用0.03mol/LPBS洗下并稀釋，加入適量無(wú)菌小牛血清，使最終含血清量為10%,含菌量為1×10?cfu/mL～1×10°cfu/mL的菌懸液。GB19192—20037A2.2.2.2以懸液定量殺菌試驗(yàn)確定的最低有效濃度所需的最短作用時(shí)間為試驗(yàn)時(shí)間起點(diǎn)，以后按等差或等倍組距再選擇三個(gè)作用時(shí)間取樣檢測(cè)。A2.2.2.3以下步驟按A2.1.2.2～A2.1.2.8進(jìn)行。A2.2.3評(píng)價(jià)規(guī)定達(dá)到合格的最短有效作用時(shí)間與懸液定量殺菌試驗(yàn)結(jié)果相同，為有機(jī)物對(duì)產(chǎn)品殺菌作用無(wú)明顯影響；如最短有效作用時(shí)間延長(zhǎng)一倍或以上為有影響。A2.3模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)(鏡片定量殺菌試驗(yàn))A2.3.1試驗(yàn)微生物根據(jù)懸液定量殺菌試驗(yàn)結(jié)果，選擇抗力最強(qiáng)的一種細(xì)菌與酵母菌進(jìn)行測(cè)試。A2.3.2試驗(yàn)鏡片A2.3.2.1鏡片類型：分低含水非離子型與高含水離子型。A2.3.2.2試驗(yàn)鏡片必須是未使用過(guò)的新鏡片。A2.3.2.3鏡片應(yīng)凹面向上放入無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi)，在凹凸兩面頂點(diǎn)各接種0.01mL菌液。A2.3.3操作程序A2.3.3.1將試驗(yàn)鏡片(每組四片低含水非離子型與四片高含水離子型)以及陽(yáng)性對(duì)照鏡片(各兩片)分別放置于滅菌培養(yǎng)皿中，取試驗(yàn)菌液0.02mL接種于鏡片上(染菌量為2×10?cfu/片～1×10?cfu/片),于20℃~25℃吸收5min～10min。A2.3.3.2按生產(chǎn)商所提供的鏡片消毒的詳細(xì)說(shuō)明處理試驗(yàn)鏡片，包括清潔、消毒、沖洗、貯存的所有步驟。A2.3.3.3處理完畢，立即以無(wú)菌操作方法分別將試驗(yàn)鏡片移入5.0mL中和劑試管內(nèi)，振搖，使鏡片上的殘留菌被充分洗脫在中和劑中。A2.3.3.4按A2.1.2.5的方法進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。A2.3.3.5將未經(jīng)處理的陽(yáng)性對(duì)照鏡片以無(wú)菌操作方法分別移入5.0mL0.03mol/LPBS試管內(nèi)，振搖，充分洗脫鏡片上殘留菌，再按A2.1.2.5的方法進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。A2.3.3.6取0.03mol/LPBS、中和劑各1.0mL分別接種營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基與沙堡氏瓊脂培養(yǎng)基以及未接種的上述培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照。A2.3.3.7按式(A2)計(jì)算每種鏡片上每種菌的消除率：A2.3.3.8試驗(yàn)所選中和劑必須通過(guò)附錄D中規(guī)定的載體定量中和劑鑒定試驗(yàn)，并且陰性對(duì)照必須無(wú)菌生長(zhǎng)，否則重新測(cè)試。A2.3.4評(píng)價(jià)規(guī)定對(duì)細(xì)菌的消除率≥99.90%,對(duì)酵母菌的消除率≥90.00%為合格。8(標(biāo)準(zhǔn)的附錄)細(xì)胞毒性試驗(yàn)與評(píng)價(jià)方法將一定量受試物加入細(xì)胞培養(yǎng)液中培養(yǎng)細(xì)胞，通過(guò)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的影響來(lái)評(píng)價(jià)護(hù)理液對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的潛在毒性作用。B2試劑a)陽(yáng)性對(duì)照：64g/L苯酚溶液。b)陰性對(duì)照：下述培養(yǎng)基。c)細(xì)胞株：推薦使用L-929細(xì)胞(小鼠成纖維細(xì)胞),試驗(yàn)用細(xì)胞為傳代48h～72h生長(zhǎng)旺盛的細(xì)胞。d)培養(yǎng)基：Eagle’sMEN加入體積分?jǐn)?shù)為10%的小牛血清。e)磷酸鹽緩沖液(PBS)。無(wú)鈣鎂磷酸鹽緩沖液100.0mL酚紅溶液10.0mL200g/L氯化鎂溶液0.5mL100g/L氯化鈣溶液1.0mL水加至1000mLB3試驗(yàn)步驟B3.1細(xì)胞懸液制備：用細(xì)胞培養(yǎng)基配制4萬(wàn)個(gè)/mL細(xì)胞懸液分注于試管內(nèi)(1mL/管),陰性對(duì)照組13管(1管備用),材料組10管(1管備用),必要時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照組3管，置37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。B3.2受試物制備：取0.2mL受試物加入細(xì)胞培養(yǎng)液中，37℃培養(yǎng)24h。B3.3受試液交換：24h后，每管舍棄原培養(yǎng)液，陰性對(duì)照組9管用新鮮培養(yǎng)液交換，陽(yáng)性對(duì)照組用含64g/L苯酚的細(xì)胞培養(yǎng)液交換，受試物組用含體積分?jǐn)?shù)為50%受試液的新鮮培養(yǎng)液進(jìn)行交換，并對(duì)三支陰性對(duì)照管進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，其余置37℃繼續(xù)培養(yǎng)。B3.4細(xì)胞計(jì)數(shù)與吸光度測(cè)定B3.4.1分別于2、4、7天將對(duì)照組和試驗(yàn)組各三管進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)或吸光度測(cè)定，以判斷細(xì)胞的增殖度。B3.4.2細(xì)胞計(jì)數(shù)法：用含枸櫞酸鈉的結(jié)晶紫羅蘭染色，血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下計(jì)數(shù)，上下限不得超過(guò)10%,否則重新計(jì)數(shù)。B3.4.3分光光度計(jì)測(cè)定吸光度法(仲裁法):棄去原細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS洗滌，體積分?jǐn)?shù)為10%的甲醛溶液固定10min,水洗(2～3)次，加5g/L結(jié)晶紫羅蘭1.5mL染色3min,水洗(2～3)次，加10g/L十二烷基硫酸鈉3.5mL,用分光光度計(jì)在波長(zhǎng)588nm下測(cè)定吸光度。B4結(jié)果計(jì)算B4.1細(xì)胞計(jì)數(shù)法：細(xì)胞計(jì)數(shù)經(jīng)95%可信度的數(shù)理統(tǒng)計(jì)，得上限、平均數(shù)、下限，通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)計(jì)算相對(duì)增殖度(RGR),見式(B1)。9B4.2吸光度測(cè)定法：相對(duì)增殖度計(jì)算見式(B2)。B4.3毒性評(píng)定：按表B1規(guī)定把RGR值轉(zhuǎn)換成六級(jí)反應(yīng)以評(píng)定護(hù)理液毒性程度。表B1反應(yīng)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)相對(duì)增殖度75～9950～743級(jí)25～490B5評(píng)價(jià)規(guī)定B5.1試驗(yàn)結(jié)果為0級(jí)或1級(jí)反應(yīng)為合格。B5.2試驗(yàn)結(jié)果為2級(jí)反應(yīng)的，應(yīng)結(jié)合細(xì)胞形態(tài)分析，綜合評(píng)價(jià)。B5.3試驗(yàn)結(jié)果為3～5級(jí)反應(yīng)為不合格。(標(biāo)準(zhǔn)的附錄)穩(wěn)定性試驗(yàn)方法C1成品穩(wěn)定性試驗(yàn)用于確定隱形眼鏡護(hù)理液成品的有效期。C1.2測(cè)試方法C1.2.1自然留樣法將試樣放置25℃±2℃室溫條件下，定期(開始、3月、6月，以后每6個(gè)月一次)取樣檢測(cè)其理化性能(與鏡片物理相容性除外)、微生物情況，以及選擇附錄B中抗力最強(qiáng)的一種細(xì)菌進(jìn)行消毒效果試驗(yàn)。C1.2.2加速試驗(yàn)法將試樣放置45℃±2℃與相對(duì)濕度(75±5)%條件下，定期(開始、3月、6月)取樣檢測(cè)，指標(biāo)C1.3評(píng)價(jià)規(guī)定C1.3.1至少應(yīng)進(jìn)行6個(gè)月的自然留樣與加速試驗(yàn)。C1.3.2各項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果均應(yīng)符合表1中的相應(yīng)要求。C1.3.3自然留樣法可直接確定產(chǎn)品有效期。C1.3.4加速試驗(yàn)可根據(jù)溫度與自然留樣法溫度差(x)計(jì)算加速因數(shù)，計(jì)算公式為：加速因數(shù)=2.0/10(當(dāng)x=20時(shí)，2.02.0=4)。然后用加速因數(shù)乘以試驗(yàn)時(shí)間推測(cè)產(chǎn)品有效期，但不得超過(guò)兩年。C2開封產(chǎn)品拋棄日期試驗(yàn)用于確定多次量隱形眼鏡護(hù)理產(chǎn)品開封后的拋棄日期。C2.2測(cè)試方法C2.2.1試驗(yàn)微生物：選擇消毒效果試驗(yàn)(附錄B)中抗力最強(qiáng)的一種細(xì)菌與一種酵母菌(白色念珠菌)。C2.2.2接種日期：試驗(yàn)開始、第2周，擬拋棄日期的25%、50%、75%、100%。C2.2.3取樣日期：第1、2、3、4周，擬拋棄日期的25%、50%、75%、100%,擬拋棄日期后2周。C2.2.4操作程序C2.2.4.1每種菌每批次取試樣50mL于滅菌試管內(nèi)，加入0.5mL含菌量為10°cfu/mL菌懸液，混勻，使最終菌量為10?cfu/mL,置于20℃~25℃。如產(chǎn)品對(duì)光敏感，應(yīng)遮光貯存。C2.2.4.2在上述取樣日期，每管吸取1.0mL試樣移入9.0mL中和劑中，混勻。C2.2.4.3中和10min后，取樣液或10倍系列稀釋液1.0mL分別接種營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(細(xì)菌)或沙堡氏瓊脂培養(yǎng)基(酵母菌),每管接種兩個(gè)平皿，于35℃~37℃培養(yǎng)48h(細(xì)菌)或72h(酵母菌),進(jìn)行活C2.2.4.4分別以0.03mol/LPBS與中和劑代替試樣，按上述方法加菌進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)作為陽(yáng)性對(duì)照與中和劑對(duì)照；同時(shí)分別用1.0mL0.03mol/LPBS與中和劑接種營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基與沙堡氏瓊脂培養(yǎng)基以及未接種的上述培養(yǎng)基作陰性對(duì)照。C2.2.4.5在上述再接種日期(2周及以后),在試樣中加入0.5mL含量為10cfu/mL菌懸液，混勻，使最終菌量為103cfu/mL。在再接種前取樣進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。C2.2.4.6計(jì)算每種菌的減少率：C2.2.5評(píng)價(jià)規(guī)定a)陰性對(duì)照無(wú)菌生長(zhǎng)，中和劑對(duì)照活菌數(shù)達(dá)到陽(yáng)性對(duì)照活菌數(shù)的50%以上，否則應(yīng)重新測(cè)試。b)在第14天，細(xì)菌減少率≥99.90%,酵母菌減少率≥90.0%,并且在以后至拋棄日期細(xì)菌與酵母菌的活菌計(jì)數(shù)不再增加。(標(biāo)準(zhǔn)的附錄)中和劑鑒定試驗(yàn)用于確定所選用中和劑是否適用于擬進(jìn)行的細(xì)菌或酵母菌殺滅試驗(yàn)。D2試驗(yàn)微生物細(xì)菌(以下任選一種):大腸桿菌(ATCC8739或8099)金黃色葡萄球菌(ATCC6538)綠膿桿菌(ATCC9027)D3試驗(yàn)分組D3.1懸液定量中和劑鑒定試驗(yàn)D3.1.1第1組。吸取試樣10.0mL于試管內(nèi)，置20℃~25℃水浴中5min后，加入0.1mL菌懸液混勻。作用至預(yù)定時(shí)間，吸此樣液1.0mL加于含有9.0mL0.03mol/LPBS的試管中混勻。吸取該最終樣液1.0mL,接種于平皿中，做活菌計(jì)數(shù)。D3.1.2第2組。吸取試樣10.0mL于試管內(nèi)，置20℃~25℃水浴中5min后，加入0.1mL菌懸液混勻。作用至預(yù)定時(shí)間，吸此樣液1.0mL加于含有9.0mL0.03mol/L中和劑溶液的試管中混勻，作用10min。吸取該最終樣液1.0mL,接種于平皿中，做活菌計(jì)數(shù)。如平板生長(zhǎng)菌落數(shù)超過(guò)300個(gè)，應(yīng)以0.03mol/LPBS對(duì)上述最終樣液作適宜稀釋后，再次進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。D3.1.3第3組。吸取中和劑10.0mL于試管內(nèi)，置20℃~25℃水浴中5min后，加入0.1mL菌懸液混勻。作用10min。吸取該最終樣液1.0mL,用中和劑做10倍系列稀釋，選適宜稀釋度懸液，各取1.0mL,分別接種于平皿中，做活菌計(jì)數(shù)。D3.1.4第4組。吸取中和產(chǎn)物溶液(以1份消毒劑加9份中和劑，作用10min配制而成)10.0mL于試管內(nèi)，置20℃~25℃水浴中5min后，加入0.1mL菌懸液混勻。作用10min。吸取該最終樣液1.0mL,用中和產(chǎn)物溶液做10倍系列稀釋，選適宜稀釋度懸液，各取1.0mL,分別接種于平皿中，做活菌計(jì)數(shù)。D3.1.5第5組。吸取0.03mol/LPBS10.0mL于試管內(nèi)，置20℃~25℃水浴中5min后，加入0.1mL菌懸液混勻。作用10min。吸取該最終樣液1.0mL,用0.03mol/LPBS做10倍系列稀釋，選適宜稀釋度懸液，各取1.0mL,分別接種于平皿中，做活菌計(jì)數(shù)。D3.1.6第6組。吸取試驗(yàn)所用同批次0.03mol/LPBS1.0mL,接種于平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。D3.1.7第7組。吸取試驗(yàn)所用同批次中和劑1.0mL,接種于平皿中，做活菌計(jì)數(shù)。D3.1.8第8組。將未接種的試驗(yàn)用培養(yǎng)基平板直接置溫箱內(nèi)培養(yǎng)。D3.2載體定量中和劑鑒定試驗(yàn)D3.2.1第1組。吸取試樣5.0mL于無(wú)菌小平皿內(nèi)，將其置20℃~25℃水浴中5min后，用無(wú)菌鑷子夾入一菌片(布載體),并使浸透于試樣中。待作用至試驗(yàn)預(yù)定的時(shí)間，立即用無(wú)菌鑷子取出菌片移入含5.0mL0.03mol/LPBS試管中，作用10min。將試管振打80次，吸取該最終樣液1.0mL,接種于平D3.2.2第2組。吸取試樣5.0mL于無(wú)菌小平皿內(nèi)，將其置20℃~25℃水浴中5min后，用無(wú)菌鑷子夾入一菌片，并使浸透于試樣中。待作用至試驗(yàn)預(yù)定的時(shí)間，立即用無(wú)菌鑷子取出菌片移入含5.0mL中和劑試管中，將試管振打80次。作用10min。吸取該最終樣液1.0mL,接種于平皿中，做活菌計(jì)數(shù)。如平板生長(zhǎng)菌落數(shù)超過(guò)300個(gè)，應(yīng)重新吸取該最終樣液0.5mL,用0.03mol/LPBS做適當(dāng)稀釋，選適宜稀釋度懸液，吸取1.0mL,分別接種于平皿中，做活菌計(jì)數(shù)。D3.2.3第3組。吸取中和劑5.0mL于無(wú)菌小平皿內(nèi)，將其置20℃~25℃水浴中5min后，用無(wú)菌鑷子夾入一菌片，并使浸透于中和劑內(nèi)，作用10min。立即用無(wú)菌鑷子取出菌片移入含5.0mL中和劑試管中，將試管振打80次，混勻。吸取該最終樣液1.0mL,用中和劑做10倍系列稀釋，選適宜稀釋度懸液，吸取1.0mL,分別接種于平皿中，做活菌計(jì)數(shù)。D3.2.4第4組。吸取中和產(chǎn)物溶液(以浸有消毒劑的載體置5.0mL中和劑內(nèi)，作用10min)5.0mL于無(wú)菌小平皿內(nèi)，將其置20℃~25℃水浴中5min后，用無(wú)菌鑷子夾入一菌片，并使浸透于中和產(chǎn)物中。作用10min,用無(wú)菌鑷子取出菌片，移入含5.0mL中和產(chǎn)物溶液的試管中，將試管振打80次，混勻。吸取該最終樣液1.0mL,用中和產(chǎn)物溶液做10倍系列稀釋，選適宜稀釋度懸液，吸取1.0mL,分別接種于平皿中，做活菌計(jì)數(shù)。D3.2.5第5組。吸取0.03mol/LPBS5.0mL于無(wú)菌小平皿內(nèi)，將其置20℃~25℃水浴中5min后，用無(wú)菌鑷子夾入一菌片，并使浸透于0.03mol/LPBS中。作用10min,立即用無(wú)菌鑷子取出菌片移入含5.0mL0.03mol/LPBS的試管中，將試管振打80次，混勻。吸取該最終樣液1.0mL,用0.03mol/LPBS做10倍系列稀釋，選適宜稀釋度懸液，吸取1.0mL,分別接種于平皿中，做活菌計(jì)數(shù)。D3.2.6第6組。吸取試驗(yàn)所用同批次0.03mol/LPBS1.0mL,接種于平皿中，做活菌計(jì)數(shù)。D3.2.7第7組。吸取試驗(yàn)所用同批次中和劑1.0mL,接種于平皿中，做活菌計(jì)數(shù)。D3.2.8第8組。將未接種的試驗(yàn)用培養(yǎng)基平板直接置溫箱內(nèi)培養(yǎng)。D4評(píng)價(jià)規(guī)定試驗(yàn)結(jié)果符合以下全部條件，所測(cè)中和劑可判為合格：a)第1組無(wú)試驗(yàn)菌，或僅有極少數(shù)試驗(yàn)菌菌落生長(zhǎng)；b)第2組有較第1組為多，但較第3、4、5組為少的試驗(yàn)菌菌落生長(zhǎng)，并符合表D1要求者；表D1中和劑鑒定試驗(yàn)合格標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)第1組與第2組菌落