牛結(jié)核γ干擾素磁微?；瘜W(xué)發(fā)光檢測(cè)方法

XX/TXXXXX—XXXX牛結(jié)核γ干擾素磁微?；瘜W(xué)發(fā)光檢測(cè)方法本文件規(guī)定了牛結(jié)核γ干擾素磁微?；瘜W(xué)發(fā)光檢測(cè)方法的試劑與耗材、器材與設(shè)備、樣本采集及下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成文件的必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅注日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范激發(fā)液由激發(fā)液A和激發(fā)液B組成，與化學(xué)發(fā)光免疫試劑配合使用，是一種輔助試劑，為發(fā)光XX/TXXXXX—XXXX34縮略語(yǔ)PBS：磷酸鹽緩沖液（phosphatebuffersalinEDC：1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺（1-(3-PPD：提純結(jié)核菌素（purifiedproteinderivative）A-PPD：禽型結(jié)核菌素（AvianTuberculinPPD）B-PPD：牛型結(jié)合菌素（Bovine感染牛分枝桿菌的結(jié)核陽(yáng)性牛，其外周血淋巴細(xì)胞已被牛分枝桿菌致敏并產(chǎn)生免疫記憶，當(dāng)體外遇到牛分枝桿菌特異性抗原（牛結(jié)核菌素刺激時(shí)），淋巴細(xì)胞將被激活，發(fā)生再次細(xì)胞免疫反應(yīng)，釋放大量牛結(jié)核γ干擾素，通過磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)(雙抗夾心法)技術(shù)檢測(cè)血清中牛結(jié)核γ干擾素。將待測(cè)樣本、牛結(jié)核γ干擾素4E8單抗包被的磁性微球溶液以及吖啶酯標(biāo)記的牛結(jié)核γ干擾素2G5單抗結(jié)合物混合；溫育一段時(shí)間洗滌后，加入激發(fā)液；在堿性條件下，吖啶酯分子的發(fā)射光強(qiáng)度達(dá)到最大，通過測(cè)量的發(fā)光值結(jié)果和既定的判定方法判定待測(cè)樣本的陰陽(yáng)性。禽分枝桿菌屬于非結(jié)核分枝桿菌，以禽型結(jié)核菌素刺激淋巴細(xì)胞作為對(duì)照，可有效排除環(huán)境分7.42℃~8℃冰箱，-20℃冰箱。XX/TXXXXX—XXXX8.1.1進(jìn)行靜脈無(wú)菌采血，每頭5mL，立即轉(zhuǎn)分混合，在37℃恒溫培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)16h。收集細(xì)胞培養(yǎng)上清，立即9操作步驟9.1將樣本、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照分別各加50μL至相應(yīng)反應(yīng)杯9.5化學(xué)發(fā)光免疫分析儀自動(dòng)測(cè)定各反應(yīng)杯發(fā)光值。XX/TXXXXX—XXXX5B-PPD培養(yǎng)上清發(fā)光值-PBS培養(yǎng)上值≥3000且B-PPD培養(yǎng)上清發(fā)光值-A-PPD培養(yǎng)上清發(fā)光值＜3000，樣本判定為牛結(jié)核γ干擾素陰XX/TXXXXX—XXXX示：1mL100,000IU的提純牛型結(jié)核菌素加入99mLPBS。配制完成后用0.22μm濾膜過濾，無(wú)菌分裝，置2℃~8℃保存。示：1mL100,000IU的提純禽型結(jié)核菌素加入99mLPBS。配制完成后用0.22μm濾膜過濾，無(wú)菌分裝，置2℃~8℃保存。稱取十二水合磷酸氫二鈉2.9g、磷酸二氫鉀0.2g、氯化鈉8.0g、氯水?dāng)嚢枞芙?，加純化水定容?000mL，經(jīng)0.22μm過濾，置2℃~8℃保存。XX/TXXXXX—XXXX7B.1取0.2mg牛結(jié)核γ干擾素單克隆抗體，裝入透析袋，置PBS中室溫（15℃~25℃)透析4h。除上清。重復(fù)用MES溶液磁分離洗滌2次，用0.5mLMES溶液重懸。液，搖勻后固定在混勻器上室溫（15℃~25℃)反應(yīng)30min。反應(yīng)結(jié)束后，磁分離，移除上清，用體積1mL，搖勻后固定在混勻器上室溫（15℃~25℃)反應(yīng)4h。反應(yīng)結(jié)束后，磁分離，移除上清，2℃~8℃保存?zhèn)溆?。XX/TXXXXX—XXXX結(jié)合物），溫（15℃~25℃)透析4h。將標(biāo)記的抗體溶液，裝入透析袋內(nèi)，置于PBS（0.05moL/L，pH值7.4）中透析，室溫（15℃~25℃)透析過夜，中間換液2次～3次。0.02%Proclin-300混勻后經(jīng)0.22μm濾器過濾，無(wú)菌分裝，于2℃~8℃保存。XX/TXXXXX—XXXX9室溫（15℃~25℃)待血液凝固后，37℃靜置2h，然后2℃~8℃靜置1h，將析出的血清轉(zhuǎn)XX/TXXXXX—XXXX相關(guān)試劑勻，加純化水定容至1000mL。定量分裝，2℃~8℃保存。X-1002.5mL，攪拌均勻，加純化水定容至1000mL。定量分裝，2℃~8℃保存。稱取十二水合磷酸氫二鈉72.5g、磷酸二氫鉀5g、氯化鈉200g、氯化鉀5化水?dāng)嚢枞芙?，再加純化水定容?000mL，經(jīng)0.22μm過濾，置2℃~8℃保存。0.22μm過濾，置2℃~8℃保存。），A.7.6封閉