牛源疣狀毛癬菌檢驗技術(shù)規(guī)范

3牛疣狀毛癬菌診斷技術(shù)規(guī)范NY/T541動物疫病實驗室檢驗采樣方法3.1牛疣狀毛癬菌病TrichophytonverrucosumforBovine4形態(tài)與生物學(xué)特性乏）、鼠尾形的大分生孢子（非常罕見）或鏈狀厚膜孢當(dāng)牛出現(xiàn)以下部分或全部癥狀時，可作為初步診4保定患牛，使用75%酒精棉球涂擦患部消毒，取無菌手術(shù)刀刮取患處真菌培養(yǎng)箱培養(yǎng)10d，觀察生長情況及菌落對照牛疣狀毛癬菌典型菌落形態(tài)和菌體形態(tài)特征進行初步鑒別（取少量病料（皮屑、被毛等），放在清洗干凈的載玻片上，滴加改良復(fù)方KOH溶入30mL蒸餾水中溶解后，依次加入DMSO40mL，甘油20mL，搖勻后加入蒸餾水至1000mL混勻）1~結(jié)果判斷：將同一病料連續(xù)重復(fù)三次檢查，以病料中查到特征性菌絲和孢子為將生長的疣狀毛癬菌菌落轉(zhuǎn)種在溴甲芬紫酪蛋白牛奶肌醇（BPC）培養(yǎng)基結(jié)果判斷：25℃培養(yǎng)4~7天可在菌落周圍觀察到清楚、寬闊的水解帶（參見附錄B將純化后的菌種接種到SDA培養(yǎng)基中，27℃培養(yǎng)7~14d，獲得單個菌落。5庫中已有序列比對分析，并選取GenBank中已登錄的參考菌株，利用MEGA-X制作系統(tǒng)發(fā)育樹，判定從發(fā)病的牛場選擇有典型皮膚真菌病的牛，在病變與健康皮膚組織交界處，用無菌參照GenBank中疣狀毛癬菌asparaginasefamilyprotein基因，使用Prim6霉素B軟膏、克霉唑軟膏等抗真菌藥物進行外敷；口服酮康唑片、灰黃霉素片、制霉菌素片、克霉唑片789常規(guī)檢測方法步驟如下：挑取疣狀毛癬菌菌落于生理鹽水配置成1×106CFU/mL。準(zhǔn)備無菌培養(yǎng)皿，放入火入30mL蒸餾水中溶解后，依次加入DMSO40mL，甘油20mL，搖勻后加入蒸餾水至1000m將純化得到的疣狀毛癬菌接種至溴甲芬紫酪蛋白牛奶肌醇（BPC）A/C：疣狀毛癬菌菌落正面；B/D：疣狀毛癬菌菌落A/B:典型鏈狀孢子結(jié)構(gòu)；C:微分生孢子；D/E:大分生孢子將生長的疣狀毛癬菌菌落轉(zhuǎn)種在溴甲芬紫酪蛋白牛奶肌醇（BPC）培養(yǎng)基上，25℃培養(yǎng)4～7天。asparaginasefamilyprotein基因，使用PrimerExpress6M——DL2000標(biāo)準(zhǔn)分子量（TakaRa將有目的條帶的擴增產(chǎn)物送往公司測序。將測序結(jié)果與NCBIGenBank數(shù)據(jù)庫中已有序列比對分M——DL2000標(biāo)準(zhǔn)分子量（TakaRa_________________________________[1]張學(xué)如,張生衛(wèi).一例秦川牛皮膚癬病感染人的診療與體會[J].中國畜禽種業(yè),2015,byTrichophytonverrucosum[J].Journaldemycologiemedicale,2019,29(1):62-Japanesejournalofmedicalmycology,2002b