GB∕T 43732-2024 動(dòng)植物中角鯊烯含量的測(cè)定（正式版）

動(dòng)植物中角鯊烯含量的測(cè)定2024-03-15發(fā)布2024-03-15實(shí)施國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由全國生化檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC387)提出并歸口。本文件起草單位：深圳市計(jì)量質(zhì)量檢測(cè)研究院、甘肅中商食品質(zhì)量檢驗(yàn)檢測(cè)有限公司、河南順鑫檢測(cè)科技有限公司、深圳市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測(cè)中心、惠州市食品藥品檢驗(yàn)所、四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院分析測(cè)試中心。1動(dòng)植物中角鯊烯含量的測(cè)定1范圍本文件規(guī)定了動(dòng)植物中角鯊烯含量的測(cè)定方法。測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。非油脂類樣品(油脂類樣品直接皂化和甲酯化)經(jīng)水解，乙醚-石油醚混合溶液提取，皂化和甲酯化，用正己烷萃取，經(jīng)氣相色譜法(GC)測(cè)定，外標(biāo)法定量。5試劑或材料如無特別說明，所用的試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。5.1氫氧化鉀(KOH)。5.2氯化鈉(NaCl)。5.3無水硫酸鈉(Na?SO?)。5.4鹽酸(HCl)。5.5乙醚(C?H?O)。5.6石油醚：沸程30℃~60℃。5.9正己烷(C?H?):色譜純。5.10角鯊烯(CH?o),CAS號(hào)：111-02-4,純度≥99.0%。5.11鹽酸溶液(8.3mol/L):量取250mL鹽酸，用110mL水稀釋，混勻，室溫下可放置2個(gè)月。5.12氫氧化鉀-甲醇溶液(1mol/L):取5.6g氫氧化鉀溶解在100mL甲醇中，混勻。5.13飽和氯化鈉溶液：稱取360g氯化鈉溶解于1.0L水中，攪拌溶解，澄清備用。25.14乙醚-石油醚混合溶液(1+1):取等體積的乙醚和石油醚，混勻備用。5.15角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱取0.1g(精確到0.0001g)角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品到燒杯中，加入正己烷溶解，移入100mL容量瓶后用正己烷定容，得到質(zhì)量濃度為1000μg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。此溶液4℃下可保存6個(gè)月。的系列溶液。5.17微孔濾膜(NY):0.22μm。6儀器設(shè)備6.1勻漿機(jī)或?qū)嶒?yàn)室用組織粉碎機(jī)或研磨機(jī)。6.2氣相色譜儀：具備氫火焰離子檢測(cè)器(FID)。6.3恒溫水?。嚎販胤秶?0℃~100℃,控溫±1℃。6.5氮吹儀。6.6渦旋振蕩器。7樣品7.1樣品的制備在采樣和制備過程中，應(yīng)避免樣品污染。固體或半固體樣品使用組織粉碎機(jī)或研磨機(jī)粉碎，液體樣品用勻漿機(jī)均質(zhì)，于一18℃下冷凍保存，分析用時(shí)將其解凍后使用。7.2樣品前處理7.2.1非油脂類樣品稱取均勻的樣品1.0g(精確至0.1mg,對(duì)于不同的樣品稱樣量可適當(dāng)調(diào)整，保證樣品中脂肪量100mg～200mg)到100mL具塞試管中，加入2mL95%乙醇和4mL水，混勻，加入鹽酸溶液10mL,混勻。將試管放入70℃~80℃水浴中，水解40min。每隔10min振蕩一下試管，確保在試管壁上的顆粒物混入溶液中。水解完成后，取出試管冷卻至室溫。水解后的樣品，加入10mL95%乙醇，混勻，然后加入50mL乙醚-石油醚混合溶液，振搖5min,靜置10min。用少量的乙醚-石油醚混合溶液沖洗具塞試管和塞子，將醚層轉(zhuǎn)移到250mL燒杯中。按照以上步驟重復(fù)提取水解液兩次，將三次收集的醚層合并到250mL燒杯中。放置于水浴鍋上蒸發(fā)至干，得到樣品提取物。7.2.2油脂類樣品準(zhǔn)確稱取0.1g～0.5g(精確至0.1mg)至25mL試管中，按照7.3皂化及甲酯化步驟執(zhí)行。37.3皂化及甲酯化將提取物用正己烷溶解并完全轉(zhuǎn)移至25mL試管中，用氮吹儀吹干，加入1mL1mol/L氫氧化鉀-甲醇溶液，在渦旋振蕩器上振蕩2min,加入5.0mL正己烷，在渦旋振蕩器上萃取1min,用飽和氯化鈉溶液洗滌至中性，靜置，使水相和正己烷相分層。取正己烷相3mL于10mL試管中，加入約0.3g8試驗(yàn)步驟8.1色譜參考條件毛細(xì)管色譜柱：(5%-苯基)-甲基聚硅氧烷弱極性固定相，柱長30m,內(nèi)徑0.25mm,膜厚0.25μm;或同等性能的色譜柱。程序升溫：初始溫度160℃,保持1min;以15℃/min升溫至220℃,保持2min;再以5℃/min升溫至280℃,保持10min;后運(yùn)行300℃,時(shí)間2min。分流比：20:1。8.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制本方法采用外標(biāo)法定量。將角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)工作液分別注入氣相色譜儀中，測(cè)定相應(yīng)的峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算直線回歸方程。角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品氣相色譜圖參見附錄A。8.3樣品測(cè)定樣品液經(jīng)氣相色譜儀分析，測(cè)得峰面積，采用外標(biāo)法通過上述標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算其濃度。在測(cè)定過程中，每測(cè)定10個(gè)樣品宜用同一份標(biāo)準(zhǔn)溶液或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)檢查儀器的穩(wěn)定性。9分析結(jié)果的表述樣品中角鯊烯的含量按式(1)計(jì)算：式中：X——樣品中角鯊烯的含量，單位為毫克每千克(mg/kg);c——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到樣品中角鯊烯的含量，單位為微克每毫升(μg/mL);V——樣品溶液定容體積，單位為毫升(mL);d——樣品稀釋倍數(shù)；m——樣品質(zhì)量