水中氟化物快速檢測酶標(biāo)儀法

4水中氟化物快速檢測酶標(biāo)儀法本文件規(guī)定了測定水中無機氟化物的酶標(biāo)儀法。本文件適用于地表水、地下水、生活飲用水和水質(zhì)工程以及實驗室中的無機氟化物含量的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理氟離子在緩沖溶液中與氟試劑及硝酸鑭反應(yīng)生成藍(lán)色三元絡(luò)合物，絡(luò)合物在650nm波長處的吸光度值與氟離子濃度成正比，通過酶標(biāo)儀定量測定水樣中的氟離子濃度。5儀器設(shè)備5.1酶標(biāo)儀。5.2pH計。5.3可調(diào)微量移液器。5.496孔板。6試劑6.1試劑要求：本文件使用的試劑純度除氟化鈉為優(yōu)級純外，其他試劑均為分析純。實驗用水為去離子水，應(yīng)符合GB/T6682中規(guī)定的二級水。6.2鹽酸（HCl）。6.3氫氧化鈉（NaOH）。6.4丙酮（CH3COCH3）。6.5乙酰丙酮（CH3COCH2COCH3）。6.6冰乙酸（CH3COOH）。6.7乙酸鈉（CH3COONa）。6.8硝酸鑭[La(NO3)3·6H2O]。6.9茜素絡(luò)合指示劑（C19H15NO8）。6.10氟化鈉（NaF）。7溶液配制7.1鹽酸溶液（1mol/L）4吸取8.4mL鹽酸于100mL容量瓶中，加水定容至刻度。7.2氫氧化鈉溶液（1mol/L）稱取4.0g氫氧化鈉，加水溶解后，定容至100mL。7.3乙酸鈉緩沖溶液稱取3.5g乙酸鈉，溶解于80mL水中，加入7.5mL冰乙酸，用冰乙酸或者氫氧化鈉溶液（7.2）調(diào)節(jié)溶液pH至4.1，加水定容至100mL。7.4乙酸鈉溶液（1mol/L）稱取8.2g乙酸鈉，加水溶解后，定容至100mL。7.5硝酸鑭溶液（0.05mol/L）稱取2.215g硝酸鑭，滴加少量的鹽酸溶液（7.1）使其完全溶解，用乙酸鈉溶液（7.4）調(diào)節(jié)pH至4.1，加水定容至100mL。7.6氟試劑溶液稱取1.927g茜素絡(luò)合指示劑于100mL燒杯中，加入5mL水，再滴加少量的氫氧化鈉溶液（7.2）使茜素絡(luò)合指示劑完全溶解，待其溶解后加入0.625g乙酸鈉，使用鹽酸溶液（7.1）調(diào)節(jié)pH值至5.0，加水定容至100mL。氟試劑溶液在使用前先搖勻，再用離心機10000r/min，離心10min,取上清液使用。7.7氟化物標(biāo)準(zhǔn)使用液[ρ（F-）=2.00mg/L]稱取經(jīng)105℃干燥2h的氟化鈉0.4420g，加水溶解后，定容至100mL。亦可使用國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的氟標(biāo)準(zhǔn)溶液配制。8樣本使用無氟具塞聚乙烯管采集水樣1mL。若不能及時分析，0℃~4℃冷藏、避光保存,14天內(nèi)完成測9分析步驟9.1檢測液的配制精確量取7.0mL丙酮、2.0mL乙酰丙酮、2.0mL氟試劑溶液（7.6）和2.0mL乙酸鈉緩沖溶液（7.3混合均勻。再加入2.0mL硝酸鑭（7.5）溶液，混合均勻，靜置30分鐘以上備用。9.2氟化物標(biāo)準(zhǔn)系列的配制在96孔板中選擇8個加樣孔作為主孔，將這8個主孔分別標(biāo)注為A～H。在H孔中加入0.20mL氟化物標(biāo)準(zhǔn)使用液（7.7在A-G孔各加入0.10mL的水，然后從H孔準(zhǔn)確抽取0.10mL液體，將其放入G孔中充分混合，再從G孔中準(zhǔn)確抽取0.10mL液體放入F孔中，充分混合，以此類推，直到在B孔中準(zhǔn)確抽取0.10mL液體棄掉，使得最后各主孔中的液體均為0.10mL。此系列氟離子濃度分別為：A孔0mg/L，B孔0.03125mg/L，C孔0.0625mg/L，D孔0.125mg/L，E孔0.25mg/L，F(xiàn)孔0.5mg/L，G孔1.0mg/L，H孔2.0mg/L。9.3加待檢測水樣96孔板中的剩余位置作為加樣孔，分別加入0.10mL待檢測水樣。9.4酶標(biāo)儀檢測4分別向各加樣孔中加入0.15mL制備好的檢測液，輕微震蕩混勻，5min以后將96孔板放入酶標(biāo)儀，10min內(nèi)在650nm波長處完成吸光度檢測。利用已知氟化物標(biāo)準(zhǔn)系列濃度和相對應(yīng)的吸光度值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算水樣中氟離子濃度。10結(jié)果計算10.1計算標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程以氟化物標(biāo)準(zhǔn)系列溶液各個濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度（A）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并按式（1）計算標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程。A=a+b×ρ…………………（1）A—吸光度；a—標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程的截距；b—標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程的斜率；ρ—標(biāo)準(zhǔn)曲線系列溶液中氟（F-）的質(zhì)量濃度，mg/L。10.2計算樣品中氟化物的濃度用標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中氟化物濃度，按式（2）進(jìn)行計算。ρx=（A-a）/b…………………（2）A—吸光度；a—標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程的截距；b—標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程的斜率；ρx—樣品中氟（F-）的質(zhì)量濃度，mg/L。11方法特性11.1精密度3個實驗室對含氟量0.05mg/L～2.04mg/L的不同濃度水平的水氟樣品進(jìn)行了精密度考察，實驗室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.24%～7.26%之間。11.2準(zhǔn)確度3個實驗室對含氟量0.05mg/L～2.04mg/L的不同濃度水平的水氟樣品進(jìn)行了加標(biāo)回收率考察，加入氟標(biāo)準(zhǔn)濃度為0.05mg/L～1.00mg/L，回收率范圍為97.10%～103.33%。12質(zhì)量保證和質(zhì)量控制12.1涉及標(biāo)準(zhǔn)曲線A～H孔的制作，稀釋過程中每孔都需要充分吹打混勻后再移液到下一個孔。12.2在制備檢測液之前，使用者需要根據(jù)待檢測樣本的數(shù)量計算本次實驗檢測液的用量。推薦實驗人員按照檢測液需求量的120%制備檢測液，防止實