天然藥物制劑技術(shù)原則

2015級(jí)《天然藥物制劑技術(shù)原則》中藥復(fù)方的提取純化工藝研究由山羊角、川芎、川烏、白芷四味組成的復(fù)方羊角片，設(shè)計(jì)提取純化工藝。復(fù)方羊角片具有平肝熄風(fēng)，通絡(luò)止痛的功效。用于肝風(fēng)上擾，瘀血阻絡(luò)所致偏頭痛，緊張性頭痛。山羊角為牛科動(dòng)物山羊的角；是羚羊角的代用品，含有角蛋白、磷酸鈣及不溶性無機(jī)鹽等成分，具有平肝熄風(fēng)、清肝明目、散血解毒的功效。川烏為毛茛科植物烏頭的干燥母根，川烏的炮制加工品。川烏的成分包括生物堿及烏頭多糖，其中生物堿為主要的劇毒雙酯類生物堿：新烏頭堿、烏頭堿、次烏頭堿、杰斯烏頭堿、異翠雀花堿。具有祛風(fēng)除濕、溫經(jīng)止痛的功效。川芎為傘形科植物川芎的干燥根莖。川芎的成分揮發(fā)油、生物堿類、內(nèi)酯類酚類及有機(jī)酸類，具有活血行氣、祛風(fēng)止痛的功效。白芷為傘形科植物白芷或杭白芷的干燥根。白芷的成分包括揮發(fā)油及多種香豆精衍生物比克白芷素、比克白芷醚、氧化前胡素、歐前胡素、珊瑚菜素、花椒毒素等，具有解表散寒、祛風(fēng)止痛、宣通鼻竅、燥濕止帶、消腫排膿的功效。2015版《藥典》中制法：以上四味，山羊角鎊片，加水煎煮二次，每次3小時(shí)，分次濾過，合并濾液，濃縮成膏（或濃縮成清膏，噴霧干燥成粉）；其余川芎等三味粉碎成粗粉，以70%乙醇為溶劑，進(jìn)行滲漉，至漉液無色或無生物堿反應(yīng)為止，收集漉液，回收乙醇，濃縮成膏（或濃縮成清膏，噴霧干燥成粉），與山羊角膏(粉)及糊精100g、淀粉50g、硬脂酸鎂2g混勻，制粒,干燥，壓制成1000片，包糖衣或薄膜衣，即得[1]。1山羊角的提取純化藥典中規(guī)定山羊角鎊片，加水煎煮二次，每次3小時(shí)，分次濾過，合并濾液，濃縮成膏（或濃縮成清膏，噴霧干燥成粉）；有研究者將山羊角磨成粗粉,未經(jīng)過篩。采用水煎劑:將粗粉加20倍的水煮沸3小時(shí),過濾,濾渣再加10倍水煮沸1小時(shí),過濾。濾渣再重復(fù)操作一遍,三次濾液合并,沉淀,取上清液濃縮成50%、100%的濃度備用。采用醇提液:取上述100%的水煎劑加等量95%的乙醇混合均勻,靜置過夜,取上清液過濾,回收乙醇至無乙醇味,加水稀釋成50%、100%的濃度,過濾,備用[2]。提取工藝中采用水提取的方法，利用正交設(shè)計(jì)法，需考慮水的用量、鎊片大小、提取溫度等因素，本文以上述三項(xiàng)為考察因素，各取3個(gè)水平，按L9（33）進(jìn)行正交試驗(yàn)，篩選最佳工藝條件。正交試驗(yàn)因素水平表水平因素A鎊片大小直徑（cm）B水的用量(倍）C提取溫度(℃）1355022870311090山羊角中的復(fù)合氨基酸被認(rèn)為起主要藥理作用，以高效液相色譜方法對焦谷氨酸進(jìn)行含量檢測[3]，故以焦谷氨酸含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行選擇，如若最終結(jié)果都不是很理想，更改條件再次篩選，如若條件合理，再將條件細(xì)化進(jìn)行篩選。直至選出最佳配比進(jìn)行山羊角的提取。2白芷、川芎、川烏的提取純化提取工藝以乙醇為溶劑，藥材粉碎度、滲漉速度和乙醇用量是影響滲漉工藝的重要因素。本文以上述三項(xiàng)為考察因素，各取3個(gè)水平，按L9（33）進(jìn)行正交試驗(yàn)，篩選最佳工藝條件[4]。正交試驗(yàn)因素水平表水平因素A藥材粉碎度B滲漉速度(倍）C乙醇用量(倍）1粗顆粒（不能過一號(hào)篩子）182最粗粉（過一號(hào)篩子）3103粗粉（過三號(hào)篩子）512根據(jù)處方藥物的組成及劑型特點(diǎn)選擇評(píng)價(jià)指標(biāo)。阿魏酸和歐前胡素分別為川芎和白芷的重要有效成分，阿魏酸可溶于熱水、乙醇等，歐前胡素不溶于水，可溶于乙醇、氯仿等。本制備工藝中采用70%乙醇作為滲漉溶媒，以阿魏酸和歐前胡素作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，可分別直接或間接反映出藥材在滲漉提取工藝過程中親水性有效部位與親脂性有效部位的提取轉(zhuǎn)移情況，故作為主要評(píng)價(jià)指標(biāo)，權(quán)重系數(shù)均以0.4為宜。滲漉提取的干浸膏重量是確定軟制劑裝量規(guī)格、服用劑量等的重要參數(shù)，因此干浸膏重量應(yīng)納入評(píng)價(jià)指標(biāo)，但其中包含較多的無效雜質(zhì)，與療效并不呈量效關(guān)系，并非干浸膏量越多越好，因此在綜合評(píng)價(jià)時(shí)權(quán)重系數(shù)應(yīng)較小，以0.2為宜（以平均浸膏粉重為分母，若樣品的浸膏粉重高于平均浸膏粉重的均以0.2計(jì)）。根據(jù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行條件篩選，選出最佳配比，進(jìn)行三味藥材的提取，以實(shí)現(xiàn)有效成分的最大化提取量。采用大孔樹脂純化工藝，研究采用單因素試驗(yàn)法對影響三味藥純化效率的因素:樹脂類型、上樣速度、上樣量、洗脫液濃度、洗脫液用量等進(jìn)行考察,以歐前胡素、阿魏酸的吸附量或洗脫率為指標(biāo)，篩選最佳純化條件。藥液的制備按上述最佳工藝提取得到的藥液，加蒸餾水稀釋至每1mL含生藥0.3g的溶液，即為上柱藥液。樹脂的預(yù)處理所用樹脂使用前均以水和95%乙醇交替洗脫至95%乙醇加等量蒸餾水不顯渾濁，再以大量水洗凈乙醇，備用。正交試驗(yàn)因素水平表水平因素A樹脂類型B上樣速度(ml/min)C上樣量（ml)D洗脫液濃度(%)F洗脫液用量(倍）1D－1010.5606042AB－81.0807053HPD－4001.51008064NKA－92.0120907樹脂型號(hào)選擇分別取濕重狀態(tài)下D－101、AB－8、HPD－400、NKA－9各四種樹脂各2g，置于50mL錐形瓶中，向4只錐形瓶中分別加入20mL上柱液。置于恒溫空氣振蕩器中，25℃恒溫振蕩24h，使其達(dá)到吸附飽和，濾過，測定續(xù)濾液中各樹脂吸附后溶液中歐前胡素、阿魏酸的含量，計(jì)算各樹脂吸附量。根據(jù)正交試驗(yàn)優(yōu)選出最佳純化工藝，以阿魏酸、歐前胡素的吸附量為評(píng)價(jià)指標(biāo)。參考文獻(xiàn)[1]化學(xué)工業(yè)出版社.2015版《中國藥典》一部.[2]南京市藥材公司藥檢室.羚羊角、山羊角、綿羊角藥理作用的初步研究[J].藥物研究.1974,