(正式版)GB/T 21037-2024 飼料中二甲氧芐氨嘧啶、三甲氧芐氨嘧啶和二甲氧甲基芐氨嘧啶的測(cè)定

代替GB/T21037—2007二甲氧甲基芐氨嘧啶的測(cè)定Determinationofdiaveridine,trimethoprimandormetopriminfeeds國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局發(fā)布國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)IGB/T21037—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件代替GB/T21037—2007《飼料中三甲氧芐胺嘧啶的測(cè)定高效液相色譜法》,與a)增加了二甲氧芐氨嘧啶和二甲氧甲基芐氨嘧啶的測(cè)定方法(見(jiàn)第1章);b)適用范圍中增加了精料補(bǔ)充料和動(dòng)物源性飼料原料(見(jiàn)第1章);c)更改了檢出限和定量限(見(jiàn)第1章，2007年版的第1章);d)增加了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(見(jiàn)第4章);e)更改了原理(見(jiàn)5.1,2007年版的第3章);f)更改了試驗(yàn)步驟(見(jiàn)5.5,2007年版的第7章);g)更改了精密度(見(jiàn)5.7,2007年版的第9章)。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由全國(guó)飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC76)提出并歸口。本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：——2007年首次發(fā)布為GB/T21037—2007;1GB/T21037—2024二甲氧甲基芐氨嘧啶的測(cè)定本文件描述了飼料中二甲氧芐氨嘧啶、三甲氧芐氨嘧啶和二甲氧甲基芐氨嘧啶的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜和高效液相色譜測(cè)定方法。本文件適用于配合飼料、濃縮飼料、精料補(bǔ)充料、添加劑預(yù)混合飼料和動(dòng)物源性飼料原料中二甲氧芐氨嘧啶、三甲氧芐氨嘧啶和二甲氧甲基芐氨嘧啶的測(cè)定。本文件液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的檢出限為2.5μg/kg,定量限為5.0μg/kg;高效液相色譜法的檢出限為0.25mg/kg,定量限為0.50mg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T20195動(dòng)物飼料試樣的制備3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(仲裁法)4.1原理試樣中的待測(cè)物在弱堿性條件下用乙酸乙酯提取、正己烷脫脂，混合型強(qiáng)陽(yáng)離子交換小柱凈化，液4.2試劑或材料除非另有規(guī)定，僅使用分析純?cè)噭?4.2.7乙酸乙酯。4.2.12正己烷乙腈飽和溶液：量取80mL正己烷于100mL分液漏斗中，加入10mL乙腈(4.2.3)4.2.17標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(1mg/mL):稱(chēng)取二甲氧芐氨嘧啶(CAS:5355-16-8,純度不低于98%)、三甲氧芐氨嘧啶(CAS:738-70-5,純度不低于98%)和二甲氧甲基芐氨嘧啶(CAS:6981-18-6,純度不低于98%)標(biāo)準(zhǔn)品各10mg(精確至0.01mg),分別置于10mL容量瓶中，用1%乙酸-乙腈溶液(4.2.10)溶4.2.20內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(1mg/mL):稱(chēng)取dg-三甲氧芐氨嘧啶(CAS:1189460-62-5,純度不低于34.3.7氮吹儀。平行做2份試驗(yàn)。稱(chēng)取試樣約2g(精確至0.1mg),置于50mL離心管中，加入100μL內(nèi)標(biāo)工作乙酯(4.2.7),渦旋混合2min,超聲提取10min(5min渦旋混合1次),于4℃下10000r/min離心溶解殘?jiān)?，渦旋混合30s,再加入3mL正己烷乙腈飽和溶液(4.2.12),渦旋混合30s,于4℃下4GB/T21037—2024表1梯度洗脫程序時(shí)間/minA相/%B相/%00d)離子源溫度：350℃;待測(cè)物名稱(chēng)定性離子對(duì)定量離子對(duì)碰撞能量二甲氧芐氨嘧啶三甲氧芐氨嘧啶二甲氧甲基芐氨嘧啶dg-三甲氧芐氨嘧啶在儀器的最佳條件下，分別取混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液(4.2.23)和試樣溶液(4.5.2)上機(jī)測(cè)定。溶液中二甲氧芐氨嘧啶、三甲氧芐氨嘧啶、二甲氧甲基芐氨嘧啶和d?-三甲氧芐氨嘧啶的定量離子色譜圖見(jiàn)附錄A。在相同試驗(yàn)條件下，試樣溶液中待測(cè)物的保留時(shí)間應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)系列溶液(濃度相當(dāng))中待測(cè)物的保留5GB/T21037—2024時(shí)間一致，其相對(duì)偏差在±2.5%之內(nèi)。根據(jù)表2選擇的定性離子對(duì)，比較試樣譜圖中待測(cè)物監(jiān)測(cè)離子對(duì)的相對(duì)離子豐度與濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中對(duì)應(yīng)的監(jiān)測(cè)離子對(duì)的相對(duì)離子豐度，若偏差不超過(guò)表3規(guī)定的范圍，則可判定為樣品中存在對(duì)應(yīng)的待測(cè)物。表3定性測(cè)定時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差相對(duì)離子豐度>20%～50%>10%～20%最大允許偏差4.5.3.5定量以標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測(cè)組分的峰面積和內(nèi)標(biāo)峰面積的比值為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測(cè)組分的質(zhì)量濃度和內(nèi)標(biāo)質(zhì)量濃度的比值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)應(yīng)不低于0.99。試樣溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測(cè)物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍內(nèi)，如超出線性范圍，應(yīng)重新測(cè)定。單點(diǎn)校準(zhǔn)定量時(shí)，試樣溶液中待測(cè)組分質(zhì)量濃度與標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度相差不超過(guò)30%。4.6試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理試樣中二甲氧芐氨嘧啶、三甲氧芐氨嘧啶、二甲氧甲基芐氨嘧啶含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)w,計(jì)，數(shù)值以微克每千克(μg/kg)表示。多點(diǎn)校準(zhǔn)按公式(1)計(jì)算；單點(diǎn)校準(zhǔn)按公式(2)計(jì)算： (1)式中：p——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的試樣溶液中待測(cè)物質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);V?———試樣提取用乙酸乙酯總體積，單位為毫升(mL);V?——凈化、氮?dú)獯抵两珊髲?fù)溶試樣溶液定容體積，單位為毫升(mL);V?——凈化用試樣提取溶液體積，單位為毫升(mL);m——試樣質(zhì)量，單位為克(g);1000——換算系數(shù)。式中：A——試樣溶液待測(cè)物色譜峰面積；Ag;———標(biāo)準(zhǔn)溶液內(nèi)標(biāo)物色譜峰面積；ps——標(biāo)準(zhǔn)溶液待測(cè)物的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);pi——試樣溶液內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);V?——試樣提取用乙酸乙酯總體積，單位為毫升(mL);V?——凈化、氮?dú)獯抵两珊髲?fù)溶試樣溶液定容體積，單位為毫升(mL);A?！獦?biāo)準(zhǔn)溶液待測(cè)物色譜峰面積；A;-——試樣溶液內(nèi)標(biāo)物的色譜峰面積；ps;———標(biāo)準(zhǔn)溶液內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);V?——凈化用試樣提取溶液體積，單位為毫升(mL);m——試樣質(zhì)量，單位為克(g);1000——換算系數(shù)。測(cè)定結(jié)果以平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，保留3位有效數(shù)字?！?GB/T21037—2024在重復(fù)性條件下，2次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果與其算術(shù)平均值的絕對(duì)差值不大于該算術(shù)平均值的15%。5高效液相色譜法5.2.5乙酸乙酯。5.2.9乙腈-5%乙酸溶液：移取10mL乙腈(5.2.3)于100mL容量瓶中，用5%乙酸溶液(5.2.7)稀釋、5.2.12磷酸二氫鉀溶液(0.05mol/L):準(zhǔn)確稱(chēng)取6.80g磷酸二氫鉀于1000mL容量瓶中，用水溶解、5.2.13標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(1mg/mL):稱(chēng)取二甲氧芐氨嘧啶(CAS:5355-16-8,純度不低于98%)、三甲氧芐氨嘧啶(CAS:738-70-5,純度不低于98%)、二甲氧甲基芐氨嘧啶(CAS:6981-18-6,純度不低于98%)2℃~8℃貯存，有效期3個(gè)月。臨用現(xiàn)配。5.2.15混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液：準(zhǔn)確移取適量混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(5.2.14)于10mL容量瓶中，用1%乙酸5.3儀器設(shè)備7提取10min(5min渦旋混合1次),于4℃下10000r/min離心5min,上層有機(jī)相移至另一50mL離腈飽和溶液(5.2.10),渦旋混合30s,于4℃下10000r/min離心5min,棄去上層正己烷溶液，取全部8GB/T21037—2024與標(biāo)準(zhǔn)系列溶液(濃度相當(dāng))中二甲氧芐氨嘧啶、三甲氧芐氨嘧啶、二甲氧甲基芐氨嘧啶的保留時(shí)間一致，其相對(duì)偏差在±2.5%之內(nèi)。以二甲氧芐氨嘧啶、三甲氧芐氨嘧啶、二甲氧甲基芐氨嘧啶的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，色譜峰面積(響應(yīng)值)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其相關(guān)系數(shù)應(yīng)不低于0.99。試樣溶液中待測(cè)物的質(zhì)量濃度應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)。如超出范圍，應(yīng)將試樣溶液用1%乙酸溶液(5.2.8)稀釋后，重新測(cè)定。單點(diǎn)校準(zhǔn)定量時(shí)，試樣溶液中待測(cè)物的質(zhì)量濃度與標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度相差不超過(guò)30%。5.6試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理試樣中二甲氧芐氨嘧啶、三甲氧芐氨嘧啶和二甲氧甲基芐氨嘧啶含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)w;計(jì)，數(shù)值以毫克每千克(mg/kg)表示。多點(diǎn)校準(zhǔn)按公式(3)計(jì)算；單點(diǎn)校準(zhǔn)按公式(4)計(jì)算： (3)式中：p——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的試樣溶液中待測(cè)物質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);V?———試樣提取用乙酸乙酯總體積，單位為毫升(mL);V?————凈化前復(fù)溶后試樣溶液體積，單位為毫升(mL);V?——凈化、氮?dú)獯抵两珊髲?fù)溶后試樣溶液體積，單位為毫升(mL);V?——移取上清液體積，單位為毫升(mL);1000———換算系數(shù)。 (4)式中：A——試樣溶液的待測(cè)物色譜峰面積；V?——試樣提取用乙酸乙酯總體積，單位為毫升(mL);V?——凈化前復(fù)溶后試樣溶液體積，單位為毫升(mL);V?——凈化、氮?dú)獯抵两珊髲?fù)溶后試樣溶液體積，單位為毫升(mL);ps———標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測(cè)物的質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);A?！獦?biāo)準(zhǔn)溶液待測(cè)物色譜峰面積；V?——移取上清液體積，單位為毫升(mL);V?——凈化用備用液體積，單位為毫升(mL);m——試樣質(zhì)量，單位為克(g);f——稀釋倍數(shù)；1000——換算系數(shù)。測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，保留3位有效數(shù)字。5.7精密度在重復(fù)性條件下，2次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果與其算術(shù)平均值的絕對(duì)差值不超過(guò)該算術(shù)平均值的10%。9相對(duì)非度相對(duì)豐度相對(duì)非度相對(duì)豐度(資料性)二甲氧芐氨嘧啶、三甲氧芐氨嘧啶、二甲