《微生物基》課件-單元二 原核微生物的構(gòu)造和形態(tài)觀察

微生物學(xué)基礎(chǔ)單元二原核微生物的構(gòu)造和形態(tài)觀察項(xiàng)目一細(xì)菌的構(gòu)造和形態(tài)觀察一、細(xì)菌的形態(tài)與大小

1細(xì)菌的定義單細(xì)胞原核微生物，個(gè)體微小，形態(tài)簡單；以二等分裂方式繁殖；在自然界中，細(xì)菌分布最廣、數(shù)量最多。項(xiàng)目一細(xì)菌的構(gòu)造和形態(tài)觀察一、細(xì)菌的形態(tài)與大小

２細(xì)菌的形態(tài)細(xì)菌的三種基本形態(tài):

球狀、桿狀和螺旋狀除了三種基本形態(tài)外，還有少見的星形、方形和梭狀等一、細(xì)菌的形態(tài)與大小

２細(xì)菌的形態(tài)球菌:單球菌、雙球菌、四聯(lián)球菌、鏈球菌、八疊球菌、葡萄球菌等。

雙球菌：如肺炎雙球菌四聯(lián)球菌八疊球菌：如尿素八疊球菌一、細(xì)菌的形態(tài)與大小

２細(xì)菌的形態(tài)球菌:單球菌、雙球菌、四聯(lián)球菌、鏈球菌、八疊球菌、葡萄球菌等。

鏈球菌：如乳鏈球菌葡萄球菌：如金黃色葡萄球菌一、細(xì)菌的形態(tài)與大小

２細(xì)菌的形態(tài)桿菌:種類最多的類型,有短桿狀、長桿狀、棒桿狀、梭桿狀、月亮狀、分枝狀、竹節(jié)狀等。

單桿菌、鏈狀桿菌一、細(xì)菌的形態(tài)與大小

２細(xì)菌的形態(tài)螺旋菌:螺旋狀的細(xì)菌稱為螺旋菌，根據(jù)其彎曲情況分為：弧菌：螺旋不滿一圈，菌體呈弧形或逗號形，如霍亂弧菌、逗號弧菌。螺旋菌：螺旋滿2－6環(huán)，呈螺旋狀，如干酪螺菌。

螺旋體：旋轉(zhuǎn)周數(shù)在6環(huán)以上，菌體柔軟，如梅毒螺旋體。

一、細(xì)菌的形態(tài)與大小

３細(xì)菌的大小通常球菌直徑：0.2－1.5μm；桿菌:長1－5μm,寬0.5－1μm。如：大腸桿菌平均長度：2μm，寬度0.5μm；1500個(gè)大腸桿菌頭尾相接等于3mm;109個(gè)大腸桿菌重1mg.

３細(xì)菌的大小一、細(xì)菌的形態(tài)與大小菌名直徑或?qū)挕灵L（μm×μm）乳鏈球菌金黃色葡萄球菌大腸桿菌枯草芽孢桿菌霍亂弧菌0.5~10.8~10.5×(1~3)(0.8~1.2)×(1.2~3)(0.2~0.6)×(1~3)二、細(xì)菌的細(xì)胞結(jié)構(gòu)

1細(xì)菌細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)：細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、核區(qū)、間體、核糖體、氣泡和儲藏物；２特殊結(jié)構(gòu)：莢膜、鞭毛、菌毛、芽孢等細(xì)菌細(xì)胞的特殊結(jié)構(gòu)二、細(xì)菌的細(xì)胞結(jié)構(gòu)

1細(xì)菌細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)：細(xì)胞壁：位于菌體的最外層，內(nèi)側(cè)緊貼細(xì)胞膜的一層無色透明，堅(jiān)韌而有彈性的結(jié)構(gòu)。細(xì)胞壁約占細(xì)胞干重的10%—25%。

功能：a.保護(hù)細(xì)胞免受外力損傷；b.維持菌體外形；c.協(xié)助鞭毛運(yùn)動(dòng)；d.與胞膜一起完成細(xì)胞內(nèi)外物質(zhì)交換，為正常細(xì)胞分裂所必需；e.與細(xì)菌的抗原性，致病性和對噬菌體的敏感性密切相關(guān)。

二、細(xì)菌的細(xì)胞結(jié)構(gòu)

1細(xì)菌細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)：細(xì)胞壁細(xì)胞壁與革蘭氏染色：a.是細(xì)菌細(xì)胞的復(fù)合染色法，由丹麥醫(yī)生HansChristianGram于1884年創(chuàng)立；

b.通過染色可以將所有的細(xì)菌分為革蘭氏陽性菌（Ｇ＋紫色）和革蘭氏陰性菌（Ｇ－紅色）；

c.基本步驟：涂片固定——結(jié)晶紫初染1min——碘液媒染1min——95%乙醇脫色0.5min——番紅復(fù)染１min二、細(xì)菌的細(xì)胞結(jié)構(gòu)

1細(xì)菌細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)：細(xì)胞壁細(xì)胞壁與革蘭氏染色：d.染色結(jié)果如下圖陽性菌陰性菌二、細(xì)菌的細(xì)胞結(jié)構(gòu)

1細(xì)菌細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)：細(xì)胞壁細(xì)胞壁與革蘭氏染色：e.染色原理：陽性菌和陰性菌的細(xì)胞壁化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)不同

成分占細(xì)胞壁干重的%革蘭氏陽性細(xì)菌革蘭氏陰性細(xì)菌肽聚糖磷壁酸類脂質(zhì)蛋白質(zhì)含量很高（30~95）含量較高（<50）無

一般無（<2）含量很低（5~20）無含量較高含量較高1細(xì)菌細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)：細(xì)胞壁中肽聚糖分子結(jié)構(gòu)：細(xì)胞壁的基本骨架，是由N—乙酰胞壁酸（NAM）和N—乙酰葡糖胺（NAG）以及少數(shù)氨基酸短肽鏈組成的亞單位聚合而成的大分子復(fù)合體。1細(xì)菌細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)：細(xì)胞壁革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁：由多層肽聚糖和磷壁酸組成革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁：分外壁層（含脂多糖、脂蛋白）和內(nèi)壁層（1—2層肽聚糖）磷壁酸肽聚糖革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁二、細(xì)菌的細(xì)胞結(jié)構(gòu)

1細(xì)菌細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)：細(xì)胞壁細(xì)胞壁與革蘭氏染色：e.染色原理：第三步：酒精脫色，細(xì)胞壁成分和構(gòu)造不同，出現(xiàn)不同的反應(yīng)：G+菌：細(xì)胞壁厚，肽聚糖含量高，交聯(lián)度大，當(dāng)乙醇脫色時(shí)，肽聚糖因脫水而孔徑縮小，故結(jié)晶紫-碘復(fù)合物被阻留在細(xì)胞內(nèi)，細(xì)胞不能被酒精脫色，仍呈紫色。Gˉ菌：肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，乙醇脫色不能使其結(jié)構(gòu)收縮，因其含脂量高,乙醇將脂溶解，縫隙加大，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物溶出細(xì)胞壁，酒精將細(xì)胞脫色，細(xì)胞無色，沙黃復(fù)染后呈紅色。第一步：結(jié)晶紫使菌體著上紫色；第二步：碘和結(jié)晶紫形成大分子復(fù)合物，分子大，能被細(xì)胞壁阻留在細(xì)胞內(nèi)；

1細(xì)菌細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)：細(xì)胞膜a.概念：細(xì)胞膜是緊貼細(xì)胞壁內(nèi)側(cè)包圍細(xì)胞質(zhì)的一層柔軟、富有彈性的半透明薄膜；b.化學(xué)組成：磷脂，糖類，蛋白質(zhì)；

1細(xì)菌細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)：細(xì)胞膜c.功能：細(xì)胞內(nèi)外物質(zhì)交換和運(yùn)送；

在原核微生物中,參與生物氧化和能量產(chǎn)生；

與細(xì)胞壁及莢膜的合成有關(guān)；

是鞭毛著生的位點(diǎn)；d.膜結(jié)構(gòu)即細(xì)胞膜液態(tài)鑲嵌模型：膜是由球形蛋白與磷脂按照二維排列方式構(gòu)成的流體鑲嵌式，流動(dòng)的脂類雙分子層構(gòu)成了膜的連續(xù)體，而蛋白質(zhì)無規(guī)則地漂流在磷脂類的當(dāng)中。

1細(xì)菌細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)：細(xì)胞質(zhì)

a.概念：細(xì)胞膜內(nèi)除核區(qū)以外的細(xì)胞物質(zhì)，無色、透明、粘稠狀物質(zhì)，主要成分為水，蛋白質(zhì)，核酸，脂類、少量糖和無機(jī)鹽;

b.功能：有豐富的酶系，是營養(yǎng)物質(zhì)合成、轉(zhuǎn)化、代謝的場所;

1細(xì)菌細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)：細(xì)胞質(zhì)中的內(nèi)含物

a.氣泡：由蛋白質(zhì)膜構(gòu)成的充滿氣體的泡狀物，可含有幾個(gè)或多個(gè)氣泡；功能：調(diào)節(jié)細(xì)胞比重，以使其漂浮在合適的水層中;氣泡吸收空氣，空氣中的氧氣可供代謝需要。

b.顆粒狀內(nèi)含物:為細(xì)胞貯藏物，主要有：異染粒、聚β－羥丁酸、肝糖粒、淀粉粒、脂肪粒等。

1細(xì)菌細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)：核糖體

直徑約為20nm，由65%rRNA和35%核糖體蛋白組成；原核微生物70S核糖體由50S和30S亞基組成；是蛋白質(zhì)的合成場所。

1細(xì)菌細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)：核質(zhì)（或核質(zhì)體、原核、擬核）

大型環(huán)狀雙鏈DNA纖絲不規(guī)則地折疊或纏繞而構(gòu)成的無核膜、核仁的區(qū)域；

細(xì)菌DNA長度一般為1—3mm；

生長迅速的細(xì)菌在核分裂之后細(xì)胞往往來不及分裂,所以細(xì)胞中常有2~4個(gè)核，生長緩慢的細(xì)菌細(xì)胞中一般只有1~2個(gè)核，不在染色體復(fù)制時(shí)期一般是單倍體；

功能：負(fù)載遺傳信息。二、細(xì)菌的細(xì)胞結(jié)構(gòu)

２細(xì)菌細(xì)胞的特殊結(jié)構(gòu)特殊結(jié)構(gòu)：鞭毛、菌毛、性菌毛、莢膜、芽孢等

鞭毛：細(xì)菌表面由細(xì)胞內(nèi)生出的細(xì)長、波曲、毛發(fā)狀的結(jié)構(gòu)；

鞭毛的長度：一般為15—20μm，最長可達(dá)70μm；

鞭毛的直徑：為0.01—0.02μm；鞭毛的功能：細(xì)菌的“運(yùn)動(dòng)器官”，速率20—80μm/s；

不同細(xì)菌的鞭毛數(shù)目和著生位置不同，鞭毛數(shù)目一般一至數(shù)十條；２細(xì)菌細(xì)胞的特殊結(jié)構(gòu)特殊結(jié)構(gòu)：鞭毛鞭毛的著生方式：周生２細(xì)菌細(xì)胞的特殊結(jié)構(gòu)特殊結(jié)構(gòu)：鞭毛

主要由鞭毛蛋白構(gòu)成，還含有少量的多糖、脂類等；

鞭毛自細(xì)胞質(zhì)膜內(nèi)側(cè)的基粒長出穿過細(xì)胞壁延伸到細(xì)胞外部；

鞭毛的結(jié)構(gòu)包括鞭毛絲、鞭毛鉤和基體。２細(xì)菌細(xì)胞的特殊結(jié)構(gòu)特殊結(jié)構(gòu)：菌毛

細(xì)菌表面附屬物，比鞭毛數(shù)量多，長度短；吸附和粘附到宿主細(xì)胞表面，是細(xì)菌的毒力因子，如淋球菌粘附到泌尿道；

２細(xì)菌細(xì)胞的特殊結(jié)構(gòu)特殊結(jié)構(gòu)：性菌毛

僅見于少數(shù)革蘭陰性菌，比普通菌毛略微稍粗，一個(gè)菌體只有1~4根，通常由質(zhì)粒編碼；由蛋白質(zhì)組成，在細(xì)菌接合過程中，傳遞遺傳物質(zhì)ＤＮＡ；帶有性菌毛的細(xì)菌具有致育能力，稱為F+菌或者雄性菌。

２細(xì)菌細(xì)胞的特殊結(jié)構(gòu)特殊結(jié)構(gòu)：莢膜

細(xì)胞壁外的一層粘液性物質(zhì)，除水外，主要是多糖肽，蛋白質(zhì)，糖蛋白；生理功能：保護(hù)細(xì)胞，抗干燥，貯藏養(yǎng)料，抵御外界細(xì)胞對菌體的吞噬作用，有抗原性，與致病力有關(guān)；分四類：莢膜或大莢膜（厚度＞0.2μm）、微莢膜（厚度＜0.2μm）、粘液層、菌膠團(tuán)（多個(gè)細(xì)菌共有一個(gè)莢膜）。

２細(xì)菌細(xì)胞的特殊結(jié)構(gòu)特殊結(jié)構(gòu)：芽孢

概念：細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)形成一個(gè)圓形、橢圓形或卵圓形的、對不良環(huán)境有較強(qiáng)抵抗力的休眠體（危害：難被殺死）；芽孢類型：居中不膨大、末端不膨大、鼓槌狀、居中膨大、接種環(huán)形、紡錘形；環(huán)境條件適宜時(shí)萌發(fā)成一個(gè)新細(xì)胞。

２細(xì)菌細(xì)胞的特殊結(jié)構(gòu)特殊結(jié)構(gòu)：芽孢

衡量消毒滅菌是否徹底的重要指標(biāo)，121度12分鐘才能殺死嗜熱脂肪芽孢桿菌的芽孢；主要有兩個(gè)屬的菌可產(chǎn)生芽孢：好氧芽孢桿菌屬、梭菌屬，可用于菌種鑒定。

芽孢結(jié)構(gòu)好氧芽孢桿菌屬梭菌屬項(xiàng)目一細(xì)菌的構(gòu)造和形態(tài)觀察三、細(xì)菌的繁殖

一般為無性繁殖（二分裂法）。同形裂殖：裂殖后形成的子細(xì)胞大小相等；異形裂殖：分裂產(chǎn)生兩個(gè)大小不等的子細(xì)胞；細(xì)菌分裂過程：a.細(xì)胞增大，DNA分子復(fù)制，核分裂；b.細(xì)胞中部的細(xì)胞膜和細(xì)胞壁向內(nèi)生長形成橫隔壁；c.子細(xì)胞分離；桿菌的分裂球菌的分裂細(xì)菌分裂過程

1細(xì)菌的菌落特征菌落概念：在固體培養(yǎng)基上,由單個(gè)細(xì)胞繁殖形成的肉眼可見的子細(xì)胞群體；菌苔概念：大量細(xì)胞密集生長,結(jié)果長成的各“菌落”連接成一片；微生物種類不同菌落特征也不同，同種菌在不同培養(yǎng)條件下菌落特征也不盡相同；菌落的特征：包括大小、形狀、顏色、邊緣、質(zhì)地、透明度、光澤、表面、濕潤度等。四、細(xì)菌的培養(yǎng)特征項(xiàng)目一細(xì)菌的構(gòu)造和形態(tài)觀察菌苔

1細(xì)菌的菌落特征較小，較薄，較透明，較濕潤和滑潤感，一般散發(fā)出臭味；有莢膜的細(xì)菌多呈現(xiàn)光滑、透明狀；有鞭毛的細(xì)菌，由于具有運(yùn)動(dòng)性，菌落扁平，邊緣不規(guī)則；有芽孢的細(xì)菌，菌落粗糙、不透明、干燥。四、細(xì)菌的培養(yǎng)特征

２細(xì)菌的液體培養(yǎng)特征表現(xiàn)為渾濁生長、沉淀生長、表面生長四、細(xì)菌的培養(yǎng)特征

１細(xì)菌的致病性細(xì)菌的致病性(pathogenicity)概念：是指細(xì)菌能引起宿主被感染的能力，如傷寒沙門菌感染引起人類傷寒，而結(jié)核分枝桿菌則引起結(jié)核??；致病性原因：細(xì)菌的毒力大小、侵入的數(shù)量和適當(dāng)部位；毒力：侵襲力（胞外酶和莢膜對抗宿主細(xì)胞）、毒素（外毒素和內(nèi)毒素）。五、細(xì)菌的致病性及感染類型皮膚感染結(jié)核桿菌細(xì)菌在皮膚和毛發(fā)間細(xì)菌在內(nèi)部組織粘膜

２細(xì)菌的感染類型隱性感染：宿主抵抗力較強(qiáng)，侵入的病原菌毒力較弱或數(shù)量少，感染后癥狀較輕或無癥狀，可獲得牢固的免疫力；顯性感染：宿主免疫力較弱，侵入的致病菌數(shù)量較多、毒力較強(qiáng)，機(jī)體的組織細(xì)胞受到不同程度的損害并出現(xiàn)一系列的臨床癥狀和體征；帶菌狀態(tài)：致病菌在顯性感染或隱性感染后并未立即消失，在體內(nèi)持續(xù)存留一定時(shí)間，與宿主免疫力處于相對平衡狀態(tài)。五、細(xì)菌的致病性及感染類型葡萄球菌感染后化膿

１常見細(xì)菌舉例產(chǎn)氨短桿菌：非運(yùn)動(dòng)性，不形成孢子，革蘭氏染色陽性，工業(yè)上生產(chǎn)L-谷氨酸；醋酸桿菌：能使糖類和酒精氧化成醋酸的短桿菌，革蘭氏陰性，運(yùn)動(dòng)；乳酸菌：發(fā)酵碳水化合物產(chǎn)生大量乳酸的細(xì)菌的統(tǒng)稱，人體腸道中有重要生理功能的菌群；腸桿菌科：分布廣，寄主范圍大，無芽胞、多數(shù)有鞭毛，能運(yùn)動(dòng)的革蘭氏陰性菌；枯草芽孢桿菌：無莢膜，周生鞭毛，能運(yùn)動(dòng)，革蘭氏陽性菌，可形成芽孢，是α-淀粉酶和蛋白酶的重要生產(chǎn)菌；六、常見細(xì)菌乳酸菌大腸桿菌枯草芽孢桿菌七、項(xiàng)目實(shí)訓(xùn)：簡單染色法

１儀器－－光學(xué)顯微鏡目鏡：放大物象，鏡頭上標(biāo)有放大倍數(shù)物鏡：放大物象，鏡頭上標(biāo)有放大倍數(shù)，有低倍物鏡、高倍物鏡、油鏡三種載物臺：安放玻片標(biāo)本反光鏡：照明部分，反射光線底座：穩(wěn)定顯微鏡鏡臂：握鏡作用鏡筒：安放鏡頭，把目鏡和物鏡聚合起來粗調(diào)手輪：升降鏡筒，升降幅度較大，逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)上升鏡筒，順時(shí)針旋轉(zhuǎn)下降鏡筒微調(diào)手輪：升降鏡筒，升降幅度較小，逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)上升鏡筒，順時(shí)針旋轉(zhuǎn)下降鏡筒轉(zhuǎn)換器：安放和轉(zhuǎn)換物鏡鏡頭鏡筒轉(zhuǎn)換器項(xiàng)目一細(xì)菌的構(gòu)造和形態(tài)觀察顯微鏡結(jié)構(gòu)七、項(xiàng)目實(shí)訓(xùn)：簡單染色法

１儀器－－光學(xué)顯微鏡使用方法：a.調(diào)節(jié)光源：轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，使低倍鏡對準(zhǔn)通光孔，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器，使低倍鏡前端距載物臺約1-2厘米的距離；

b.低倍鏡觀察：將玻片標(biāo)本放好在載物臺上，將物鏡降至距標(biāo)本約0.5厘米時(shí)停止用左眼朝目鏡里觀察，同時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器，緩慢上升鏡筒，直到視野中出現(xiàn)物象，再用細(xì)調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)；

c.高倍鏡觀察：轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，使高倍鏡到位，調(diào)節(jié)光照明亮度，再微微調(diào)節(jié)細(xì)調(diào)節(jié)器，直到物象清晰；d.油鏡觀察：在標(biāo)本處滴加１滴香柏油，用細(xì)調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)油鏡至物像清晰。

七、項(xiàng)目實(shí)訓(xùn)：簡單染色法

１儀器－－光學(xué)顯微鏡使用注意事項(xiàng)：a.取送顯微鏡時(shí)，應(yīng)右手握住鏡臂，左手托住鏡座，輕拿輕放；

b.必須使用專用的擦鏡紙擦試目鏡、物鏡；c.鏡頭的切換一定要使用轉(zhuǎn)換器；d.轉(zhuǎn)動(dòng)粗、細(xì)調(diào)節(jié)器時(shí)，不要用力過猛，以防止機(jī)件損傷，調(diào)節(jié)失靈；e.載物臺要保持清潔干燥,嚴(yán)防鏡頭等被污染和腐蝕；f.在高倍鏡及油鏡下調(diào)節(jié)焦距時(shí)，切勿使用粗調(diào)節(jié)器，以免壓壞標(biāo)本，損壞物鏡。七、項(xiàng)目實(shí)訓(xùn)：簡單染色法

２基本原理利用單一染料對細(xì)菌進(jìn)行染色，常用堿性染料，電離時(shí)其分子染色部分帶正電，細(xì)菌細(xì)胞帶負(fù)電，染色后細(xì)菌很易著色，在顯微鏡下易于識別；常用染料：美藍(lán)、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅、孔雀綠和中性紅等。堿性復(fù)紅染色后鏡檢圖片七、項(xiàng)目實(shí)訓(xùn)：簡單染色法

３步驟與方法簡單染色步驟:涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→鏡檢具體方法：

a.涂片：取一塊干凈的載玻片,并在其中央滴一小滴無菌蒸餾水,接種環(huán)在酒精燈上殺菌后從斜面挑取少量菌種與玻片上的水滴混勻后,涂布成一均勻的薄層,涂布面一般以直徑1cm大小范圍為宜；

b.干燥與固定：涂片最好在室溫下自然干燥。亦可在酒精燈上微微加熱,加速水分蒸發(fā),但切勿過熱。固定時(shí),在酒精燈火焰外層盡快地來回通過2~3次,多為2~3s,以載玻片背面不覺燙手為宜,放置待冷后,進(jìn)行染色；

c.染色：在涂片上滴染色液一滴,使染色液覆蓋涂片,染色約1min；

d.水洗：斜置載玻片,在自來水龍頭下用小股水線沖洗,直至洗下的水呈無色為止；

e.干燥：用吸水紙吸去涂片邊緣的水珠,置室溫下自然干燥或微微加熱,以加快干燥速度。注意用吸水紙時(shí)切勿將菌體擦掉。

f.鏡檢：用顯微鏡從低倍鏡到高倍鏡觀察,并可用鉛筆繪出細(xì)菌形態(tài)圖。七、項(xiàng)目實(shí)訓(xùn)：簡單染色法

３步驟與方法接種環(huán)無菌操作技術(shù)八、項(xiàng)目實(shí)訓(xùn)：革蘭氏染色法

１基本原理項(xiàng)目一細(xì)菌的構(gòu)造和形態(tài)觀察細(xì)菌鑒定的重要方法，可將全部細(xì)菌分成革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌兩大類；革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)不同：

G+菌：細(xì)胞壁厚，肽聚糖含量高，交聯(lián)度大，當(dāng)乙醇脫色時(shí)，肽聚糖因脫水而孔徑縮小，故結(jié)晶紫-碘復(fù)合物被阻留在細(xì)胞內(nèi)，細(xì)胞不能被酒精脫色，仍呈紫色。

Gˉ菌：肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，乙醇脫色不能使其結(jié)構(gòu)收縮，因其含脂量高，乙醇將脂溶解，縫隙加大，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物溶出細(xì)胞壁，酒精將細(xì)胞脫色，細(xì)胞無色，沙黃復(fù)染后呈紅色。八、項(xiàng)目實(shí)訓(xùn)：革蘭氏染色法

１基本原理項(xiàng)目一細(xì)菌的構(gòu)造和形態(tài)觀察八、項(xiàng)目實(shí)訓(xùn)：革蘭氏染色法

２操作步驟涂片、干燥、固定初染：草酸銨結(jié)晶紫染色1min,用水沖洗媒染：碘液染色1min,用水沖洗脫色：95%乙醇脫色20-30s,至乙醇液不呈紫色復(fù)染：番紅復(fù)染1min,用水沖洗干燥后鏡檢八、項(xiàng)目實(shí)訓(xùn)：革蘭氏染色法

３染色結(jié)果八、項(xiàng)目實(shí)訓(xùn)：革蘭氏染色法

４染色影響因素掌握好乙醇脫色程度，若脫色過度，則陽性菌被誤染為陰性菌；而脫色不夠時(shí)，陰性菌被誤染為陽性菌；菌齡也影響染色結(jié)果，若細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)間太長，已死亡或自溶，導(dǎo)致細(xì)胞壁通透性的改變而呈現(xiàn)假陰性反應(yīng)。

一、放線菌的形態(tài)構(gòu)造

１放線菌的概述項(xiàng)目二放線菌的構(gòu)造和形態(tài)觀察介于細(xì)菌和真菌之間的單細(xì)胞G+原核生物，細(xì)胞構(gòu)造和細(xì)胞壁的化學(xué)組成與細(xì)菌相似；由分枝狀的菌絲組成，以外生孢子的形式繁殖,這些特征又與霉菌相似；放線菌菌落中的菌絲常從一個(gè)中心向四周輻射狀生長,因此叫放線菌。主要存在于含有機(jī)質(zhì)豐富的中性或偏堿性的土壤中，有泥腥味，腐生為主。一、放線菌的形態(tài)構(gòu)造

１放線菌的概述放線菌的應(yīng)用：a.能產(chǎn)生大量的、種類繁多的抗生素，到目前為止，已分離得到的放線菌產(chǎn)生的抗生素達(dá)4000種以上；b.生產(chǎn)維生素和酶；c.進(jìn)行甾體轉(zhuǎn)化、烴類發(fā)酵和污水處理；一、放線菌的形態(tài)構(gòu)造

１放線菌的概述放線菌的危害：a.有的放線菌能引起人和動(dòng)植物病害，如人類的皮膚病等；b.有的放線菌能使水和食品變味，或破壞棉毛織品和紙張等。動(dòng)物皮膚病一、放線菌的形態(tài)構(gòu)造

１放線菌的概述放線菌的種類鏈霉菌屬（treptomyces）：產(chǎn)生許多著名的抗生素，如鏈霉素、紅霉素、四環(huán)素等諾卡氏菌屬（Nocardia）：烴類發(fā)酵，污水處理，產(chǎn)生抗生素（如萬古霉素、頭孢菌等）小單孢菌屬（Micromonospora）：可產(chǎn)生多種抗生素，如慶大霉素、利福霉素等放線菌屬（Actinomyces)

：多為致病菌一、放線菌的形態(tài)構(gòu)造

2形態(tài)構(gòu)造大部分放線菌由分枝狀的菌絲組成，菌絲大多無隔膜，屬單細(xì)胞，G+。菌絲的粗細(xì)與細(xì)菌中的桿菌寬度相近（1μm左右）。細(xì)胞壁含胞壁酸、二氨基庚二酸，不含幾丁質(zhì)、纖維素。一、放線菌的形態(tài)構(gòu)造

2形態(tài)構(gòu)造菌絲（根據(jù)形態(tài)和功能不同分為）：基內(nèi)菌絲（營養(yǎng)菌絲）：產(chǎn)色素，吸收營養(yǎng)

氣生菌絲：可分化出繁殖結(jié)構(gòu)，即孢子絲

孢子絲：繁殖，直、波曲、螺旋，叢生、輪生

一、放線菌的形態(tài)構(gòu)造

2形態(tài)構(gòu)造放線菌孢子絲類型：直、波曲、螺旋，叢生、輪生

單輪生螺旋狀二、放線菌的繁殖

１放線菌的孢子項(xiàng)目二放線菌的構(gòu)造和形態(tài)觀察放線菌主要通過形成無性孢子的方式進(jìn)行繁殖，也可借菌絲斷片（液體培養(yǎng)時(shí)）進(jìn)行繁殖；無性孢子主要有三種：分生孢子、孢囊孢子和橫隔孢子；形態(tài)為圓、卵圓、柱狀等，表面光滑或粗糙；有的帶有毛刺、鞭毛，產(chǎn)色素。二、放線菌的繁殖

2分生孢子在氣生菌絲頂端形成成串或單個(gè)孢子，菌絲分裂形成。二、放線菌的繁殖

3孢囊孢子在氣生菌絲頂端或基內(nèi)菌絲頂端膨大或盤卷纏繞形成孢子囊，在孢子囊內(nèi)形成孢囊孢子；孢囊孢子：菌絲細(xì)胞在不同平面反復(fù)分裂，形成孢囊孢子，有的孢囊孢子可以叢毛運(yùn)動(dòng)。二、放線菌的繁殖

4橫隔孢子基內(nèi)菌絲或氣生菌絲橫隔分裂形成，孢子常為球桿狀，體積大小相似，又稱節(jié)孢子或粉孢子。二、放線菌的繁殖

5放線菌的生活史營養(yǎng)菌絲氣生菌絲孢子絲或孢囊分生孢子或孢囊孢子營養(yǎng)菌絲形成分生孢子的生活史形成孢囊孢子的生活史1不產(chǎn)生大量菌絲的菌種菌落特征如諾卡氏菌屬，形成的菌落，菌絲不發(fā)達(dá)，形成的菌落不致密，粘著力差，干燥，一般呈粉質(zhì)，不易挑起，挑之易碎。三、放線菌的菌落特征

三、放線菌的菌落特征

2產(chǎn)生大量分枝狀菌絲的菌種菌落特征如鏈霉菌屬，菌絲發(fā)達(dá)、細(xì)、分枝多而且相互纏繞，和培養(yǎng)基結(jié)合緊密牢固，形成的菌落質(zhì)地致密，表面呈絨狀，堅(jiān)實(shí)、干燥、多皺，菌落小而不蔓延，不易挑起或整個(gè)挑起。但當(dāng)氣生菌絲形成孢子絲、產(chǎn)生孢子后，菌落表面會發(fā)生變化，菌落呈絮狀、粉狀或顆粒狀。四、項(xiàng)目實(shí)訓(xùn)：放線菌的形態(tài)觀察

１實(shí)訓(xùn)目的項(xiàng)目二放線菌的構(gòu)造和形態(tài)觀察學(xué)習(xí)并掌握放線菌形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察方法；觀察放線菌的菌落特征、個(gè)體形態(tài)。

四、項(xiàng)目實(shí)訓(xùn)：放線菌的形態(tài)觀察

１基本原理放線菌是指能形成分枝絲狀體的一類革蘭氏陽性菌，常見放線菌大多能形成基內(nèi)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲可進(jìn)一步分化產(chǎn)生孢子絲及孢子；在顯微鏡下直接觀察時(shí)，氣生菌絲在上層，色暗；基內(nèi)菌絲在下層，較透明；孢子絲依種類的不同，有直、波曲、各種螺旋形或輪生；在油鏡下觀察，放線菌的孢子有球形、橢圓、桿狀或柱狀。

孢子絲四、項(xiàng)目實(shí)訓(xùn)：放線菌的形態(tài)觀察

２插片法放線菌的形態(tài)觀察插片法：將放線菌接種在瓊脂平板上，插上滅菌蓋玻片后培養(yǎng)，使放線菌菌絲沿著培養(yǎng)基表面與蓋玻片的交接處生長而附著在蓋玻片上。觀察時(shí)，輕輕取出蓋玻片，置于載玻片上直接鏡檢。這種方法可觀察到放線菌自然生長狀態(tài)下的特征，而且便于觀察不同生長期的形態(tài)。

四、項(xiàng)目實(shí)訓(xùn)：放線菌的形態(tài)觀察

２插片法放線菌的形態(tài)觀察插片法操作步驟：a)倒平板：取融化并冷卻至大約50℃的高氏Ⅰ號瓊脂約20mL倒平板，凝固待用；b)接種：用接種環(huán)挑取菌種斜面培養(yǎng)物（孢子）在瓊脂平板上劃線接種；c)插片：以無菌操作用鑷子將滅菌的蓋玻片以大約45°角插入瓊脂內(nèi)（插在接種線上），插片數(shù)量可根據(jù)需要而定；d)培養(yǎng)：將插片平板倒置，28℃培養(yǎng)，通常４~６d。e)鏡檢：用鑷子小心拔出蓋玻片，擦去背面培養(yǎng)物，然后將有菌的一面朝下蓋在載玻片上，直接鏡檢。

四、項(xiàng)目實(shí)訓(xùn)：放線菌的形態(tài)觀察

２插片法放線菌的形態(tài)觀察插片法鏡檢結(jié)果（鏈霉菌）：

四、項(xiàng)目實(shí)訓(xùn)：放線菌的形態(tài)觀察

３插片浸染法放線菌的形態(tài)觀察插片浸染法四、項(xiàng)目實(shí)訓(xùn)：放線菌的形態(tài)觀察

３插片浸染法放線菌的形態(tài)觀察插片浸染法鏡檢結(jié)果四、項(xiàng)目實(shí)訓(xùn)：放線菌的形態(tài)觀察

４印片染色法放線菌的形態(tài)觀察將要觀察的放線菌的菌落或菌苔，先印在蓋玻片上，載片上滴加0.1％美藍(lán)染液，蓋片印片一面朝下蓋在載片上，鏡檢；該法主要用于觀察孢子絲的形態(tài)、孢子的排列及其形狀等，方法簡便、但形態(tài)特征可能有所改變。印片染色法鏡檢菌絲和孢子１００×項(xiàng)目三其它原核微生物一、螺旋體

1螺旋體的概述螺旋體（spirochete）是一類細(xì)長、柔軟、彎曲呈螺旋狀、運(yùn)動(dòng)活潑的原核細(xì)胞型微生物，以橫向二分分裂繁殖；對抗生素敏感；依靠