兔出血癥防控技術(shù)規(guī)程

1兔出血癥防控技術(shù)規(guī)程本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了兔出血癥的預(yù)防、診斷和疫情控制等要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于兔出血癥的預(yù)防、實(shí)驗(yàn)室診斷、臨床診斷、流行病學(xué)調(diào)查和兔出血癥暴發(fā)后的疫情控制，也適用于分離毒株的鑒定和對(duì)無特定病原體(SPF)兔的監(jiān)控。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB16548病害動(dòng)物和病害動(dòng)物產(chǎn)品生物安全處理規(guī)程N(yùn)Y/T541動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)采樣方法NY/T572兔病毒性出血病血凝和血凝抑制試驗(yàn)方法NY/T3075畜禽養(yǎng)殖場消毒技術(shù)NY5131無公害食品肉兔飼養(yǎng)獸醫(yī)防疫準(zhǔn)則DB32/T1458兔出血癥病毒的檢測RT-PCR方法3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1兔出血癥病毒rabbithemorrhagicdiseasevirus（RHDV）杯狀病毒科（Caliciviridae）、兔病毒屬（Lagovirus）病毒。含有一條單股正鏈RNA，由7437個(gè)核苷酸組成，只有2個(gè)開放閱讀框架(ORF)，并由ORF1的3′端部分序列編碼RHDV衣殼蛋白VP60，其基因片段長度為1740bp，共編碼579個(gè)氨基酸。3.2兔出血癥rabbithemorrhagicdisease（RHD）由兔出血癥病毒引起的一種以急性、高度傳染性、大面積死亡為特征的兔傳染病。4預(yù)防4.1生物安全管理4.1.1養(yǎng)殖場條件養(yǎng)殖場應(yīng)符合NY5131規(guī)定的條件。4.1.2隔離應(yīng)對(duì)引進(jìn)家兔進(jìn)行隔離觀察15d～30d，經(jīng)檢查健康合格后，方可將引進(jìn)家兔與本場家兔一起飼養(yǎng)。4.1.3清掃和清洗2應(yīng)對(duì)兔舍、車輛等用具、籠具等設(shè)備、兔場環(huán)境等進(jìn)行定期清掃和清洗。4.1.4消毒可參照NY/T3075-2017進(jìn)行。養(yǎng)殖場應(yīng)建立嚴(yán)格的衛(wèi)生（消毒）管理制度，并定期對(duì)兔舍、車輛等用具、籠具等設(shè)備、飲水及兔場環(huán)境等進(jìn)行定期嚴(yán)格消毒；兔場出、入口處應(yīng)設(shè)置消毒池，內(nèi)置有效消毒劑；兔舍門口應(yīng)設(shè)置消毒盆、消毒墊等，并放置消毒劑。4.1.5防鼠、防蟲、防蠅兔舍內(nèi)應(yīng)有防鼠、防蟲、防蠅等裝置。4.2免疫監(jiān)測定期隨機(jī)采集兔場家兔血液樣品，制備血清，用紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)（HI）檢測血清中RHDV抗體，具體方法可參照NY/T572-2016進(jìn)行。如群體血清陽性率低于85%，應(yīng)實(shí)施疫苗免疫接種。4.3免疫接種4.3.1疫苗應(yīng)使用經(jīng)獸醫(yī)主管部門批準(zhǔn)使用的含有兔出血癥病毒抗原的疫苗。4.3.2免疫程序一般情況下，應(yīng)按疫苗的使用說明書規(guī)定的程序進(jìn)行免疫，也可參照附錄A實(shí)施。5診斷5.1診斷流程依據(jù)兔出血癥流行病學(xué)特點(diǎn)、臨床癥狀、病理學(xué)變化做出初步診斷,然后經(jīng)病原學(xué)檢驗(yàn)進(jìn)行確診。5.2流行病學(xué)特點(diǎn)兔出血癥流行病學(xué)有以下特點(diǎn)：a)易感動(dòng)物該病僅感染兔。小于5周齡的兔子感染后不易死亡，無明顯臨床癥狀；2月齡以上家兔感染后，死亡率高達(dá)70%～90%。b)傳染源感染RHDV的兔子是主要的傳染源，包括感染病死兔和帶毒未死的兔子。c)傳播途徑病毒通過直接和間接途徑傳播。病死兔和帶毒兔通過其排泄物、分泌物、血液、兔毛等污染飲水、飼料、用具、籠具、空氣等，引起易感兔發(fā)病和疫病流行。人、鼠、蚊、蠅和其它畜禽等也可機(jī)械性地傳播病毒。5.3臨床癥狀兔出血癥有以下臨床癥狀：a)最急性型常發(fā)生在非疫區(qū)或流行初期?；纪盟狼盁o任何明顯癥狀，常表現(xiàn)為突然死亡，死后勾頭弓背或“角弓反張”，少數(shù)兔鼻孔流出帶有泡沫的血液。b)急性型病程一般12h～48h，患兔精神萎頓、不愛活動(dòng)、食欲減退、喜飲水、呼吸迫促、體溫達(dá)41℃。臨死前表現(xiàn)狂躁，倒地后，四肢劃動(dòng)，抽搐或慘叫，很快死亡。少數(shù)死兔鼻孔流出少量帶有泡沫的血液。c)亞急性型多發(fā)于2月齡以內(nèi)的幼兔，兔體消瘦，被毛焦枯無光澤，病程2d～3d或更長，隨后死亡。5.4病理學(xué)變化3最急性、急性病死兔剖檢時(shí)可見全身實(shí)質(zhì)器官淤血、出血。氣管軟骨環(huán)淤血，氣管內(nèi)含帶有泡沫的血液；胸腺水腫，并有大小不等的出血點(diǎn)；肺臟出血、淤血、水腫、有大小不等的出血點(diǎn)；肝臟淤血、腫大、質(zhì)地變脆、色澤變淡；脾臟腫大、淤血，呈黑紫色；腎臟淤血、出血；十二指腸、空腸粘膜出血。5.5病原學(xué)檢驗(yàn)5.5.1樣本采集、保存和運(yùn)輸樣本采集、保存和運(yùn)輸參照NY/T541-2016執(zhí)行，并按照GB16548處理病死家兔。5.5.2紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)（HA）紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)可參照NY/T572-2016進(jìn)行。5.5.3核酸識(shí)別技術(shù)—RT-PCR方法核酸識(shí)別技術(shù)可參照DB32/T1458-2009進(jìn)行。5.5.4非免疫兔接種技術(shù)非免疫兔接種技術(shù)參見附錄B。5.6結(jié)果判定5.6.1疑似兔出血癥符合5.2和5.3或/和5.4的。5.6.2確診符合5.6.1且符合5.5.2或者5.5.3或者5.5.4的。6疫情控制6.1隔離封鎖發(fā)生兔出血癥時(shí)，應(yīng)緊急隔離封鎖發(fā)病兔場，嚴(yán)禁兔場人員，特別是飼養(yǎng)及管理人員互相串舍，同時(shí)嚴(yán)禁家兔相關(guān)物品流通。6.2消毒應(yīng)對(duì)病毒污染和可能被污染的一切場所、用具和物品等進(jìn)行清潔、消毒，并對(duì)養(yǎng)殖場實(shí)施滅鼠、滅蚊蠅等防控措施。6.3病死家兔處理按照GB16548處理病死家兔。6.4緊急接種當(dāng)發(fā)生兔出血癥時(shí)，應(yīng)對(duì)其他未死亡家兔進(jìn)行緊急預(yù)防接種。用經(jīng)獸醫(yī)主管部門批準(zhǔn)使用的含有兔出血癥病毒抗原的疫苗，2～4倍劑量/只，頸部皮下注射或用兔出血癥病毒高免血清，4毫升～6毫升/只，頸部皮下注射，7天～10天后，再注射一次。4附錄A（規(guī)范性附錄）免疫程序A.1繁殖種兔群A.1.1繁殖母兔應(yīng)每年2次定期免疫接種。a)用符合規(guī)定的疫苗，2倍劑量/只，頸部皮下注射；b)6個(gè)月后，用符合規(guī)定的疫苗，2倍劑量/只，頸部皮下注射。A.1.2種公兔應(yīng)每年2次定期免疫接種。a)用符合規(guī)定的疫苗，1個(gè)劑量/只，頸部皮下注射；b)6個(gè)月后，用符合規(guī)定的疫苗，1個(gè)劑量/只，頸部皮下注射。A.2非繁殖青年、成年兔群應(yīng)每年2次定期免疫接種。a)用符合規(guī)定的疫苗，1個(gè)劑量/只，頸部皮下注射；b)6個(gè)月后，用符合規(guī)定的疫苗，1個(gè)劑量/只，頸部皮下注射。A.3肉兔A.3.170日齡出欄的肉兔在家兔35日～40日齡時(shí)，用符合規(guī)定的疫苗，2倍劑量/只，頸部皮下注射。A.3.270日齡以上出欄的肉兔a)在家兔35日～40日齡時(shí)，用符合規(guī)定的疫苗，2倍劑量/只，頸部皮下注射；b)在家兔60日～65日齡時(shí)，用符合規(guī)定的疫苗，1個(gè)劑量/只，頸部皮下注射。A.4仔、幼兔a)35日～40日齡用符合規(guī)定的疫苗，2倍劑量/只，頸部皮下注射；b)60日～65日齡用符合規(guī)定的疫苗，1個(gè)劑量/只，頸部皮下注射。5附錄B（規(guī)范性附錄）非免疫兔接種技術(shù)B.1材料B.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物2月齡以上未免疫兔出血癥疫苗的臨床健康家兔，兔出血癥病毒抗體HI效價(jià)≦B.1.2兔出血癥病死兔肝臟懸液取肝臟組織，剪碎，按1:10加入PBS，勻漿，反復(fù)凍融3次，于-20℃保存?zhèn)溆?。B.1.3疑似兔出血癥病死兔肝臟懸液處理方法同B.1.2。B.2接種方法用兔出血癥病死兔肝臟懸液頸部皮下注射實(shí)驗(yàn)動(dòng)物5只，1mL/只，作為陽性對(duì)照組；用疑似兔出血癥病死兔肝臟懸液頸部皮下注射實(shí)驗(yàn)動(dòng)物5只，1mL/只，作為疑似樣品組，同時(shí)設(shè)立不接種肝臟組織的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物5只，作為陰性對(duì)照組，分別于隔離器中飼養(yǎng)，觀察7日，記錄試驗(yàn)兔臨床癥狀、死亡情況和病理學(xué)變化，并采集病死兔肝臟樣品做紅細(xì)胞凝集（HA）試驗(yàn)，具